陳艷云,夏兆飛(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京海淀,100193)

犬C反應(yīng)蛋白研究進展

陳艷云,夏兆飛
(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京海淀,100193)

C反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein,CRP)是一種急性期反應(yīng)蛋白,早在1930年被發(fā)現(xiàn).機體在受到外源性刺激(感染、創(chuàng)傷等)時,會引起一些促炎因子(IL-1、IL-6、TNF-α)釋放,促進肝臟合成CRP.由于CRP變化非常靈敏,影響因素較少,因此被廣泛用于臨床.

1　急性期反應(yīng)蛋白(Acute Phase Protein,APPs)

機體在受到創(chuàng)傷、感染等刺激時,會出現(xiàn)急性期反應(yīng),受到刺激的巨噬細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞會釋放IL-1、IL-6、TNF-α等促炎因子,促進肝臟合成急性期反應(yīng)蛋白[1].常見的急性期反應(yīng)蛋白包括CRP、結(jié)合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)、淀粉樣蛋白(Serum amyloid A,SAA)、a1酸性糖蛋白(a1acid glycoprotein,AGP)、纖維蛋白原(Fibrinogen,FIB)、銅藍蛋白(Ceruloplasmin,CP)等,不同物種的急性期反應(yīng)蛋白略有不同(見表1)[1-2].犬的急性期反應(yīng)蛋白中,CRP是最主要的APP,SAA的變化也比較顯著.急性期反應(yīng)蛋白的主要功能包括感染和炎癥的免疫調(diào)節(jié)、損傷組織的修復(fù)等,是一種固有免疫反應(yīng),但不同APPs的功能不盡相同[2].

表1　常見家養(yǎng)動物主要的急性期反應(yīng)蛋白

CRP是一種穿孔蛋白,可見于脊椎動物和無脊椎動物,呈平面五角形排列.人的CRP的五個亞單位均未被糖基化,而犬的CRP有兩個亞單位被糖基化,分子量為100K Dal[2].CRP的主要作用為通過識別潛在的有害異體分子,重建補體系統(tǒng),提供非特異性固有免疫.它可以與細菌或真菌表面的磷脂結(jié)合,發(fā)揮嗜中性粒細胞和巨噬細胞的趨化作用;還可以與細菌的補體結(jié)合,促進巨噬細胞吞噬細菌;甚至作為微生物細胞膜的早期抗體,促進機體的免疫反應(yīng);CRP可識別并清除凋亡、壞死或受損的宿主細胞,促進機體組織結(jié)構(gòu)重建和功能恢復(fù);它還可以清除一些分子或機體的一些內(nèi)源性結(jié)構(gòu),抑制自體免疫反應(yīng)[1-2].

2　CRP的研究歷史

1930年,Tillet和Francis發(fā)現(xiàn)肺炎球菌表面的C多糖在有鈣離子的情況下,能發(fā)生沉淀反應(yīng),當(dāng)時研究者把其稱為C片段(C Fraction),認為其并非蛋白質(zhì)[3];1940年,Colin和Oswald等的研究證實發(fā)生沉降的物質(zhì)是一種蛋白質(zhì),由于該蛋白能和C多糖發(fā)生沉淀反應(yīng),因此被稱為C反應(yīng)蛋白(CRP);1947年,Maclyn等首次成功結(jié)晶純化出人的CRP;1950年,McCarty首次報道了使用CRP監(jiān)測風(fēng)濕患者病情的臨床研究.犬的CRP于1960年左右才開始受到關(guān)注,1970年被成功分離,1972年研究者利用特異性抗體定量檢測CRP的濃度;但一直到20世紀90年代,CRP才得到全面研究[1-2].

3　CRP的代謝

CRP是機體受到刺激后迅速產(chǎn)生的一種反應(yīng),刺激引起促炎因子(主要為IL-1、IL-6等)釋放,然后與肝臟細胞上的相關(guān)受體結(jié)合,在核轉(zhuǎn)錄因子的作用下,促進CRP的產(chǎn)生.機體在受到刺激4 h后CRP就有可能會升高,但臨床檢測可能顯示12 h后才會明顯升高.犬CRP的半衰期約為16 h,單次刺激后24 h達到峰值,隨后迅速下降.長期慢性感染病例也會出現(xiàn)CRP明顯升高的現(xiàn)象[1-2].

4　CRP的檢測方法

在血清蛋白電泳中,APPs主要分布于α和β球蛋白區(qū),因此,通過蛋白電泳,可以粗略評估APPs的變化,但對特異性APP的敏感性很低[1].近30年來,研究者探索出了多種CRP的檢測方法,主要包括:乳膠凝集法、免疫比濁法(已用于臨床)、激光放射免疫比濁法、ELISA、化學(xué)發(fā)光法、熒光免疫法、免疫層析法等.在這些檢測方法中,乳膠凝集法是一種半定量檢測法,目前已基本淘汰;ELISA是全球應(yīng)用最為廣泛的方法,但試驗流程繁瑣,靈敏度極高,能檢測出極低濃度的CRP,但極低濃度CRP的臨床意義有限;熒光免疫法可用于測量全血、唾液或滲出液中的CRP,但應(yīng)用不廣泛;免疫層析法操作較為簡單,目前已被商品化,操作極為簡單,且結(jié)果不受脂血癥和溶血黃疸的影響,適合臨床應(yīng)用[1-2,4].

5　犬CRP的臨床應(yīng)用

犬CRP是急性期反應(yīng)中最主要的APP,是機體固有免疫反應(yīng)的一種,并非某種感染的特異性反應(yīng),因此,在感染性疾病、創(chuàng)傷、腫瘤等疾病中均有可能明顯升高,可以作為這些疾病的一種指征.另外,CRP的影響因素較少,應(yīng)激、懷孕等僅能引起CRP輕微升高,比白細胞更靈敏,隨著檢測技術(shù)的進步,臨床應(yīng)用越來越廣泛.

5.1健康犬的CRP健康犬血清中的CRP濃度很低,不同的研究顯示,健康犬的血清CRP濃度小于5 mg/L.曾有調(diào)查顯示,懷孕母犬的CRP可能會輕度升高,而Ulutas等跟蹤了60例母犬的整個發(fā)情期和懷孕期,分別監(jiān)測了其血清CRP、SAA、Hp、CP、FIB濃度,結(jié)果顯示整個發(fā)情周期里,APP并無明顯變化,但懷孕母犬的CRP、Hp、CP和FIB均輕度升高[5].

5.2CRP在感染性疾病中的應(yīng)用

5.2.1細菌感染嚴重的全身或系統(tǒng)感染會引起CRP嚴重升高(20倍),尤其是子宮積膿病例.Jit?pean等于2014年的報道顯示,31例子宮積膿患犬的CRP和SAA均顯著升高,CRP升高約40倍,SAA升高約10倍,而血清IGF-1和Fe均顯著下降[6]. Dabrowski等于2013年的研究顯示,開放性子宮積膿和閉合性子宮積膿病例的外周血及子宮動脈血中的CRP、SAA、Hp均顯著升高[7].Viitanen等于2014年的研究顯示,細菌性支氣管肺炎和肺炎患犬的血清CRP也顯著升高(10倍),而慢性支氣管炎、嗜酸性粒細胞性支氣管炎患犬的CRP多處于參考范圍內(nèi)[8].還有一些報道顯示,其他全身性敗血性疾病中CRP也會顯著升高,死亡病例生前CRP居高不下,這些研究均表明,CRP可用于犬感染性疾病的診斷和治療監(jiān)測.

5.2.2病毒感染目前關(guān)于犬病毒感染和CRP關(guān)系的研究相對較少.細小病毒感染犬的CRP也會顯著升高(10倍),McClure等于2013年的研究顯示,CPV患犬12 h和24 h時的血清CRP濃度和死亡率正相關(guān),和存活時間負相關(guān),但CRP不能作為CPV預(yù)后的唯一指標[9].

5.2.3血液寄生蟲感染血液寄生蟲感染患犬的血清CRP也會升高.Venco等于2014年的報道顯示,心絲蟲感染患犬若出現(xiàn)肺動脈高壓或動脈內(nèi)膜炎,其血清CRP濃度也會明顯升高(5倍),可以作為心絲蟲感染中動脈內(nèi)膜炎和肺動脈高壓的指征[10]. Matijatko等人的報道顯示,犬巴貝斯蟲感染病例的血清CRP可升高30倍以上,嚴重者甚至達800倍,其靈敏度遠高于白細胞,且可用于治療監(jiān)測[11]. 5.3 CRP在創(chuàng)傷性疾病中的應(yīng)用犬的CRP創(chuàng)傷時也會升高,在外科手術(shù)中尤為明顯.Kjelgaard-Hansen等于2013年的研究將24只進行生理性絕育的犬分為3組分別為輸精管結(jié)扎組、腹腔鏡下子宮卵巢切除術(shù)(Ovariohysterectomy,OHV)組和開腹OHV組,結(jié)果顯示,3組犬的CRP在術(shù)后4 h均逐漸升高,至24 h達到峰值,隨后逐漸下降,但在升高程度方面,輸精管結(jié)扎組<腹腔鏡下OHV組<開腹OHV組[9].

5.4CRP在腫瘤疾病中的應(yīng)用犬的腫瘤疾病也可能會引起CRP升高,尤其是惡性腫瘤.惡性腫瘤生長很快,體積較大,腫瘤本身會釋放一些炎性因子,腫瘤壞死引起的炎癥反應(yīng)也會釋放促炎因子,最終導(dǎo)致CRP升高.Planellas等于2009年的報道顯示,乳腺良性腺瘤患犬的血清CRP可能會輕度升高,而乳腺癌患犬的CRP會明顯升高(2倍)[12];Mischke等人的研究顯示,淋巴瘤、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病患犬的CRP均顯著升高(5～10倍),雖然并非診斷唯一指標,但可作為預(yù)后指標[13].

綜上所述,CRP是犬最主要的急性期反應(yīng)蛋白,在發(fā)揮機體固有免疫反應(yīng)方面起著積極的作用,在多種疾病中會出現(xiàn)顯著的變化,是急性感染和炎癥性疾病的一種生物標志物,在疾病的治療監(jiān)測和預(yù)后方面也起著非常重要的作用.

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S858.292文獻標志碼:A

0529-6005(2016)02-0061-02

2015-03-31

陳艷云(1983-),女,獸醫(yī)師,博士,主要研究方向為臨床微生物學(xué)和小動物腫瘤學(xué),E-mail:chenyanyun84@126.com

夏兆飛,E-mail:drxia@126.com