王丹陽(yáng)，李洋洋，王彬，向梅

·論著·

Tn抗原在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

王丹陽(yáng)，李洋洋，王彬，向梅

目的：探討Tn抗原在宮頸癌組織中的發(fā)生、發(fā)展中的作用，為宮頸癌的早期診斷、治療提供一定的參考依據(jù)。方法：選擇2013—2015年吉林大學(xué)第二醫(yī)院的102例臨床樣本，其中正常宮頸組織14例，宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織22例，宮頸癌組織66例，采用免疫組織化學(xué)方法以半乳糖胺特異性凝集素蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）作為抗體檢測(cè)不同宮頸組織中Tn抗原表達(dá)情況。結(jié)果：Tn抗原極少表達(dá)于正常宮頸鱗狀上皮（7.1％），在CIN和宮頸鱗癌中表達(dá)率分別為45.5％和68.8％，而在宮頸腺癌中表達(dá)率高達(dá)94.1％。在宮頸鱗癌中，Tn抗原的表達(dá)與是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（r=0.363，P＜0.05）。在宮頸腺癌中，Tn抗原表達(dá)與肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)（r=0.361，P＜0.05）。結(jié)論：Tn抗原可能作為宮頸腺癌的一種腫瘤標(biāo)志物，有助于宮頸腺癌的篩查診斷，并可能更早地提示宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

宮頸腫瘤；Tn抗原；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；免疫組織化學(xué)

【Abstract】Objective：To investigate the expression of Tn antigen in cervical carcinoma.To explore the role of Tn antigen in the occurrence and development of cervical carcinoma，and to provide a reference for the early diagnosis，treatment of cervical carcinoma.Methods：We screened 102 cervical samples from the Second Hospital of Jilin University from 2013 to 2015，including 66 invasive cervical carcinomas，22 cervical intraepithelial neoplasia（CIN），14 normal cervical squamous epithelia，by immunohistochemistry using biotinylated vicia villosa lectin（VVL）.Results：The Tn antigen was rarely observed in normal squamous epithelium（7.1％），and was detected in 45.5％of CIN and in 68.8％of invasive squamous carcinoma，and was highly observed in 94.1％of invasive adenocarcinoma.In invasive squamous carcinoma，expression of Tn antigen was closely related to lymph node metastasis（r=0.363，P＜0.05）.In adenocarcinoma，the correlation was shown between Tn expression and depth of invation（r=0.361，P＜0.05）.Conclusions：Tn antigen could be used as a marker for cervical adenocarcinoma，and Tn antigen could indicate the potent risk of lymph-nodes metastasis in squamous carcinoma.

【Keywords】Uterine cervical neoplasms；Tn antigen；Cervical intraepithelial neoplasia；Immunohistochemistry （J Int Obstet Gynecol，2016，43：446-448）

近年宮頸腺癌的發(fā)病率逐年升高，由于腺癌的特殊性，現(xiàn)有的宮頸癌篩查手段（如宮頸細(xì)胞脫落法等）對(duì)宮頸腺癌早期診斷的價(jià)值有限。目前通過(guò)各種檢測(cè)方法測(cè)定腫瘤標(biāo)志物含量，為宮頸癌的輔助診斷、復(fù)發(fā)檢測(cè)和預(yù)后判斷提供了新思路，同時(shí)對(duì)于控制過(guò)度醫(yī)療也具有重要意義［1-2］。糖基化的異常改變是細(xì)胞癌變的一個(gè)重要特征，這些抗原稱腫瘤相關(guān)糖抗原（tumor-associated carbohydrate antigen，TACA）。Tn抗原是一種與黏蛋白相關(guān)的TACA，大量的研究認(rèn)為Tn抗原在多種上皮性腺癌中高度表達(dá)［3-5］。但目前關(guān)于Tn抗原在宮頸癌中的研究很少。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法以蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）檢測(cè)正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織及宮頸癌組織中的表達(dá)情況，探討Tn抗原在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為宮頸癌的診治提供參考依據(jù)。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集吉林大學(xué)第二醫(yī)院2013—2015年因子宮腺肌病、子宮肌瘤、CIN、宮頸癌等原因行子宮全切術(shù)及宮頸錐切術(shù)的臨床標(biāo)本102例，其中正常宮頸組織14例，CIN組織22例，宮頸癌組織66例（未經(jīng)任何治療，如放療、化療等，其中宮頸鱗癌32例，宮頸腺癌34例）。所有患者均按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）臨床分期（2009）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。

1.2方法手術(shù)均由婦科高年資腫瘤專科醫(yī)生進(jìn)行，手術(shù)標(biāo)本均由2位有經(jīng)驗(yàn)的婦科高年資病理學(xué)醫(yī)師讀片核對(duì)。所有的標(biāo)本固定在10％福爾馬林中，經(jīng)過(guò)石蠟包埋，將石蠟組織切成4 μm厚的切片。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Tn抗原。取4 μm厚石蠟組織切片，脫蠟、水化，5％過(guò)氧化氫甲醇溶液封閉（室溫下30 min）；以10％羊血清室溫30 min封片，以半乳糖胺特異性凝集素蠶豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL，由Vector Labs，Burlingame，CA生產(chǎn)）1∶2 000稀釋在室溫下并與玻片反應(yīng)30 min，以磷酸鹽緩沖液（PBS）作陰性對(duì)照；隨后加適度稀釋過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（Vector Labs），室溫30 min；用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，水洗，蘇木素復(fù)染。常規(guī)脫水透明，中性樹(shù)膠封固。

1.3結(jié)果判定每張切片均取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)大于100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)抗原反應(yīng)的陽(yáng)性細(xì)胞百分比分為5個(gè)級(jí)別：0（＜5％），1+（5％～10％），2+（10％～25％），3+（25％～50％），4+（≥50％）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。定性資料用率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)和四格表確切概率法。等級(jí)資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)。Tn抗原陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌病理因素的關(guān)系用Pearson列聯(lián)系數(shù)表明變量間的關(guān)聯(lián)程度。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Tn抗原在不同宮頸組織中的表達(dá)Tn抗原主要表達(dá)于細(xì)胞膜及富有胞質(zhì)的癌細(xì)胞中。在宮頸鱗癌中，Tn抗原主要分布在癌巢中央及邊緣，主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中；在宮頸腺癌中，Tn抗原主要分布在細(xì)胞膜表面及分泌物中，見(jiàn)圖1（見(jiàn)封三）。Tn抗原極少表達(dá)于正常宮頸鱗狀上皮（7.1％），在CIN和宮頸鱗癌中表達(dá)率分別為45.5％、68.8％，而在宮頸腺癌中的表達(dá)率高達(dá)94.1％。Tn抗原在宮頸正常鱗狀上皮中的陽(yáng)性表達(dá)低于其在CIN、宮頸癌中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別為5.918，29.979，均P＜0.05），其中宮頸腺癌組織中Tn抗原的陽(yáng)性表達(dá)高于其在CIN、宮頸鱗癌中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別為16.870，7.131，均P＜0.05）。Tn抗原在宮頸癌中的染色評(píng)分高于CIN（Z=-5.070，P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1　Tn抗原在各種宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況

2.2Tn抗原陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌病理因素的關(guān)系在宮頸鱗癌中，Tn抗原的表達(dá)與是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（r=0.363，P＜0.05），但與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度以及淋巴脈管瘤栓無(wú)關(guān)（P＞0.05）。Tn抗原高度表達(dá)于宮頸腺癌中，其表達(dá)與肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)（r=0.361，P＜0.05），但與其他臨床病理特征無(wú)關(guān)（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2　Tn抗原的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系

3　討論

目前腫瘤藥物治療的靶點(diǎn)主要有細(xì)胞周期和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，因?yàn)閷?duì)腫瘤細(xì)胞選擇性不高，藥物治療存在不良反應(yīng)，因此眾多研究者致力于尋找新的腫瘤特異性分子作為腫瘤診斷和治療的靶點(diǎn)，以糖生物學(xué)為基礎(chǔ)的靶點(diǎn)研究正逐漸成為腫瘤研究熱點(diǎn)。而Tn抗原是近年來(lái)備受矚目的一種TACA，在多種上皮性惡性腫瘤中高表達(dá)，且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用，但在各自相對(duì)應(yīng)的正常組織中則很少或不表達(dá)。

3.1Tn抗原在不同宮頸組織中的表達(dá)情況本研究發(fā)現(xiàn)Tn抗原極少表達(dá)于正常宮頸鱗狀上皮，與以往的研究結(jié)果一致［7-8］。Tn抗原在CIN及宮頸癌中陽(yáng)性表達(dá)率均高于宮頸正常鱗狀上皮組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與Carrilho等［9］的研究結(jié)果一致。Tn抗原在宮頸癌中的表達(dá)率達(dá)81.8％，其中在宮頸鱗癌中表達(dá)率為68.8％，而在宮頸腺癌中表達(dá)率高達(dá)94.1％。因此，Tn抗原可能作為宮頸癌的標(biāo)志物。

3.2Tn抗原在宮頸癌中的表達(dá)情況本研究采用VVL來(lái)檢測(cè)Tn抗原，VVL與Tn抗原具有高度特異結(jié)合能力，其已用于檢測(cè)胰腺癌、乳腺癌、肺癌及前列腺癌等腫瘤細(xì)胞［10-11］。目前薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）以及人乳頭狀瘤病毒（HPV）聯(lián)合應(yīng)用于宮頸癌早期診斷，其對(duì)宮頸鱗癌的早期診出率高于宮頸腺癌，因TCT對(duì)宮頸腺癌的漏診率很高［12］，而本研究發(fā)現(xiàn)Tn抗原在宮頸腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)94.1％，這提示Tn抗原可能作為宮頸腺癌的一種高效的腫瘤標(biāo)志物，從而對(duì)目前篩查診斷宮頸腺癌有一定幫助。

3.3Tn抗原陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌不同病理因素的關(guān)系在宮頸鱗癌中，Tn抗原的陽(yáng)性表達(dá)與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而其表達(dá)與宮頸鱗癌的組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度以及淋巴脈管瘤栓無(wú)關(guān)，提示Tn抗原可能作為預(yù)測(cè)宮頸鱗癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)標(biāo)志物。然而，本研究發(fā)現(xiàn)在宮頸腺癌中，Tn抗原表達(dá)僅與肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)，Tn抗原的表達(dá)是否與癌轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性仍存在爭(zhēng)議［8，11，13-14］，還有待于進(jìn)一步大樣本的研究核實(shí)。

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［本文編輯秦娟］

Expression and Clinical Significance of Tn Antigen in Cervical Carcinoma

WANG Dan-yang，LI Yang-yang，WANG Bin，XIANG Mei.Department of Obstetrics and Gynecology，The Second Hospital of Jilin University，Changchun 130041，China

XIANG Mei，E-mail：xiangmei@126.com

130041長(zhǎng)春，吉林大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科

向梅，E-mail：xiangmei@126.com

2016-01-11）