曲明志，潘連德

（上海海洋大學省部共建水產種質資源發(fā)掘與利用教育部重點實驗室，上海201306）

池塘養(yǎng)殖錦鯉體表潰瘍病的組織病理學觀察

曲明志，潘連德

（上海海洋大學省部共建水產種質資源發(fā)掘與利用教育部重點實驗室，上海201306）

為臨床診斷和防治錦鯉Cyprinus carpio koi皮膚潰瘍病，采用病理解剖方法對患病錦鯉進行臨床觀察和組織病理學分析，試驗用患病錦鯉取自上海市朝陽錦鯉養(yǎng)殖場發(fā)病池塘，確定病魚10尾 （編號1～10），取每條病魚的組織進行病理解剖、石蠟切片、H-E染色。結果表明：患病錦鯉體表潰瘍病處的病灶組織出現嚴重淤血、炎性細胞浸潤并聚集、肌束溶解和壞死等典型病理表現；體表潰瘍病是由致病菌局部感染所致，并未全身性感染，10尾病料的脾組織均表現出血管擴張、管壁增厚、血管周圍的實質組織凝固變性，伴有紅細胞壞死和凝固變性區(qū)域內部分組織壞死等較為一致的病理特征，可以診斷為血液中有毒物質引起的脾組織病變，導致脾功能低下；肝胰組織和腎組織較脾組織病變相對較輕；腸、心、鰓、頭腎組織等基本正常。研究表明，本病例全部樣品均有不同程度的脾凝固變性、肝組織淤血、腎組織間質充血及其組織中血管擴張、管壁增厚的病理變化，這與體表潰瘍病變無直接關聯。

錦鯉；皮膚潰瘍病；脾凝固變性；組織病理

隨著池塘養(yǎng)殖錦鯉 Cyprinus carpio koi產業(yè)的發(fā)展，中國境內的錦鯉養(yǎng)殖規(guī)模在不斷擴大。錦鯉體表潰瘍病已成為大面積池塘養(yǎng)殖的常見病，該病病程較長，可導致錦鯉持續(xù)死亡，并可降低其觀賞價值［1-2］。引起錦鯉潰瘍病的病原主要有嗜水氣單胞菌Aeromonas hydrophila［1，3］、維氏氣單胞菌Aeromonas veronii［4-5］、溫和氣單胞菌 Aeromonas sobria［6］、摩氏摩根氏菌 Morganella morganii［2，7］、殺鮭氣單胞菌 Aeromonas salmonicida［8-9］、柱狀黃桿菌Flavobacterium columnare［10］和滑行細菌 Gliding bacteria［11］等。此外，還有從患有潰瘍癥狀錦鯉體內分離出病毒［12-13］及寄生蟲［14］的報道，可見錦鯉潰瘍病的病原十分復雜?；荚摬〉腻\鯉以鱗片脫落、肌肉充血、體表不同程度的潰瘍?yōu)橹饕∽兲卣鳎?］，部分腸道鼓氣、發(fā)炎［2，5］，肝胰臟呈褐色、腫大或淤血并伴有血樣腹水［4，15-16］，可見錦鯉潰瘍病的病癥較為復雜多樣，甚至錦鯉許多疾病常表現有潰瘍癥狀［17］。目前，僅見對滑行細菌引發(fā)的錦鯉潰瘍病的組織病理學研究，但沒有病灶組織病理結果，并推斷為菌血癥或敗血癥致死［11］。因此，錦鯉潰瘍病的病原、病理等涉及臨床診斷的關鍵問題還有待進一步研究。本研究中，對上海市朝陽錦鯉養(yǎng)殖場2015年暴發(fā)的潰瘍病病例進行詳細地臨床解剖和組織病理學觀察，以期為該病的診斷及防治研究提供相應依據，也為錦鯉危重疾病的臨床病理診斷和病因分析提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

試驗用患病錦鯉取自上海市朝陽錦鯉養(yǎng)殖場發(fā)病池塘 （1號、2號）。按照錦鯉患病臨床癥狀進行采樣，每份樣品均為患病活體，無瀕死個體。患病錦鯉體長為21.5～25.5 cm，體質量為213～315 g。將數十尾樣品運回至上海海洋大學水族寵物醫(yī)學實驗室進行臨床檢驗和病理解剖，初步診斷并排除其他病例后，確定病魚10尾 （編號1～10），進一步進行病理觀察和診斷。同步無菌操作采集相關組織進行病原菌分離鑒定，結果另文發(fā)表。

1.2方法

1.2.1病魚的臨床癥狀與病理解剖觀察對編號

為1～10號的病魚分別記錄臨床癥狀并進行病理解剖觀察，主要觀察各組織器官的病變情況、輕重程度，拍照，進行初步臨床癥狀診斷，并確定各個樣本的典型病變部位。

1.2.2組織病理學切片的制備與觀察 參考“1.2.1”節(jié)的結果，取每個病例的肝胰臟、脾臟、頭腎、中腎、心臟、腸道、病灶和鰓組織，并切成0.5 cm3小塊，用體積分數為10%的中性福爾馬林固定24 h后，經流水沖洗組織塊數小時，用體積分數為50%～100%的乙醇溶液逐級脫水，用二甲苯將其透明、石蠟包埋、切片 （厚度5 μm）、烤片，用蘇木素-伊紅（H-E）染色、中性樹膠封片，自然風干后在LeicaDM3000顯微鏡下觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1患病錦鯉臨床癥狀和病理解剖特征

患病錦鯉在池塘中聚成小群或獨游，行動遲緩，反應遲鈍，受外界刺激趨避能力差，嚴重者甚至死亡。另外，患病個體病程較長，每日死亡幾尾到數十尾不等，持續(xù)數月，死亡率達20%。2、4、5號典型患病個體，體表出現紅色或灰白色等不同程度、不同部位、不同大小的潰瘍灶 （圖1-A）；3、8、9和10號病癥較輕個體，體表出現不同大小紅斑、鱗囊出血或部分鱗片潰瘍形成缺刻，缺刻周緣有少量血液，有的個體各鰭條充血尤以尾鰭更加明顯，肛門紅腫 （圖1-B）；隨著病情的發(fā)展，1、7號中度患病個體，體表多處出現點狀潰瘍，潰瘍部位皮膚隆起、鱗片脫落，病灶周圍皮膚及肌肉組織發(fā)炎、充血或出血，且多集中在病魚腹部，有的患病個體眼球突出，病灶周圍呈現局部豎鱗癥狀 （圖1-C）；隨著病魚潰瘍灶逐漸擴大、加深，魚體會形成明顯凹陷，患病末期，重度患病個體潰瘍灶遍布全身，潰瘍處肌肉溶解、壞死、化膿呈灰白色，6號病魚甚至體表穿孔、露出骨骼和內臟，最終死亡 （圖1-D）。

圖1　患病錦鯉臨床癥狀和病理解剖Fig.1 Clinical symptoms and pathological anatomy of sick koi carp

臨床解剖觀察，除3、5號病魚鰓絲末端潰爛、缺損呈淡黃色外，其他病魚鰓組織均有不同程度的淤血 （圖1-E）；全部樣本 （1～10號）肝胰腺均略腫大、不同程度的淤血并呈暗紅色或紅褐色（圖1-F、G）；膽囊膽汁充盈；脾臟、頭腎、中腎基本正?；蚵杂心[大 （圖1-F、H）；部分圍心腔含有大量血液，心臟呈暗紅色；大部分為空腸，腸道充血 （圖1-I）；1、3、5號患病個體出現不同程度的腹水。

2.2患病錦鯉組織病理觀察

肝胰組織：除1號患病個體外，其他病料（2～9號）肝靜脈擴張并管壁增厚，肝靜脈內有大量的炎性細胞參雜在紅細胞中 （圖2-A），呈現局域性靜脈竇擴張 （圖2-B），肝細胞顆粒變性，部分胰腺組織靜脈擴張，血管壁增厚，僅見2號和10號病魚出現胰腺組織濃縮 （圖2-C）和壞死（圖2-D），其他肝胰腺組織結構基本正常，結合現場情況推斷，是由于食用大量酒糟，醛、醇類有毒物質進入血液中引起的肝胰腺組織病變，但其對本病的不良影響不大。

圖2　患病錦鯉肝胰臟、脾臟、中腎組織病理變化Fig.2 Histopathological changes in the hepatopancreas，spleen and mesonephron of sick koi carp

脾組織：錦鯉脾臟紅髓、白髓分辨不清，全部樣品 （1～10號）脾組織的血管擴張、管壁增厚、血管外圍實質組織凝固變性 （圖2-E），且呈現一致的病變特征，部分患病個體 （1、8、9號）脾組織血管擴張，可見大量紅細胞，部分紅細胞壞死且呈黃泡泡狀 （圖2-F），甚至部分患病個體 （8號）凝固變性區(qū)域內組織壞死 （圖2-G），可以診斷，脾組織的明顯病變會嚴重影響脾造血、儲血和免疫功能，對患病錦鯉的危害最大。

腎組織：全部樣品中腎組織血管擴張、管壁增厚，血液紅細胞中聚集較多炎性細胞 （圖2-H），腎組織間質區(qū)域明顯淤血，部分腎小管上皮細胞變性 （圖2-I），頭腎病變較中腎輕微。大部分頭腎與中腎實質組織結構基本正常，可以診斷腎組織有病變，但其對本病的不良影響不大。

心組織：3和6號病魚心肌纖維結構基本完好，靜脈擴張，其中血液紅細胞和炎性細胞凝結成血栓 （圖3-A），8和9號病魚肌束間充血嚴重（圖3-B），其他樣本的心組織結構正常。

腸組織：3號和10號病魚腸絨毛末端充血嚴重，絨毛有部分末端壞死甚至脫落 （圖3-C），9號病魚杯狀細胞分泌亢進 （圖3-D），其他樣本腸道絨毛結構正常。

圖3　患病錦鯉心臟、腸道、鰓、病灶組織病理變化Fig.3 Histopathological changes in the heart，intestine，gill and muscle lesions of sick koi carp

鰓組織：僅見1號和6號病魚鰓小片末端呈現氣球狀鰓淤血現象 （圖3-E），部分鰓組織增生，但其對本病的不良影響不大，其他樣本的鰓組織結構正常。

體表潰瘍病灶組織：典型病變表現為病灶區(qū)域出現大量淤血，肌間大量炎性細胞浸潤并聚集，組織橫切面觀察到肌纖維與肌內膜分離，肌束呈現明顯的炎癥、溶解、壞死等病變過程。病灶病程變化規(guī)律為：淤血和輕微炎癥 （圖3-F）、肌束溶解和炎癥 （圖3-G）、肌束溶解、炎癥和壞死 （圖3-H）、全部壞死 （圖3-I）。此過程可以診斷是由致病菌局部感染而產生的病變和炎癥反應，最后導致潰瘍。也未見敗血癥和菌血癥的組織病理變化特征，可以診斷為無全身性感染，屬局部感染類型。

3 討論

3.1錦鯉體表潰瘍是局部性感染并形成慢性病程

從本研究結果可以看出，潰瘍病灶的臨床表現規(guī)律性以及隨著病情發(fā)展的演變，在組織水平上更加清楚地展示了病灶局部感染的炎癥、變性和壞死的組織病理變化過程，這個炎癥反應是較緩慢和局部的，未見到敗血癥和菌血癥等全身性感染，該病的病原菌與滑行細菌引發(fā)的潰瘍病［11］略有不同?；疾€體感染和病情發(fā)展緩慢且病程較長，病魚慢性死亡情況也符合這樣的診斷，患病魚體未發(fā)現寄生蟲寄生，結合病理結果、現場發(fā)病情況和革蘭氏染色發(fā)現，陰性短桿菌為優(yōu)勢菌，該菌是否是病原還有待進一步研究。由此作者推斷，由于該養(yǎng)殖場長期投喂酒糟代替全價飼料，越冬后魚體體質較弱，期間的轉池、拉網等操作引起外傷，加之管理不當，水環(huán)境的變化及惡化引發(fā)病原菌侵入皮膚組織，從而感染引發(fā)潰瘍病。

3.2錦鯉脾凝固變性為食源性的病因

本病例全部樣品均有不同程度的脾凝固變性、肝組織淤血、腎組織間質充血及其組織中血管擴張、管壁增厚、炎性細胞浸潤的病理變化，對同池體表正常病魚的研究發(fā)現，均有不同程度的相同病變，因此，該變化和體表潰瘍病變可能無直接關聯。經過調查推斷，此病理變化與采用低質飼料可能有關，該養(yǎng)殖場長期用酒糟代替全價飼料，其中的醇、醛類有毒物質長期作用引起魚類慢性中毒，雖然低含量的玉米等酒糟和其他動物蛋白源飼料搭配，可提高某些魚類的飼料轉化率，但飼料中替代豆粕、米糠的酒糟含量在高于30%的條件下不僅會降低魚類的飼料轉化率［18］，還能夠顯著降低草魚、鯉等魚類的生長性能［19］，而該患病錦鯉酒糟的投喂量遠遠高于此比例，估計是造成脾凝固變性等病變的主要原因。

3.3脾凝固變性和潰瘍病對患病錦鯉的病死聯系

本病例的病程較長，持續(xù)了3～4個月，期間陸續(xù)有患病錦鯉死亡，死亡個體均患潰瘍較嚴重且多出現潰瘍空洞、內臟暴露。研究結果表明，病例有脾凝固變性、肝淤血、腎組織充血等病變，但內臟病變程度相對較輕且與潰瘍嚴重程度并不一致，由此推斷，其是錦鯉致死的次要原因，但會加速潰瘍病病情的發(fā)展，病原菌的感染也加重了組織器官進一步病變，兩者共同作用并引起病魚死亡。從病魚的臨床癥狀觀察，體表潰瘍逐漸嚴重，遍及全身，潰瘍面大而深，壞死潰爛，體壁穿透，內臟和組織暴露，水浸入體腔導致體內環(huán)境嚴重失衡［20］等是錦鯉致死的主要原因。

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Histopathological observations of skin ulcers disease in koi carp Cyprinus carpio koi cultured in ponds

QU Ming-zhi，PAN Lian-de
（Key Laboratory of Exploitation and Utilization of Aquatic Genetic Resources，Ministry of Education，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China）

Histopathological and clinic observations of skin ulcers disease was conducted by conventional paraffin section preparation method in koi carp Cyprinus carpio koi cultured in ponds（No.1 and No.2）from Shanghai Chaoyang koi carp farms.The results showed that the typical lesions in ulcers were found including a large number of congestion，inflammatory cell infiltration，inflammation，degeneration and necrosis in muscle bundles.These pathological features were caused by local infection of the ulcer bacteria，without infection on the whole body. There were highly consistent pathological changes including vasodilation，blood wall thickening，peripheral parenchymal tissue，coagulation and degeneration in all samples.Some red blood cell necrosis was found in yellow bubble-shaped and degeneration area and coagulation necrosis deterioration was observed in splenic tissue，indicating that obvious lesions of spleen were caused by toxic substances in the blood，hematopoiesis and blood storage capabilities.Pathological changes were found to be less in hepatopancreas and kidney than those in the spleen，with normal intestines，heart，gills，head-kidney and other tissues.In summary，spleen solidification degeneration，hepatopancreas tissue congestion，congestion and renal interstitial tissue vasodilatation，and blood wall thickening were the same pathological changes in all samples，which were not involved in skin ulcer disease.

Cyprinus carpio koi；skin ulcer disease；spleen solidification degeneration；pathology

S941.1

A

10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.01.008

2095-1388（2016）01-0044-06

2015-04-17

水產動物遺傳育種上海市協同創(chuàng)新中心 （ZF1206）

曲明志 （1988—），男，碩士研究生。Email：qumingzhi666@126.com

潘連德 （1960—），男，教授。Email：ldpan@shou.edu.cn