張萍，劉爽，譚立明，肖揚(yáng)婧卿，林美芳，吳洋，石莉，羅，陳娟娟，李華（、分宜縣中泰單采血漿有限公司，江西 分宜6600；、南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院0級(jí)，江西 南昌0006；、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌0006）

獻(xiàn)血漿人群血漿ANA檢測(cè)結(jié)果的臨床研究

張萍1，劉爽2，譚立明3，肖揚(yáng)婧卿2，林美芳2，吳洋3，石莉3，羅3，陳娟娟3，李華3
（1、分宜縣中泰單采血漿有限公司，江西 分宜336600；2、南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院2012級(jí)，江西 南昌330006；3、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330006）

目的 探討獻(xiàn)血漿對(duì)人體健康的影響，獻(xiàn)血漿與自身抗核抗體（ANA）檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性。方法 采用間接免疫熒光法（IIF）檢測(cè)54例首次獻(xiàn)漿者，44例5年獻(xiàn)漿史者，53例10年獻(xiàn)漿史者的血漿ANA，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 54例首次獻(xiàn)漿者血漿ANA陽(yáng)性率31.5%，44例5年獻(xiàn)漿史者血漿ANA陽(yáng)性率31.8%，53例10年獻(xiàn)漿史者血漿ANA陽(yáng)性率28.3%，三組獻(xiàn)漿者陽(yáng)性率比較，P＞0.05。結(jié)論 不同獻(xiàn)漿次數(shù)的人群其血漿中ANA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，多次獻(xiàn)漿與AID的發(fā)生無明顯關(guān)聯(lián)。

獻(xiàn)血漿；抗核抗體（ANA）；自身免疫性疾病

血液制品在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中應(yīng)用廣泛，用于治療疾病、拯救生命，其生產(chǎn)用原料的唯一來源是人血漿［1］。目前，原料血漿供應(yīng)不足，國(guó)家相關(guān)部門鼓勵(lì)各地設(shè)置審批單采血漿站，積極擴(kuò)大獻(xiàn)血漿人群。血漿是血液的重要組成成分，約占血液的55%，其作用主要是運(yùn)載血細(xì)胞，運(yùn)輸維持人體生命活動(dòng)所需的物質(zhì)和體內(nèi)產(chǎn)生的廢物等?？鼓?jīng)離心后上層淡黃色液體即為血漿。單采血漿術(shù)是通過單采血漿機(jī)及一次性采血漿耗材自動(dòng)分離出血漿然后把血細(xì)胞回輸給獻(xiàn)漿者的過程，是國(guó)內(nèi)外取得人血漿的主要方式［2］。這種對(duì)血液的操作是否會(huì)導(dǎo)致抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）的出現(xiàn)使其陽(yáng)性率增加從而導(dǎo)致自身免疫性疾?。╝utoimmune disease，AID）的發(fā)生發(fā)展至今尚無研究。本研究通過檢測(cè)并比較首次獻(xiàn)漿者、5年獻(xiàn)漿史者、10年獻(xiàn)漿史者的血漿ANA陽(yáng)性率，探討持續(xù)獻(xiàn)血漿是否會(huì)增加AID的患病率。

1　材料與方法

1.1材料來源54例首次獻(xiàn)血漿者，44例5年獻(xiàn)漿史者，53例10年獻(xiàn)漿史者，均來自江西省分宜縣中泰單采血漿有限公司，均按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015版）中獻(xiàn)血漿者體檢及化驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)診斷合格。54例首次獻(xiàn)漿者男16例，女38例，年齡18～54歲，平均39.76±9.47歲。44例5年獻(xiàn)漿史者男5例，女39例，年齡25～52歲，平均44.30±5.60歲。53例10年獻(xiàn)漿史者男4例，女49例，年齡37～54歲，平均47.32±4.02歲。三組年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，首次組與10年組年齡比較P＜0.01，首次組與5年組、5年組與10年組年齡比較0.01＜P＜0.05。不同年齡組年齡差異較大的原因可能是獻(xiàn)血漿者年齡要求為18～55周歲，十年獻(xiàn)漿史者平均年齡最大，首次獻(xiàn)漿史者平均年齡最小，且獻(xiàn)血漿人群變動(dòng)性較大，能夠長(zhǎng)期堅(jiān)持獻(xiàn)血漿者數(shù)量較少，其血漿標(biāo)本不易獲得。性別構(gòu)成比首次和五年，五年和十年差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05，首次和十年性別構(gòu)成比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。

1.2標(biāo)本的采集標(biāo)本均來自江西省分宜縣中泰單采血漿有限公司，體檢、檢驗(yàn)合格者經(jīng)單采血漿機(jī)采集血漿后，留取血漿樣品-20℃冷凍保存待檢［3］。

1.3自身抗體檢測(cè)采用間接免疫熒光法 （IIF）以Hep-2細(xì)胞和猴肝組織為基質(zhì)檢測(cè)ANA，應(yīng)用德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)的免疫熒光試劑。操作嚴(yán)格按本室作業(yè)指導(dǎo)書及說明書進(jìn)行。檢驗(yàn)基本流程為待檢標(biāo)本解凍恢復(fù)至室溫，1：100稀釋，檢查加樣板，生物載片恢復(fù)至室溫，設(shè)陰陽(yáng)對(duì)照、質(zhì)控對(duì)照，加25μl待測(cè)樣本至加樣板每一反應(yīng)區(qū)。再將生物薄片蓋于加樣板的凹槽里，室溫孵育30min，沖洗；避光加熒光素25μl，室溫孵育30min，再?zèng)_洗，封片鏡檢。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，三組計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1首次、5年及10年獻(xiàn)漿史者的血漿ANA檢測(cè)陽(yáng)性率多組間兩兩比較P＞0.05，按α=0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見表1。

表1　IIF檢測(cè)ANA結(jié)果

2.2首次、5年、10年獻(xiàn)血漿者血漿ANA陽(yáng)性結(jié)果的熒光核型具體分類詳見表2。

3　討論

ANA是一組將自身各種細(xì)胞核成分如核酸、組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種蛋白酶等作為靶抗原的自身抗體總稱。現(xiàn)在對(duì)于ANA靶抗原的理解，已由傳統(tǒng)的細(xì)胞核擴(kuò)大到整個(gè)細(xì)胞，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器中也有存在［4］。其化學(xué)本質(zhì)主要是IgG，ANA主要存在于血清中，在大多數(shù)AID中均可呈陽(yáng)性，且滴度較高［5］。ANA檢測(cè)在臨床AID的診斷中具有重要的參考價(jià)值。有研究表明未經(jīng)治療的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）和混合性結(jié)締組織?。╩ixed connective tissue disease，MCTD患者幾乎90%以上都有ANA［6］，但ANA檢測(cè)缺乏特異性，不能明確抗體具體類型，只能作為過篩試驗(yàn)。ANA陽(yáng)性者進(jìn)一步檢測(cè)各亞類ANA抗體對(duì)明確診斷、臨床分型、病情觀察、預(yù)后及治療評(píng)價(jià)有重要意義。國(guó)外有研究稱ANA檢測(cè)的用途是以預(yù)防疾病為目的的早期病例發(fā)現(xiàn)而不僅僅是以治療為目的的疾病診斷方式［7］。因?yàn)槿魏慰贵w檢測(cè)的敏感性、特異性有一定范圍，且存在一定的假陽(yáng)性率，假陰性率，臨床上有關(guān)于ANA檢測(cè)假陰性經(jīng)多滴度稀釋后顯陽(yáng)性的病例報(bào)導(dǎo)［8］。因此診斷AID，不能單純根據(jù)抗體，而應(yīng)以臨床表現(xiàn)為基礎(chǔ)，結(jié)合受檢者的病史、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等做出診斷。

表2　首次、5年、10年獻(xiàn)漿者血漿ANA熒光圖形

根據(jù)表1的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知首次獻(xiàn)血漿者、5年獻(xiàn)漿史者、10年獻(xiàn)漿史者血漿ANA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率兩兩比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明持續(xù)獻(xiàn)血漿與促進(jìn)ANA的出現(xiàn)及AID的發(fā)生無關(guān)。

根據(jù)表2可知三組血漿ANA陽(yáng)性時(shí)的熒光核型。首次和5年組中ANA熒光斑點(diǎn)型（顆粒型）所占比例最高，與王曉東等研究中的結(jié)果相同［9］，分別是35.29%和21.43%。三組均有胞漿陽(yáng)性型，說明抗核抗體的靶抗原不僅僅局限于細(xì)胞核，在細(xì)胞質(zhì)也有。三組均有抗有絲分裂特異性結(jié)構(gòu)著絲點(diǎn)和紡錘體的抗體陽(yáng)性，其中首次獻(xiàn)漿者抗著絲點(diǎn)抗體陽(yáng)性1例，抗紡錘體抗體2例；5年獻(xiàn)漿史者抗著絲點(diǎn)抗體陽(yáng)性2例，抗紡錘體抗體陽(yáng)性2例；10年獻(xiàn)漿史者抗著絲點(diǎn)抗體陽(yáng)性1例，抗紡錘體抗體陽(yáng)性1例。有研究報(bào)道著絲點(diǎn)型抗體在SLE、PBC、硬皮病、重疊綜合征中均有檢出，不僅是在經(jīng)典的硬皮病中表達(dá)，具有較寬的疾病譜［9］。紡錘體在真核細(xì)胞有絲分裂中起重要作用，主要是由大量微管組成的細(xì)胞器，臨床上有關(guān)于小細(xì)胞肺癌患者抗紡錘體抗體檢測(cè)結(jié)果的分析，認(rèn)為檢測(cè)抗紡錘體抗體對(duì)小細(xì)胞肺癌的診斷有意義［10］。首次和五年組中均有一例抗高爾基體抗體陽(yáng)性者，其原因和意義有待進(jìn)一步研究。

獻(xiàn)血漿是利用全自動(dòng)單采血漿機(jī)，經(jīng)過全血采集、自動(dòng)分離出血漿，把血細(xì)胞還輸給本人的一種安全的，對(duì)健康沒有損害的過程。獻(xiàn)血漿者每次采集的血漿中所含蛋白質(zhì)的量約為40克，其余的90%均為水分。失去的水分通過自身的身體調(diào)節(jié)及適當(dāng)飲水，2h內(nèi)就可得到恢復(fù)，蛋白質(zhì)也可在2～3日內(nèi)恢復(fù)到原有水平。雖然單采血漿需要經(jīng)過采血-分漿-還輸血細(xì)胞等多個(gè)步驟，但其是使用全自動(dòng)單采血漿機(jī)及成套一次性使用采血漿器材操作，并不會(huì)造成病毒感染，是安全可靠的，1998年國(guó)家衛(wèi)生部嚴(yán)格推行單采血漿機(jī)采集血漿以來，無1例交叉感染報(bào)道［11］。本次研究通過比較不同獻(xiàn)血漿史者血漿ANA陽(yáng)性率來探討持續(xù)獻(xiàn)血漿與ANA的出現(xiàn)及AID發(fā)生是否有關(guān)。首次獻(xiàn)血漿者ANA陽(yáng)性率為31.48%，5年獻(xiàn)漿史者為31.82%，10年獻(xiàn)漿史者為28.30%。通過陽(yáng)性率比較發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。但其ANA陽(yáng)性率均較高，其具體原因有待進(jìn)一步研究。本次研究的不足之處是未設(shè)置健康未獻(xiàn)血漿組，抽取其靜脈血抗凝離心后取血漿檢測(cè)ANA，探討其陽(yáng)性率與獻(xiàn)血漿者的差別，以提供將ANA檢測(cè)列入獻(xiàn)血漿者健康體檢項(xiàng)目的統(tǒng)計(jì)學(xué)依據(jù)。

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R193.3，R457.1+4，R446.62

A

1674-1129（2016）04-0532-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.043

江西省科技廳重點(diǎn)科技成果轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化計(jì)劃計(jì)劃支持項(xiàng)目（編號(hào)：20151BBI90047）

譚立明。

（2016-04-06；

2016-06-22）