韋顯凱,鄭敏,鄭列豐,蘇姣秀,尹彥文,梁晟,蘭斌

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,廣西南寧530005;2.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,廣西南寧530001)

2012-2013年廣西犬狂犬病監(jiān)測(cè)及免疫效果分析

韋顯凱1,2,鄭敏2,鄭列豐2,蘇姣秀2,尹彥文2,梁晟2,蘭斌2

(1.廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,廣西南寧530005;2.廣西動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,廣西南寧530001)

為了解當(dāng)前廣西家犬狂犬病流行情況,評(píng)價(jià)防控效果,采集免疫過(guò)狂犬病疫苗的犬血清2 325份進(jìn)行抗體檢測(cè),抗體陽(yáng)性的有1 571份,陽(yáng)性率為67.57%.另外,采集交易市場(chǎng)或屠宰場(chǎng)表觀健康犬的腦組織樣品1 012份,通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)狂犬病病原,結(jié)果表觀,健康犬1份樣品呈陽(yáng)性,陽(yáng)性率為0.099%.結(jié)果表明,實(shí)施狂犬病疫苗免疫后,廣西家犬總體免疫抗體水平良好,表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病病毒比率下降到極低水平.提示應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)農(nóng)村犬只的免疫和管理,有效降低狂犬病的發(fā)生.

狂犬病;調(diào)查;RT-PCR;抗體監(jiān)測(cè)

狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus)引起的一種人畜共患病,當(dāng)人被患有狂犬病的動(dòng)物咬傷后,病毒可以通過(guò)傷口的外周神經(jīng)傳至中樞神經(jīng)系統(tǒng),人一旦發(fā)病,死亡率100%.世界上每年因狂犬病死亡的人數(shù)達(dá)到55 000人,上千萬(wàn)人需要進(jìn)行病毒暴露后處理[1],中國(guó)每年因狂犬病死亡的人數(shù)達(dá)3 300人,為世界第二,僅次于印度[2].在中國(guó),因狂犬病死亡的人大部分為攜帶狂犬病病毒的犬和貓咬、抓傷后引起,犬是引起中國(guó)狂犬病病人高發(fā)的最主要原因[3].而對(duì)犬進(jìn)行狂犬病疫苗的免疫則是預(yù)防犬感染狂犬病,進(jìn)而降低犬咬傷人發(fā)病幾率的重要措施.本研究通過(guò)在廣西區(qū)內(nèi)對(duì)犬進(jìn)行狂犬病疫苗免疫后采集犬血清,并收集市場(chǎng)上的狗腦,分別進(jìn)行狂犬病抗體及病原檢測(cè),分析疫苗免疫和狂犬病抗體產(chǎn)生以及病原攜帶情況的相互關(guān)系,為控制狂犬病的發(fā)生提供理論依據(jù).

1　材料與方法

1.1樣品來(lái)源2012年和2013年分別安排8個(gè)縣、區(qū)用狂犬病疫苗進(jìn)行免疫,采集免疫后1個(gè)月的犬血清共計(jì)2 325份,其中2012年1 305份,2013年1 020份.2012年和2013年分別從市場(chǎng)上采集狗肉攤點(diǎn)的狗腦506份.其中隆安縣用進(jìn)口的疫苗進(jìn)行犬的免疫,每年采集血清300份以上,犬腦100份.其他縣用國(guó)產(chǎn)疫苗進(jìn)行免疫,其中2012年用國(guó)產(chǎn)弱毒苗進(jìn)行免疫,2013年用國(guó)產(chǎn)滅活苗進(jìn)行免疫,每年每個(gè)縣采集血清約100份,犬腦50份.

1.2試劑狂犬病抗體ELISA檢測(cè)試劑盒,購(gòu)自浙江同點(diǎn)生物科技有限公司;RT-PCR所需試劑為寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品.

1.3方法對(duì)犬血清進(jìn)行狂犬病抗體檢測(cè),檢測(cè)方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行.犬腦則通過(guò)RTPCR方法進(jìn)行狂犬病病毒檢測(cè),引物和反應(yīng)條件依據(jù)曾蘭等[4]的方法進(jìn)行,引物序列為L(zhǎng)1:5′-GAACAACTGGCAACACTTCTCAAC-3′,L2:5′-AGACAAGAC TTGATCC CCAGCAAT-3′.

2　結(jié)果

2.12012-2013年狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果2012-2013年共采集的犬血清樣品2 325份,抗體合格1 571份,合格率為67.57%.2012年采集的犬血清1 305份,其中抗體合格795份,合格率60.92%.2013年采集血清1 020份,抗體合格776份,合格率為76.08%.2013年的合格率比2012年高15.16%,差異顯著(P<0.05),如表1所示.

2.2不同類(lèi)別犬抗體合格情況在采集的犬血清樣品中,有1 928份來(lái)自散養(yǎng)犬,抗體合格數(shù)為1 380份,合格率71.58%.寵物犬397份,抗體陽(yáng)性191份,合格率為48.11%,兩者相比差異極其顯著(P<0.01).

2.3不同疫苗類(lèi)別抗體合格情況在采集樣品的犬中所應(yīng)用的疫苗類(lèi)別主要有進(jìn)口滅活苗、國(guó)產(chǎn)弱毒苗和滅活苗.其中使用進(jìn)口滅活苗的血清樣品有928份,抗體合格的有730份,合格率78.66%.使用國(guó)產(chǎn)疫苗的犬所采集樣品1 397份,抗體合格841份,合格率為60.20%,差異顯著(P<0.05).其中國(guó)產(chǎn)弱毒苗免疫合格率38.89%,國(guó)產(chǎn)滅活苗的合格率80.43%,差異極顯著(P< 0.01),但進(jìn)口疫苗和國(guó)產(chǎn)滅活苗相比差異不顯著(P>0.05).

表1　2012-2013年狂犬病抗體檢測(cè)

2.4犬腦狂犬病毒檢測(cè)2012-2013年共采集市場(chǎng)銷(xiāo)售犬犬腦1 012份,共檢測(cè)到狂犬病病毒1份,陽(yáng)性率0.099%.其中2012年共檢測(cè)506份,病毒陽(yáng)性1份,2013年檢測(cè)506份,病毒陽(yáng)性0份.

3　討論

從2009年開(kāi)始,廣西就參與了國(guó)家公益性項(xiàng)目子課題"免疫示范區(qū)狂犬病的凈化和示范效果評(píng)價(jià)"和"動(dòng)物狂犬病快速診斷與有效疫苗研究",在以隆安縣為核心的免疫示范區(qū)內(nèi)進(jìn)行了狂犬病疫苗免疫,通過(guò)抗體檢測(cè)得知,8個(gè)采樣縣的抗體合格率差異較大,經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),有些地區(qū)特別是肉狗養(yǎng)殖場(chǎng)的犬,由于養(yǎng)殖周期相對(duì)較短,在進(jìn)行免疫后的較短時(shí)間即進(jìn)行了采血檢測(cè),造成了抗體滴度較低.而有些地區(qū)采集的樣品來(lái)源于年齡較大的看家狗,進(jìn)行過(guò)多次的疫苗免疫,抗體水平較高.此外,犬的年齡對(duì)免疫效果有影響,可能與年齡小的犬發(fā)育不完全、母源抗體影響,免疫機(jī)能較差有關(guān)[5].

在本研究中,隨機(jī)抽取的寵物犬的狂犬病抗體水平較低.從2012年的西鄉(xiāng)塘區(qū)送檢樣品的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),僅有9%合格,2013年也僅有33%合格,該地區(qū)的樣品全部來(lái)自于寵物.趙永旺等[6]對(duì)泰州市寵物犬狂犬病免疫情況調(diào)查,發(fā)現(xiàn)免疫合格率為31.7%.寵物犬使用狂犬病多聯(lián)疫苗的犬只狂犬病抗體水平比較低,免疫合格率為11.8%;免疫單聯(lián)疫苗的犬抗體水平較好,免疫合格率為61.4%.說(shuō)明盡管寵物主人對(duì)于犬貓的疾病治療較為重視,但對(duì)于免疫后的抗體產(chǎn)生效果卻知之甚少.寵物和人類(lèi)的接觸機(jī)會(huì)更多,如果免疫后產(chǎn)生抗體較差,則后患無(wú)窮,建議寵物主人定期對(duì)犬、貓的狂犬病抗體進(jìn)行檢測(cè).本研究通過(guò)對(duì)采集樣品的犬中所應(yīng)用的不同類(lèi)別狂犬病疫苗的抗體合格率進(jìn)行比較,結(jié)果顯示,進(jìn)口苗的抗體合格率為78.66%,國(guó)產(chǎn)弱毒苗的抗體合格率為38.89%,其中國(guó)產(chǎn)滅活苗的抗體合格率為80.43%,滅活苗的效果優(yōu)于弱毒苗,這和陳軍[5]等的報(bào)道一致.

對(duì)狂犬病免疫抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè),以及市場(chǎng)屠宰犬犬腦組織狂犬病抗原的檢測(cè).結(jié)果發(fā)現(xiàn),2010-2013年,抗體檢測(cè)合格率分別為:86.70%,90.21%, 60.92%,72.08%;市場(chǎng)犬犬腦狂犬病病毒檢出率分別為:3.66%,0.26%,0.20%,0;人間狂犬病發(fā)病數(shù)分別為:300,280,235,168人.2010-2011年,在廣西區(qū)采集市場(chǎng)銷(xiāo)售犬中犬腦狂犬病病毒陽(yáng)性率1.38%(11/800),疑似狂犬病犬犬腦陽(yáng)性率20%(5/ 25)[7].病毒檢出率呈下降趨勢(shì),而人間發(fā)病數(shù)也呈下降趨勢(shì).說(shuō)明對(duì)犬進(jìn)行免疫,提高犬的狂犬病抗體水平對(duì)減少人間狂犬病發(fā)病率起到重要作用.不同年份的抗體合格率抗體有差異,尤其是2012年的抗體合格率最低,推測(cè)和樣品來(lái)源、疫苗質(zhì)量、不同批次檢測(cè)試劑盒的特異性有關(guān).2012年所采集樣品中有較多的寵物樣品,所使用的疫苗主要是國(guó)產(chǎn)弱毒疫苗,動(dòng)物疫病防治人員在免疫過(guò)程中,稀釋好的弱毒苗未能及時(shí)免疫、保存不當(dāng)?shù)染軐?dǎo)致免疫抗體合格率較低.

[1]Zhang,Hualei Wang,Fazal Mahmooda.Rabies virus glycoprotein is an important determ inant for the induction of innate immune re?sponses and the pathogenic mechanisms[J].2013,162(2-4): 601-613.

[2]湯重發(fā),俞永新,劉景華,等.狂犬病病毒不同毒株的生物學(xué)特性研究[J].中國(guó)病毒病雜志,2014,4(3):179-186.

[3]李澤盛,劉愛(ài)林,譚榮榮,等.狂犬病研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2010,37(7):189-191.

[4]曾蘭,陸武,王雯,等.廣西狂犬病野毒株L基因3'端的多態(tài)性分析[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2009,31(11):906-909.

[5]陳軍,鄭文成,張朝陽(yáng),等.湖南部分地區(qū)免疫犬狂犬病免疫效果研究[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2009,26(12):56-58.

[6]趙永旺,蘇曉健,管遠(yuǎn)紅.泰州市寵物犬狂犬病免疫情況調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2014,5:114-115.

[7]韋顯凱,鄭敏,鄭列豐,等.2010-2011年廣西狂犬病監(jiān)測(cè)及效果分析[J].畜牧與獸醫(yī),2013,45(7):86-88.

S851.35

B

0529-6005(2016)02-0071-02

2014-10-28

農(nóng)業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目"動(dòng)物狂犬病快速診斷與有效疫苗研究"(2001103032)

韋顯凱(1982-),男,獸醫(yī)師,博士生,主要從事畜禽傳染病診斷與防控,E-mail:wxkdnnm@163.com

鄭列豐,E-mail:zhengliefeng-999@163.com