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        Rb表達(dá)水平與胃癌中醫(yī)證型的相關(guān)性研究

        2016-09-10 01:11:04王雨村劉宏斌何欣杜小正
        甘肅醫(yī)藥 2016年8期
        關(guān)鍵詞:陰型氣滯證型

        王雨村 劉宏斌 何欣 杜小正

        ·臨床研究·

        Rb表達(dá)水平與胃癌中醫(yī)證型的相關(guān)性研究

        王雨村劉宏斌何欣杜小正

        目的:檢測Rb基因在胃癌不同中醫(yī)證型中的表達(dá)水平及變化,探討Rb基因與胃癌中醫(yī)證型的關(guān)系。方法:選取2012 年10月至2014年10月在甘肅省腫瘤醫(yī)院胃腸外科入院行手術(shù)治療的胃癌患者162例,以慢性淺表性胃炎或正常胃組織標(biāo)本為對照組,使用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測胃癌組織和正常組織標(biāo)本中Rb表達(dá)情況,并在顯微鏡下觀察記錄組織細(xì)胞的陽性表達(dá)水平。結(jié)果:不同類型的中醫(yī)證型中,Rb蛋白表達(dá)由弱到強依次為:氣血虧虛型<?xì)鉁鲂停继禎衲Y(jié)型<肝氣犯胃型<脾胃虛寒型<胃熱傷陰型,且Rb陽性表達(dá)與中醫(yī)證型之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.228,P<0.01),并與胃癌的分級、分期存在一定的相關(guān)性。結(jié)論:Rb基因的表達(dá)在不同胃癌中醫(yī)證型中存在演變趨勢。

        胃癌;中醫(yī)證型;Rb;免疫組化;相關(guān)性

        胃癌是常見的消化道腫瘤。全球每年大概有一百萬新發(fā)胃癌病例,約有70萬人死于胃癌及其并發(fā)癥,在惡性腫瘤死因中位列第二位[1-3]。在我國,每年大約有2萬人被檢出患有胃癌,病死率男性(40.8/10萬)和女性(18.6/10萬),分別是歐美發(fā)達(dá)國家的4.2~7.9倍和3.8~8.0倍[4,5]。研究表明,Rb基因與胃癌的侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān),并且,原癌基因、抑癌基因及細(xì)胞因子在氣滯血瘀證和邪熱內(nèi)蘊證中的表達(dá)存在差異性,由此推測出中醫(yī)證型與胃癌發(fā)生發(fā)展過程中基因的表達(dá)可能存在關(guān)聯(lián)[6]。本研究對胃癌6個中醫(yī)證型與Rb基因表達(dá)進(jìn)行分析研究,探討胃癌中“證”的實質(zhì),以期為中醫(yī)藥治療胃癌、預(yù)測其轉(zhuǎn)歸提供新思路。

        1 資料與方法

        1.1一般資料選取2012年10月至2014年10月就診于甘肅省腫瘤醫(yī)院胃腸外科病理確診并手術(shù)治療的胃癌患者162例,其中女性64例,男性98例,平均年齡(53.1±7.4)歲。根據(jù)胃癌分級系統(tǒng),其中Ⅰ級41例,Ⅱ級82例,Ⅲ級39例;根據(jù)胃癌TNM分期,其中Ⅰ期28例(ⅠA期10例、ⅠB期18例),Ⅱ期49例(ⅡA期22例、ⅡB期27例),Ⅲ期46例(ⅢA期19例、ⅢB期14例、ⅢC期13例),Ⅳ期39例。根據(jù)胃癌中醫(yī)分型(中醫(yī)證型參照《中醫(yī)胃癌診療指南(草案)》[7]),其中胃熱傷陰28例,脾胃虛寒39例,痰濕凝結(jié)17例,肝氣犯胃36例,氣血虧虛19例,氣滯血瘀23例。以慢性淺表性胃炎或正常胃組織標(biāo)本為對照組。胃癌組織標(biāo)本蠟塊由甘肅省腫瘤醫(yī)院病理科提供。

        1.2主要儀器與試劑CH-212型顯微鏡購自奧林巴斯集團(tuán)公司,AO-82型石蠟切片機由廣州晟龍實驗儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。鼠抗人C-erbB-2免疫組化單克隆抗體、免疫組化試劑盒、3,3-二氨基聯(lián)苯胺(Di?aminobenzidine,DAB)顯色試劑盒、檸檬酸抗原修復(fù)液、多聚賴氨酸防脫片劑、EDTA抗原修復(fù)液均購自邁新生物技術(shù)有限公司。

        1.3方法

        1.3.1組織標(biāo)本的處理。 將組織蠟塊切成約5μm厚的切片,平鋪在載玻片上(實驗前預(yù)先用多聚賴氨酸處理)室溫下干燥。干燥后置于恒溫烤箱內(nèi)60℃過夜備用。每次染色前,均需將標(biāo)本切片再次置于恒溫烤箱內(nèi),60℃烘烤50-60分鐘后才可使用。

        1.3.2免疫組化。石蠟切片二甲苯脫蠟、乙醇脫水后,抗原修復(fù);將抗原修復(fù)好的切片SP法免疫組化染色,DAB顯色,蘇木素染色,乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,最后鏡檢。

        2.3陽性標(biāo)準(zhǔn)切片在40×10倍視野下,計數(shù)50個腫瘤細(xì)胞,每張切片至少計數(shù)5個視野范圍。陽性標(biāo)準(zhǔn)[8]:陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≤10%計為無陽性表達(dá);11%-30%為(+);31%-70%為(++);>70%為(+++)。

        2.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理。胃癌的各項觀察指標(biāo)采用描述性統(tǒng)計,中醫(yī)證候各組間應(yīng)用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1胃癌組織中Rb蛋白的表達(dá)水平胃癌組織中Rb的陽性率為53.7%,與正常組織及慢性胃炎組織相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。在3級腫瘤分級中,Rb陽性表達(dá)率分別為63.4%、56.1%、38.5%,與正常胃及慢性胃炎組織相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,見表2。胃癌TNM腫瘤分期中,Rb蛋白在腫瘤的4個分期中陽性率分別為64.3%、61.2%、54.3%、35.9%,與對照組相比,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義,見表3。

        表1 Rb蛋白的表達(dá)水平(例)

        表2 Rb在不同胃癌分級中的表達(dá)水平(例)

        表3 Rb在不同胃癌分期中的表達(dá)水平(例)

        2.2中醫(yī)證型在不同胃癌分級中的表達(dá)情況Ⅰ級胃癌患者中以脾胃虛寒型最多,共12例,占29.3%,氣滯血瘀型最少,共3例,占7.3%;Ⅱ級胃癌患者中肝氣犯胃型最多,共21例,占25.6%,胃熱傷陰型最少,共7例,占8.5%;Ⅲ級胃癌患者中胃熱傷陰型最多,共17例,占43.6%,痰濕凝結(jié)型最少,共2例,占5.1%。見表4。

        表4 中醫(yī)證型在不同胃癌分級中的表達(dá)情況[例(%)]

        2.3中醫(yī)證型在不同胃癌分期中的表達(dá)情況將胃癌標(biāo)本按TNM體統(tǒng)分期,Ⅰ期患者中以胃熱傷陰型最多,共11例,占39.3%,痰濕凝結(jié)型最少,共1例,占3.6%;Ⅱ期患者中以肝氣犯胃型最多,共15例,占30.6%,氣滯血瘀型最少,共3例,占6.1%;Ⅲ期患者以脾胃虛寒型最多,共17例,占37.0%,氣血虧虛型最少,共2例,占4.3%;Ⅳ期以氣滯血瘀型最多,共10例,占25.6%,痰濕凝結(jié)型最少,共3例,占7.7%。見表5。

        表5 中醫(yī)證型在不同胃癌分期中的表達(dá)情況[例(%)]

        2.4胃癌不同中醫(yī)證型中Rb的表達(dá)情況不同中醫(yī)證型胃癌組織中Rb陽性表達(dá)不同,=11.312,P<0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。Rb陽性表達(dá)與中醫(yī)證型之間呈負(fù)相關(guān),r=-0.228,P<0.01。Rb蛋白陽性表達(dá)率由弱到強依次為:氣血虧虛型(15.8%)<?xì)鉁鲂停?1.7%)<痰濕凝結(jié)型(29.4%)<肝氣犯胃型(41.7%)<脾胃虛寒型(46.2%)<胃熱傷陰型(53.6%)。見表6。

        表6 不同中醫(yī)證型中Rb表達(dá)情況

        3 討論

        多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,癌基因和抑癌基因的表達(dá)產(chǎn)物能反映細(xì)胞的增殖狀態(tài),臨床上可作為早期診斷和預(yù)測預(yù)后的指標(biāo)。Rb基因為機體內(nèi)一種重要的細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控基因,是最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因[9]。有研究[10]表明,在所有人類腫瘤細(xì)胞中,均存在Rb基因表達(dá)異常(包括調(diào)控異?;蚧蛲蛔儯堄铨埖难芯浚?1]顯示,在進(jìn)展期胃癌原發(fā)灶中,Rb蛋白高表達(dá),且Rb蛋白的表達(dá)程度與胃癌腫瘤細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)。有研究[12]提示,中藥胃復(fù)春聯(lián)合維A酸可上調(diào)抑癌基因Rb表達(dá),并下調(diào)癌基因C-erbB-2的表達(dá)治療胃癌前病變,但該研究病例數(shù)不多,觀察隨訪時間不長。Rb蛋白參與胃癌的發(fā)生,且其與組織學(xué)類型、淋巴轉(zhuǎn)移率及浸潤深度有顯著相關(guān)性[13]。說明Rb蛋白表達(dá)缺失的胃癌更具侵襲、轉(zhuǎn)移的惡性生物學(xué)行為,并越到晚期,Rb蛋白越易發(fā)生缺失。

        本研究中,Rb在胃癌組織中高表達(dá),陽性率為53.7%,在正常胃組織和慢性胃炎組織中低表達(dá)(P<0.05),說明Rb的異常表達(dá)與胃癌發(fā)生存在一定的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn),中醫(yī)證型在胃癌分級與分期中的分布不同,且中醫(yī)證型與胃癌分期正相關(guān),提示隨著胃癌病情的進(jìn)展,腫瘤分期越來越晚,中醫(yī)證型也由實轉(zhuǎn)虛,呈現(xiàn)單純虛癥或者虛實夾雜。Rb蛋白陽性表達(dá)水平由弱到強分別為:氣血虧虛型<?xì)鉁鲂停继禎衲Y(jié)型<肝氣犯胃型<脾胃虛寒型<胃熱傷陰型。結(jié)果提示:Rb基因在不同胃癌中醫(yī)證型中存在演變趨勢。

        胃癌的4個TNM分期中:Ⅰ期患者中以胃熱傷陰型最多,痰濕凝結(jié)型最少;Ⅱ期患者中以肝氣犯胃型最多,氣滯血瘀型最少;Ⅲ期患者以脾胃虛寒型最多,氣血虧虛型最少;Ⅳ期以氣滯血瘀型最多,痰濕凝結(jié)型最少。胃癌腫瘤Ⅰ期為本病的初級階段,癌腫對于胃上皮浸潤程度尚淺,病變程度較輕,本期患者正氣尚強,病情不明顯,常常未能引起患者的重視,此期以胃熱傷陰最多見;Ⅱ期患者由于癌腫已形成實體,處于邪正相爭的階段;Ⅲ期患者中以脾胃虛寒最多見,此期患者癌腫侵犯繼續(xù)加重,中醫(yī)辨證認(rèn)為該期患者癥狀表現(xiàn)屬于虛實證;Ⅳ期患者中以氣滯血瘀者最多,此期患者多為腫瘤晚期患者,機體免疫功能減退,正氣消退,形體衰敗,正不勝邪。

        西醫(yī)依據(jù)腫瘤的異型性將腫瘤分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級,分化程度越高表明癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能越接近正常組織,其惡性程度越低。本次研究發(fā)現(xiàn):腫瘤分級Ⅰ級胃癌患者中以脾胃虛寒型最多,氣滯血瘀型最少;Ⅱ級胃癌患者中肝氣犯胃型最多,胃熱傷陰型最少;Ⅲ級胃癌患者中胃熱傷陰型最多,痰濕凝結(jié)型最少。

        綜上所述,胃癌組織中Rb表達(dá)水平高于正常組織及慢性胃炎組織,提示Rb基因的表達(dá)對胃癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移有著重要作用。疾病的證型不同,則Rb蛋白的表達(dá)情況亦不同。

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        A

        1004-2725(2016)08-0580-04

        730050甘肅 蘭州,甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤科(王雨村),病理科(何欣);730000甘肅 蘭州,甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院(王雨村、杜小正);730050甘肅 蘭州,蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院普外科(劉宏斌)

        劉宏斌,E-mail:liuhb2012@126.com

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