李　楠,逄春華,曲志娜,趙思俊,王　娟,趙建梅,李玉清,黃秀梅,王君瑋,劉煥奇

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東青島266109;2.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心,山東青島266032;3.青島機場出入境檢驗檢疫局,山東青島266108)

青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)鏈中沙門菌的分離及血清學(xué)鑒定

李楠1,2,逄春華3,曲志娜2,趙思俊2,王娟2,趙建梅2,李玉清2,黃秀梅2,王君瑋2,劉煥奇1

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東青島266109;2.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心,山東青島266032;3.青島機場出入境檢驗檢疫局,山東青島266108)

為了解青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)鏈中各環(huán)節(jié)沙門菌的分布及其血清型狀況,采用常規(guī)培養(yǎng)與PCR鑒定對不同環(huán)節(jié)沙門菌進行分離.采用玻片凝集試驗與xMAP?液相芯片分型法進行血清型鑒定.結(jié)果青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)鏈沙門菌總陽性率為10.10%.養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中種雞場、孵化場、商品雞場的分離率分別為0.67%、37.76%、9.20%;屠宰加工過程中淋洗前、淋洗后、預(yù)冷液、預(yù)冷后、分割環(huán)節(jié)分離率分別為3.69%、3.86%、5.7%、16.16%、31.43%;市售成品為17.15%.78.65%菌株為腸炎沙門菌.結(jié)論種雞場沙門菌凈化與孵化場種蛋消毒及淘汰弱雛是青島地區(qū)肉雞養(yǎng)殖環(huán)節(jié)沙門菌的關(guān)鍵控制措施;預(yù)冷液與分割車間的環(huán)境衛(wèi)生是其屠宰加工環(huán)節(jié)的關(guān)鍵控制點.青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)鏈中流行血清型為腸炎沙門菌.

沙門菌;肉雞;分離鑒定;血清型

沙門菌是常見食源性病原菌,對人和動物危害極大.據(jù)美國疾病控制與預(yù)防中心統(tǒng)計,每年有1/6人口因食用受污染食品而發(fā)生中毒,疫情報告顯示,沙門菌是引起疾病暴發(fā)的主要病原菌[1],其中以腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌和豬霍亂沙門菌尤為突出.已有報道人類沙門菌感染和食物中毒常來源于感染沙門菌的禽類、蛋類或其他畜產(chǎn)品[2],鑒于青島地區(qū)是肉雞養(yǎng)殖重點區(qū)域,因此本文針對肉雞生產(chǎn)鏈中沙門菌污染狀況進行了調(diào)查,分析不同環(huán)節(jié)沙門菌污染差異以及優(yōu)勢血清型,了解各環(huán)節(jié)關(guān)鍵控制點,為沙門菌的防控提供參考.

1　材料

1.1標(biāo)準(zhǔn)菌株腸炎沙門菌(ATCC13076)、大腸桿菌(ATCC25922),由中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心提供.

1.2試劑沙門菌顯色培養(yǎng)基、抗血清(泰國S&A),購自北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司; PCR試劑,購自TaKaRa公司;沙門菌血清型快速分型試劑盒,購自Luminex公司.

1.3儀器恒溫培養(yǎng)箱(上海愛朗公司);PCR儀(美國BIO-RAD公司);電泳儀(北京六一儀器廠);凝膠成像分析儀(美國BIO-RAD公司);Luminex 200液相芯片分析儀(美國Luminex公司).

1.4引物根據(jù)沙門菌inv A基因設(shè)計引物F: 5′-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3′;R: 5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′.

2　方法

2.1樣品采集于青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)加工企業(yè)的種雞場、孵化場、肉雞場、屠宰場以及市售成品等環(huán)節(jié)采集樣品,具體數(shù)量與分布見表1.

表1　采樣環(huán)節(jié)、數(shù)量、分離率及血清型

2.2分離鑒定按照GB 4789.4[3],顯色培養(yǎng)后挑取可疑單個菌落純化備用.采用革蘭染色鏡檢、生化鑒定試劑盒與PCR方法對疑似菌株進行鑒定.

2.3血清型鑒定玻片凝集試驗:采用GB 4789.4[3]玻片凝集法鑒定O抗原和H抗原;xMAP?液相芯片分型法:經(jīng)PCR擴增后用Luminex 200液相芯片儀進行數(shù)據(jù)讀取、分析.

3　結(jié)果

3.1不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)分離鑒定結(jié)果疑似菌株經(jīng)革蘭染色鏡檢、生化鑒定與PCR鑒定后,獲得267株沙門菌,總檢出率為10.10%.肉雞生產(chǎn)鏈各環(huán)節(jié)存在不同程度污染.養(yǎng)殖環(huán)節(jié)以種雞場分離率最低(0.67%),孵化場弱雛分離率最高(37.76%).屠宰加工環(huán)節(jié)以分割雞肉分離率最高(31.43%),屠宰胴體在淋洗前后分離率差異不大,但經(jīng)預(yù)冷液處理后分離率明顯提高,尤其分割處理后高達31.43%.市售環(huán)節(jié)分離率有所下降(17.15%),但仍高于養(yǎng)殖環(huán)節(jié)成年肉雞沙門菌檢出率.具體結(jié)果詳見表1、圖1,部分沙門菌PCR擴增結(jié)果見圖2.

圖1　各環(huán)節(jié)分離率統(tǒng)計

圖2　部分沙門菌電泳

3.2血清型鑒定結(jié)果結(jié)合兩種血清型鑒定方法得到各環(huán)節(jié)血清型分布如表1所示.主要血清型為腸炎沙門菌,為78.65%,除種雞場未檢測到該血清型外,其余各生產(chǎn)環(huán)節(jié)均有且均為優(yōu)勢血清型.其次為嬰兒沙門菌,為16.48%,在種雞、成年肉雞以及屠宰場的預(yù)冷液和分割雞肉中均檢測到該血清型,此外還有少數(shù)倫敦沙門菌.

4　討論

本試驗中種雞陽性率最低,僅為0.67%,張秀麗等[4]報道的種雞沙門菌檢出率18.40%,與本試驗結(jié)果差異極顯著(P<0.01),這可能與養(yǎng)殖區(qū)域、飼養(yǎng)管理以及長期凈化等因素有關(guān).孵化場弱雛陽性率最高,為37.76%,趙玉梅等[5]對肉雞死胚進行細(xì)菌分離,結(jié)果顯示死胚中沙門菌的帶菌率較高,為21.43%,而雞胚均來自種雞場,說明沙門菌通過種蛋進行傳播是其重要的傳播方式,嚴(yán)重影響孵化率、雛雞存活率等.因此,種雞場沙門菌凈化與孵化場種蛋消毒及淘汰弱雛是青島地區(qū)肉雞養(yǎng)殖環(huán)節(jié)沙門菌的關(guān)鍵控制措施,有利于提高孵化率及降低養(yǎng)殖環(huán)節(jié)延伸過程中沙門菌的污染.

屠宰加工是整個生產(chǎn)過程中另一個沙門菌污染的重要環(huán)節(jié).朱恒文等[6]針對肉雞屠宰加工過程中沙門菌污染狀況進行了調(diào)查,結(jié)果顯示,宰前及煺毛、凈膛過程為引發(fā)生產(chǎn)鏈沙門菌污染的風(fēng)險點.這與本試驗結(jié)果有所不同,本試驗發(fā)現(xiàn)經(jīng)預(yù)冷液處理后沙門菌檢出率明顯上升,尤其是分割樣品污染情況最為嚴(yán)重,說明青島地區(qū)肉雞屠宰加工過程預(yù)冷環(huán)節(jié)控制不當(dāng)、分割器具及環(huán)境衛(wèi)生條件相對較差.因此,嚴(yán)控預(yù)冷過程、加強分割車間衛(wèi)生條件是屠宰加工環(huán)節(jié)的關(guān)鍵控制措施,有利于降低加工過程中沙門菌外來污染.

本試驗還發(fā)現(xiàn),青島地區(qū)肉雞生產(chǎn)鏈中所分離菌株主要為腸炎沙門菌,其次為嬰兒沙門菌,而侯小剛等[7]研究發(fā)現(xiàn),德爾卑沙門菌是四川肉品生產(chǎn)鏈中優(yōu)勢菌株,其次為科特布斯沙門菌. Diarra M S等[8]對來自加拿大卑詩省肉雞樣品進行調(diào)查,主要是肯塔基沙門菌和鼠傷寒沙門菌.由此可見,不同國家、不同地區(qū)沙門菌流行血清型不同,其分布存在一定地域性,因此,應(yīng)加強沙門菌分布的動態(tài)監(jiān)測,有針對性地做好防控工作.

[1]Gomez T M,Motarjemi Y,Miyagawa S,et al.Foodborne salmonel?losis[J].World Health STAT Q,1997,50(1/2):81-89.

[2]甘學(xué)雄.關(guān)注沙門菌確保禽蛋食品安全[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2008(10):20-21.

[3]GB 47894-2010.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門菌檢驗[S],2010.

[4]張秀麗,楊保偉,廖興廣,等.河南省鶴壁市食源性和禽源性沙門菌耐藥性研究[J].中國人獸共患病學(xué)報,2010,26(12): 1134-1136.

[5]趙玉梅,范玉霞.肉雞死胚中沙門菌的分離及血清學(xué)鑒定[J].山東畜牧獸醫(yī),2013(5):1-3.

[6]朱恒文,方艷紅,王元蘭,等.肉雞屠宰加工生產(chǎn)鏈中沙門菌的污染調(diào)查及ERIC-PCR溯源[J].食品科學(xué),2012,33(17): 48-53.

[7]侯小剛.四川主要肉品生產(chǎn)鏈中沙門菌的分離鑒定、耐藥性分析及PFGE分型[D].雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[8]Diarra M S,Delaquis P,Rempel H,et al.Antibiotic Resistance and Diversity of Salmonella enterica Serovars Associated with Broiler Chickens[J].Journal of food protection,2014,77(1):40-49.

Isolation and Identification Serotyping ofSalmonella in Broiler Production Chain in Qingdao

LI Nan1,2,PANG Chun-hua3,QU Zhi-na2,ZHAO Si-jun2,WANG Juan2,ZHAO Jian-mei2,LI Yu-qing2,HUANG Xiu-mei2,WANG Jun-wei2,LIU Huan-qi1
(1.Department of Animal Science,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China; 2.China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao 266032,China; 3.Qingdao Airport Entry-Exit Inspection And Quarantine Bureau,Qingdao 266108,China)

To investigate the distribution and serotypes of Salmonella in various links in broiler production chain and provide reference for the prevention and control of Salmonella in Qingdao.Using the conventional methods and PCR to isolate and identify the strains.Serotypes were identified by slide agglutination test and xMAP?SSA.The total positive rate of Salmonella was 10.10%. The positive rates in breeding farm,hatchery,commodity farms were 0.67%,37.76%,and 9.20%in farming link,respectively The positive rates in broiler carcasses,broiler carcasses,after drip washing,pre-cool liquid,cool broiler carcasses,broiler meat were 3.69%,3.86%,5.7%,16.16%and 31.43%in slaughter process,respectively.The positive rate in retail broiler meat was 17.15%. There were 78.65%strains were.The purification of Salmonella in breeder farm and disinfection of eggs and eliminating weak young in hatchery are the critical control measures in broiler farming link in Qingdao.The sanitation of pre-cooling solution and cutting rooms are critical control points in slaughter process.The prevalent serotype is S.enteritidis in the broiler production chain in Qingdao.

Salmonella;broiler;isolation and identification;serotype

LIU Huan-qi

S858.31

A

0529-6005(2016)06-0036-03

2015-01-16

"十二五"科技基礎(chǔ)性工作專項(2012FY111000); 948項目"獸藥監(jiān)管技術(shù)引進"(2011-G14)

李楠(1988-),女,碩士生,研究方向為獸醫(yī)臨床,E-mail:linan5m@126.com

劉煥奇,E-mail:huanqiliu@126.com