王　艷,龍彩云,夏佳恒,楊安樹(shù),*,陳紅兵

(1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047;2.南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,江西南昌 330047)

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不同酶水解對(duì)雞蛋清蛋白降解和潛在致敏性的影響

王艷1,2,龍彩云1,2,夏佳恒1,2,楊安樹(shù)1,2,*,陳紅兵1,2

(1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047;2.南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,江西南昌 330047)

酶水解是降低食物過(guò)敏原致敏性的一種常用手段,本文分別利用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶水解雞蛋清蛋白,通過(guò)三羥甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE),并結(jié)合水解度(鄰苯二甲醛法)分析監(jiān)測(cè)蛋清蛋白的酶解過(guò)程,進(jìn)一步利用制備的兔抗蛋清蛋白多克隆抗體血清和雞蛋過(guò)敏患者血清池評(píng)估酶解產(chǎn)物的抗原性和致敏性。結(jié)果表明:木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶能夠有效的水解蛋清蛋白,并且所得酶解產(chǎn)物的抗原性和致敏性較低,其中,木瓜蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物的抗原性降低了59.23%,致敏性降低了4.91%;堿性蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物的抗原性降低了57.61%,致敏性降低了4.55%。因此,木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶對(duì)雞蛋清蛋白降解及致敏性降低方面均有顯著影響。

蛋清蛋白,酶水解,雞蛋過(guò)敏,降解,潛在致敏性

我國(guó)的雞蛋產(chǎn)量位居世界第一,雞蛋營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,蛋白含量豐富,其蛋清蛋白約占蛋清質(zhì)量的10%～12%,含有人體所必需的多種氨基酸,是一種理想的蛋白質(zhì)資源[1]。但是,雞蛋也是一種常見(jiàn)的過(guò)敏食物,位居食物過(guò)敏排行榜的第二位[2-5]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查表明,雞蛋過(guò)敏占嬰幼兒和兒童食物過(guò)敏的35%[6],占成年人食物過(guò)敏的12%[7]。目前公認(rèn)的雞蛋主要過(guò)敏原有6種,分別是溶菌酶(Lys,Gal d4)、卵類黏蛋白(OVM,Gal d1)、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白(OVT,Gal d3)、卵白蛋白(OVA,Gal d2)、α-卵黃蛋白(α-livetin,Gal d5)和卵黃糖蛋白(YGP42,Gal d6)[8-10],其中卵類粘蛋白(Gal d1)、卵白蛋白(Gal d2)、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白(Gal d3)和溶菌酶(Gal d4)存在于蛋清中[11-13]。迄今為止,雞蛋過(guò)敏尚無(wú)特效療法,嚴(yán)格避免食用含雞蛋的食物是過(guò)敏患者的最佳選擇。但完全避免食用雞蛋很困難;而且容易造成雞蛋過(guò)敏患者營(yíng)養(yǎng)不良和膳食結(jié)構(gòu)紊亂。目前,主要通過(guò)熱處理、酶解法、糖基化反應(yīng)及發(fā)酵等加工方法降低雞蛋致敏性,在這些加工方法中,酶解被認(rèn)為是降低食物致敏性最有效的方法之一[14]。

蛋白質(zhì)酶解是利用蛋白水解酶在一定條件下對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行催化水解,使大分子蛋白降解成不同鏈長(zhǎng)的小分子,引起蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化。研究發(fā)現(xiàn)酶解不僅可以降低雞蛋蛋清蛋白致敏性,而且酶解生成的寡肽更易于被人體消化吸收,大大提高了雞蛋蛋清蛋白在食品工業(yè)中的應(yīng)用范圍[15-16],與原蛋白相比,水解產(chǎn)物的溶解性、起泡性及黏度等功能特性得到了改善,且具有降血脂、降血壓和抗氧化等生理活性[17-20]。當(dāng)前,關(guān)于雞蛋清蛋白酶解產(chǎn)物的功能性和生理活性研究較多,而針對(duì)其酶解產(chǎn)物的抗原性和致敏性研究還相當(dāng)缺乏。

因此本文利用不同蛋白酶水解蛋清蛋白,通過(guò)鄰苯二甲醛法和Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)酶解產(chǎn)物的水解度和分子量分布;同時(shí),以蛋清蛋白為抗原,通過(guò)皮下多點(diǎn)注射免疫日本大耳兔,制備出特異性較高的抗蛋清蛋白多克隆抗體血清;進(jìn)一步利用制備的多抗血清和過(guò)敏患者血清池評(píng)估水解產(chǎn)物的抗原性和致敏性,篩選出降低血清蛋白致敏性效果較佳的蛋白酶。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

紅殼雞蛋江西省南昌市青山湖區(qū)天虹商場(chǎng);日本大耳兔飼養(yǎng)于江西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)站,飼養(yǎng)過(guò)程中確保食物中不含有任何雞蛋成分,飼養(yǎng)一周無(wú)異常后,準(zhǔn)備免疫,免疫之前采集陰性血清;雞蛋過(guò)敏患者血清廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)品、40%凝膠貯液、小分子蛋白Marker、二硫蘇糖醇(DTT)上海生工;弗氏完全佐劑、弗式不完全佐劑、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗兔IgG二抗、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、鄰苯二甲醛(OPA)、生物素標(biāo)記羊抗人IgE二抗Sigma公司;中性蛋白酶、堿性蛋白酶諾維信公司;HRP-鏈霉親和素欣博盛公司;蛋清蛋白的CAP、校正用CAP瑞典法瑪雅公司;其它常規(guī)試劑均為分析純。

Mode 680型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、蛋白電泳儀美國(guó)BIO-RAD公司;HJ-A6型恒溫磁力攪拌水浴鍋常州邁科諾儀器有限公司;ImmunoCAP儀器瑞典法瑪雅公司;TU-1901型紫外分光光度計(jì)日本日立公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1蛋清蛋白分離方法參考佟平[21]并稍作改進(jìn)。取紅殼雞蛋,用分蛋器分離蛋清與蛋黃,玻璃棒輕攪至蛋清中無(wú)膠狀物質(zhì)后,加入等體積的蒸餾水稀釋,用1 mol/L HCl調(diào)pH至6.0,除去蛋清中的卵黏蛋白。4 ℃下連續(xù)攪拌3 h,2500×g下離心30 min,取上清,同時(shí)利用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)其蛋白濃度,于-20 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2抗蛋清蛋白多克隆抗體的制備方法參考楊苗等[22]并稍作改進(jìn)。選取2只8周齡大的雄性日本大耳兔,質(zhì)量約為25 kg,分別標(biāo)記為1#和2#,首次免疫將弗氏完全佐劑(CFA)與等體積蛋清蛋白乳化后于背部皮下多點(diǎn)注射免疫兔子,免疫劑量為200 μg/只,之后每隔兩周以弗氏不完全佐劑與等體積蛋清蛋白乳化后免疫兔子,劑量為200 μg/只,共免疫6次。前期采用耳緣靜脈取血,在第12周對(duì)2只兔子進(jìn)行股動(dòng)脈采血,每次取血后分離血清,利用間接ELISA方法和考馬斯亮藍(lán)法分別測(cè)定大耳兔血清抗體效價(jià)和濃度。效價(jià)指的是抗原抗體反應(yīng)時(shí),出現(xiàn)明顯反應(yīng)終點(diǎn)的抗血清或抗原制劑的最高稀釋度。

1.2.3蛋清蛋白的酶解方法參考金曉君[23]并稍作改進(jìn)。將蛋清用0.02 mol/L pH為7.2磷酸鹽緩沖液稀釋至一定濃度后,用2 mol/L NaOH調(diào)pH至10.0,轉(zhuǎn)入沸水浴中使其迅速升溫至85 ℃,并水浴保溫30 min,取出,冷卻至室溫。選用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶為水解酶,以5000 U/g的比例加入蛋白水解酶,分別在酶各自最適溫度及最適pH下(見(jiàn)表1)進(jìn)行水解,一定時(shí)間后取出樣品,并高溫鈍化酶以終止水解反應(yīng)。1個(gè)酶活力單位指在測(cè)定條件下,每分鐘水解酪蛋白釋放出的三氯乙酸可溶物在275 nm波長(zhǎng)的吸光度與1 μg酪氨酸的吸光度相當(dāng)時(shí)所需的酶量,以(U/g或U/mL)表示。

表1　蛋白酶活性、最適溫度及pH

1.2.4酶解蛋清蛋白水解度和分子量的測(cè)定

1.2.4.1酶解蛋清蛋白水解度的測(cè)定酶解過(guò)程中水解度的測(cè)定采用Church[24]的鄰苯二甲醛(OPA)法并加以改進(jìn)。具體方法為:以精氨酸作為標(biāo)準(zhǔn)品,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取400 μL樣品溶液加入到盛有3 mL OPA的離心管中,混勻5 s,避光反應(yīng)2 min,同時(shí)做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn),未水解樣代替,340 nm下測(cè)定吸光值,按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算水解度如下:

h=(ht-hc)×DFDH(%)=h/htot×100

式中,ht-樣品的吸光度從標(biāo)曲上查得的濃度;hc-對(duì)照品(未水解樣品)的吸光度從標(biāo)曲上查得的濃度;htot-全部酶解液的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的濃度;DH-樣品的水解度;DF-樣品的稀釋倍數(shù)。

1.2.4.2酶解蛋清蛋白分子量的測(cè)定方法參考Kasera R[25]和Sch?gger H[26]并稍作改進(jìn)。酶解產(chǎn)物分子量通過(guò)Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè),具體步驟如下:分別取10 μL不同時(shí)間點(diǎn)收集的水解物與等體積的上樣緩沖液混勻,于恒溫孵育器中100 ℃孵育5 min,取出離心,上樣15 μL進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE電泳。濃縮膠的電泳條件為30 V、1 h,分離膠(夾層膠和致密膠)的電泳條件為100 V、2 h。

1.2.5蛋清蛋白過(guò)敏患者血清池的構(gòu)建方法參考Johansson S G O[27]。從收集的食物過(guò)敏患者血清中挑選出14個(gè)疑似雞蛋過(guò)敏患者血清,采用ImmunoCAP儀器分別測(cè)定這些血清對(duì)蛋清蛋白的特異性IgE值。將呈輕度過(guò)敏以上的血清按等體積混合,得到蛋清蛋白過(guò)敏患者血清池。另外,陰性對(duì)照的血清取自對(duì)雞蛋不過(guò)敏的正常健康者。

1.2.6抗原性與致敏性的評(píng)估采用競(jìng)爭(zhēng)抑制 ELISA 檢測(cè)不同的蛋清蛋白酶解產(chǎn)物與兔多克隆抗體 IgG和過(guò)敏患者血清IgE的結(jié)合能力?？乖訧gG的檢測(cè)方法參考Tong[28],致敏性IgE檢測(cè)方法參考Ma[29]。

IgG(或IgE)抑制率(%)=(1-B/B0)×100

B:有競(jìng)爭(zhēng)蛋白對(duì)應(yīng)的OD值;B0:無(wú)競(jìng)爭(zhēng)蛋白時(shí)的OD值。

抑制率越高時(shí),表明該競(jìng)爭(zhēng)蛋白殘余的IgG/IgE反應(yīng)性越強(qiáng),即抗原性/致敏性越強(qiáng)。

1.2.7數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次,數(shù)據(jù)分析采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件,如不特別說(shuō)明,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。統(tǒng)計(jì)顯著性分析用單因素方差分析,以p≤0.05表明具有顯著性。不同的小寫字母(柱狀圖上方)表示顯著性差異。

2　結(jié)果與討論

2.1抗蛋清蛋白兔多克隆抗體的制備

免疫過(guò)程中抗血清效價(jià)的變化見(jiàn)圖1。從圖1中可知,隨著免疫次數(shù)的增加,抗血清效價(jià)也隨之上升,到第十周時(shí)(p≤0.05),抗血清效價(jià)將不再上升,因此,在第12周對(duì)2只兔子進(jìn)行股動(dòng)脈采血,分離血清,最終得到血清抗體的效價(jià)為50000。

圖1　免疫過(guò)程中抗體效價(jià)變化Fig.1　Change of the antibody titer during immunization

抗原的純度越高,一般制備的多克隆抗體的效價(jià)越高[21]。本研究中,由于蛋清蛋白不是單一蛋白,而是多種蛋白的混合物[12]。因此所制得的多克隆抗體效價(jià)達(dá)50000。同時(shí),抗原的免疫劑量也能影響免疫抗體的產(chǎn)生,劑量過(guò)低,不能引起足夠強(qiáng)的免疫刺激;若免疫劑量過(guò)多,有可能引起免疫耐受,或者導(dǎo)致動(dòng)物的死亡。在0～8周時(shí),抗體的效價(jià)隨著免疫劑量的增加而增高。免疫劑量與免疫周期也有關(guān),兩次注射的間隔時(shí)間若太短,則起不到再次免疫的效果,太長(zhǎng)則又失去了前一次激發(fā)的敏感作用。在本實(shí)驗(yàn)中采取隔兩周對(duì)家兔進(jìn)行一次免疫。

2.2Tricine-SDS-PAGE電泳分析結(jié)果

蛋清蛋白經(jīng)4種蛋白酶水解不同時(shí)間后,利用Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)酶解產(chǎn)物分子量分布,結(jié)果如圖2所示。

圖2顯示,加入蛋白酶酶解后,泳道2中的高聚物被迅速酶解,木瓜蛋白酶水解時(shí),蛋清蛋白在10 min內(nèi)被迅速水解成分子量小于25 ku的片段,隨著酶解的進(jìn)行,在25 ku附近出現(xiàn)一條新的條帶,并逐漸清晰,該片段可能是由于酶解形成的小片段通過(guò)疏水相互作用聚集形成。同樣,堿性蛋白酶水解時(shí),蛋清蛋白也被迅速降解、形成大量分子量介于3.5～30 ku的小分子肽段。中性蛋白酶水解時(shí),酶解產(chǎn)物電泳圖顯示,從濃縮膠與分離膠界面到5 ku范圍內(nèi),夾層膠與濃縮膠之間仍然有少量的聚集物,不同酶解時(shí)間所得產(chǎn)物均呈現(xiàn)出模糊條帶,這表明水解形成了一系列分子量介于5～30 ku的多肽。在胃蛋白酶的酶解產(chǎn)物電泳圖中,蛋清蛋白主要被酶解成一系列低于45 ku的片段,但仍有一個(gè)分子量約40 ku的多肽片段經(jīng)過(guò)180 min的酶解,仍然抗胃蛋白酶水解,這與Thomas[30]、Dearman[31]、Takagi[32]、Martos[33]等的研究結(jié)果一致,表明卵白蛋白經(jīng)胃蛋白酶水解后,會(huì)產(chǎn)生40 ku的抗酶解片段。由Tricine-SDS-PAGE電泳圖的直觀反映,木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶對(duì)蛋清蛋白的酶解效果最好。然而電泳只能從一個(gè)側(cè)面反映過(guò)敏蛋白分子的降解效果,不能反映決定致敏性的過(guò)敏原表位的變化。

圖2　不同酶水解蛋清蛋白所得產(chǎn)物的Tricine-SDS-PAGE電泳圖Fig.2　Tricine-SDS-PAGE analysis of hydrolysates of egg white注:A:木瓜蛋白酶;B:堿性蛋白酶;C:中性蛋白酶;D:胃蛋白酶;泳道1:小分子Marker;泳道2～9:酶解時(shí)間分別為0、10、30、60、90、120、150、180 min的產(chǎn)物。

2.3蛋清蛋白酶解產(chǎn)物水解度的變化

蛋清蛋白經(jīng)木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胃蛋白酶水解后的水解度變化如圖3所示,不同蛋白酶在其適宜條件下對(duì)蛋清蛋白的水解程度不同,隨著酶解反應(yīng)的進(jìn)行,水解產(chǎn)物濃度增加,底物濃度減少,酶活性降低,水解度達(dá)到整個(gè)反應(yīng)進(jìn)程的90%以上時(shí),水解度就不再有大的變化。由圖3可知,木瓜蛋白酶酶解產(chǎn)物的水解度最高,為27.6%,其次是堿性蛋白酶,為24.77%,中性蛋白酶與胃蛋白酶水解產(chǎn)物相當(dāng),分別為12.37%和11.66%。此水解度結(jié)果與小分子電泳圖結(jié)果相符合。

圖3　四種蛋白酶酶解蛋清蛋白水解度的變化Fig.3　Hydrolysis degree of hydrolysates of egg white

2.4酶解產(chǎn)物與IgG的結(jié)合能力

采用競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA法評(píng)估加熱處理和酶水解對(duì)蛋清蛋白IgG結(jié)合能力的影響,結(jié)果見(jiàn)圖4所示。

圖4　熱處理(A)和蛋白酶水解(B)對(duì)蛋清蛋白IgG結(jié)合能力的影響Fig.4.　Effect of heat-treatment(A) and enzymatic hydrolysis(B)on IgG binding of egg white

圖4(A)顯示,蛋清蛋白在85 ℃下熱處理30 min,蛋白濃度在1 mg/mL時(shí)的抑制率小于40%,表明蛋清蛋白經(jīng)熱處理后,其抗原性顯著降低,再經(jīng)酶水解后,抗原性進(jìn)一步降低,則酶解產(chǎn)物無(wú)法與天然蛋清蛋白競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),因此,本研究利用熱處理的蛋清蛋白包被酶標(biāo)板,與酶解產(chǎn)物做競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),計(jì)算其抑制率(圖4B)。由圖4(B)可知,木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶對(duì)蛋清蛋白的抑制率顯著(p≤0.05)低于其他兩種蛋白酶水解產(chǎn)物,抑制率越低,說(shuō)明木瓜蛋白酶與堿性蛋白酶水解對(duì)蛋清蛋白抗原性影響較大,抗原性降低程度較大。木瓜蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物抗原性降低了59.23%,堿性蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物抗原性降低了57.61%,中性蛋白酶和胃蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物抗原性分別降低了9.17%和32.75%。

2.5酶解產(chǎn)物與IgE的結(jié)合能力

用競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA檢測(cè)各種蛋清蛋白酶解產(chǎn)物與雞蛋過(guò)敏患者血清的IgE結(jié)合能力,結(jié)果如圖5所示。從圖5中可以得出,利用木瓜蛋白酶與堿性蛋白酶水解蛋清蛋白,其水解產(chǎn)物的致敏性低于中性蛋白酶與胃蛋白酶水解蛋清蛋白產(chǎn)物的致敏性。其中木瓜蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物致敏性降低了4.91%,堿性蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物致敏性降低了4.55%。

競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA結(jié)果與Tricine-SDS-PAGE電泳圖和水解度呈現(xiàn)較為一致的檢測(cè)結(jié)果,利用木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶水解蛋清蛋白,能有效降低酶解產(chǎn)物的抗原性和致敏性。雖然木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶顯示了較其他蛋白酶好的降低致敏性的效果,但蛋清蛋白的致敏性依然存在,因此后續(xù)研究可以采用多酶水解或與其他方法配合使用,以達(dá)到蛋清蛋白的完全脫敏。

圖5　不同蛋白酶酶解對(duì)蛋清蛋白IgE結(jié)合能力的影響Fig.5　Effect of enzymatic hydrolysis on IgE binding of egg white

3　結(jié)論

探討了蛋清蛋白水解過(guò)程中不同蛋白酶對(duì)其降解和潛在致敏性的影響。蛋清蛋白經(jīng)加熱前處理后,再利用蛋白酶水解,隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),蛋清蛋白的水解度逐漸增加,對(duì)四種蛋白酶而言,蛋清蛋白的降解程度以木瓜蛋白酶最高,其次是堿性蛋白酶,中性蛋白酶與胃蛋白酶相當(dāng)。不同蛋白酶水解后,蛋清蛋白的抗原性和致敏性均降低,其中木瓜蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物抗原性降低了59.23%,致敏性降低了4.91%,堿性蛋白酶水解蛋清蛋白后產(chǎn)物抗原性降低了57.61%,致敏性降低了4.55%。

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Effects of enzymatic hydrolysis by different enzyme on the degradation and potential allergenicity of egg white protein

WANG Yan1,2,LONG Cai-yun1,2,XIA Jia-heng1,2,YANG An-shu1,2,*,CHEN Hong-bing1,2

(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology,Nanchang University,Nanchang 330047,China; 2.Sino-German Joint Research Institute,Nanchang University,Nanchang 330047,China)

Enzymatic hydrolysis is considered as one of the common ways to reduce the allergenicity of food allergens. In this study,the egg white proteins were hydrolyzed with pepsin,papain,neutrase and alcalase. Enzymatic hydrolysis process of egg white protein was sequentially monitored by Tricine-sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis(Tricine-SDS-PAGE)and the degree of hydrolysis(o-phthaldialdehyde). Immunoglobulin G(IgG)and immunoglobulin E(IgE)binding of the hydrolysates were evaluated by rabbit anti-egg white protein sera and egg allergy patients’ serum pool. The results showed that the papain and alcalase could effectively hydrolyze egg white protein,and the hydrolysates also showed the low antigenicity and allergenicity. The antigenicity and allergenicity of the hydrolysates with papain were reduced by 59.23% and 4.91%,respectively,and the antigenicity and allergenicity of the hydrolysates with alcalase protease were reduced by 57.61% and 4.55%,respectively. In conclusion,papain and alcalase protease have a significant impact on degrading egg white proteins and reducing the potential allergenicity.

egg white proteins;enzymatic hydrolysis;egg allergy;degradation;potential allergenicity

2015-10-08

王艷(1991-),女,碩士研究生,研究方向:食品加工與安全,E-mail:wangyanwhf@aliyun.com。

楊安樹(shù)(1972-),男,博士,教授,研究方向:食品科學(xué),E-mail:yanganshu@ncu.edu.cn。

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)資助(2013AA102205);國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31460439);江西省青年科學(xué)家培養(yǎng)對(duì)象計(jì)劃(20122BCB23006);江西省科技廳對(duì)外科技合作計(jì)劃項(xiàng)目(20142BDH80002);江西省科技廳知識(shí)產(chǎn)權(quán)局項(xiàng)目(20143BBM26107)。

TS201.6

A

1002-0306(2016)10-0194-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.10.031