李潤成,楊宇,湯起武(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,湖南長沙410128)

努比亞山羊巴氏桿菌羊創(chuàng)傷球菌混合感染的診治

李潤成,楊宇,湯起武
(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,湖南長沙410128)

巴氏桿菌屬為無芽孢,不運(yùn)動,兼性厭氧,菌體兩端常染色濃重的革蘭陰性小桿菌.本屬已確定的種有多殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和鴨疫巴氏桿菌等.在豬、牛[1]、羊[2]等動物常有巴氏桿菌感染的報道.創(chuàng)傷球菌屬是1993年Collins等提議設(shè)立的一個菌屬,目前該屬的主要成員有孔茲創(chuàng)傷球菌、羊創(chuàng)傷球菌、瑞典創(chuàng)傷球菌和化膿創(chuàng)傷球菌.只有羊創(chuàng)傷球菌分離自動物,其他均分離自人的臨床樣品.羊創(chuàng)傷球菌為革蘭陽性球菌,成雙或短鏈狀排列,在血平板上形成針尖大小,無色素,不溶血的菌落.該菌作為條件致病菌存在于自然界,常在創(chuàng)傷部位分離到, 2012年周偉等從肺炎患牛的肺臟分離到該菌,并進(jìn)行了PCR鑒定和藥物敏感性分析[3].2014年3月2號湖南衡陽某努比亞山羊養(yǎng)殖場羊群發(fā)生了巴氏桿菌和羊創(chuàng)傷球菌混合感染,本文就該病例進(jìn)行了細(xì)菌分離和PCR測序鑒定,并用分離菌分別進(jìn)行了藥物敏感檢測,養(yǎng)殖場根據(jù)藥物敏感性檢測結(jié)果控制了疾病的發(fā)生和發(fā)展.報告如下.

1　發(fā)病情況

2014年3月2號湖南衡陽某努比亞山羊養(yǎng)殖場羊群發(fā)病,首先是從外地引進(jìn)不久的羊群表現(xiàn)發(fā)病,羊場內(nèi)共210只羊,15 d內(nèi)死亡120只.發(fā)病羊體溫升高,水樣腹瀉,食欲絕廢,大多數(shù)流黏膿性鼻液,咳嗽,發(fā)病2～5 d即出現(xiàn)死亡.用恩諾沙星、慶大霉素、阿莫西林、青霉素等藥物治療,效果不理想.

2　剖檢變化

將病死羊剖開胸腔可見淡黃色滲出物,肺腫大、淤血、出血,有紅色肝變區(qū),肝腫大、淤血,胃黏膜呈出血性炎癥,腸黏膜呈彌漫性出血,其他臟器病變不明顯.

3　實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1細(xì)菌分離培養(yǎng)取病死羊肺臟組織接種于血瓊脂平板,37℃培養(yǎng)48 h,結(jié)果長出了大量2種菌落

形態(tài)的細(xì)菌,且兩種菌落形態(tài)的細(xì)菌數(shù)量相當(dāng).將兩種形態(tài)的細(xì)菌分別進(jìn)行劃線純培養(yǎng),可見,較大菌落細(xì)菌培養(yǎng)12 h即可呈灰白色、發(fā)亮的露滴狀,較小菌落的細(xì)菌在劃線培養(yǎng)48 h才可看到針尖大小、透明小菌落.將純培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行涂片與革蘭染色鏡檢,較大菌落細(xì)菌為革蘭陰性、兩極著色的桿菌,而較小菌落的細(xì)菌為革蘭陽性的球菌.

3.2分離菌的PCR擴(kuò)增與測序鑒定取兩種形態(tài)的分離菌作為模版,用細(xì)菌通用引物[4](引物資料見文獻(xiàn)1)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)果見圖1,由圖1可見從分離的兩株細(xì)菌均擴(kuò)增出了約1 142 bp的目的條帶.將擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物送長沙鉑尚生物科技有限公司進(jìn)行測序(序列已登錄到Gen?Bank,登錄號為KJ676643、KJ676644)和Blast分析.結(jié)果證明較大菌落形態(tài)的分離菌為巴氏桿菌,而較小菌落形態(tài)的分離菌為羊創(chuàng)傷球菌.

圖1　分離菌16S rRNA基因擴(kuò)增結(jié)果

3.3細(xì)菌藥物敏感性檢測及臨床治療效果將分離菌進(jìn)行液體增菌培養(yǎng)后,按藥敏試驗(yàn)要求將菌液濃度調(diào)至0.5個麥?zhǔn)蠁挝缓?根據(jù)不同細(xì)菌特性選擇檢測藥物,采用紙片法進(jìn)行藥物敏感性檢測.結(jié)果見表1.

表1　分離菌藥物敏感性檢測結(jié)果

由表1可見,分離的巴氏桿菌除對阿米卡星、頭孢曲松、強(qiáng)力霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星比較敏感外,對阿莫西林、青霉素、慶大霉素、鏈霉素、磺胺類藥不敏感;羊創(chuàng)傷球菌對頭孢類藥、青霉素、阿莫西林、阿米卡星、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考等均比較敏感,但對恩諾沙星、環(huán)丙沙星不敏感.根據(jù)藥物敏感性檢測結(jié)果,羊場采用注射阿米卡星,口服強(qiáng)力霉素的治療方案.2 d后控制了羊的死亡情況,連用4 d后所有發(fā)病羊均恢復(fù)了食欲,沒有再出現(xiàn)發(fā)病情況.

4　討論與分析

本文從病死羊肺臟深部組織分離到兩種形態(tài)的細(xì)菌,并進(jìn)行了16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增和測序.通過序列的Blast分析,發(fā)現(xiàn)分離菌分別為巴氏桿菌和羊創(chuàng)傷球菌.通過藥物敏感性檢測,發(fā)現(xiàn)巴氏桿菌敏感的藥物有阿米卡星、頭孢曲松、強(qiáng)力霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星;羊創(chuàng)傷球菌敏感的藥物有頭孢類藥、青霉素、阿莫西林、阿米卡星、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考.兩種菌共同敏感的藥物只有頭孢曲松、阿米卡星、強(qiáng)力霉素.這可能是養(yǎng)殖場使用恩諾沙星、慶大霉素、阿莫西林、青霉素治療效果不理想的原因.從細(xì)菌分離鑒定結(jié)果以及臨床用藥情況可見該養(yǎng)殖場努比亞山羊發(fā)病應(yīng)該是由巴氏桿菌和羊創(chuàng)傷球菌混合感染引起.

[2]何成偉,田生花.牛巴氏桿菌病的診治[J].中國獸醫(yī)雜志, 2010,46(9):71.

[3]趙恒亮.山羊巴氏桿菌病的診斷及治療[J].中國獸醫(yī)雜志, 2007,43(6):35-36.

[4]周偉,李能章,魏學(xué)良,等.牛源羊創(chuàng)傷球菌的分離鑒定[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2012,34(7):584-586.

[5]Run-Cheng Li,Chao-Ting Xiao,Xing Qian,et al.Occurrence of Streptococcus dysgalactiae subsp.Equisimilis in Masked Palm Civet(Paguma larvata)[J].Journal of Animal and Veterinary Ad?vances,2012.11(12):2020-2023.

S852.61+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

0529-6005(2016)02-0048-02

2014-09-16

李潤成(1979-),男,實(shí)驗(yàn)師,碩士,從事動物傳染病的教學(xué)與科研工作,E-mail:lixuesheng99@126.com