黃素欽，林城，吳秋芳

（福州市傳染病醫(yī)院檢驗科，福建 福州350025）

（1，3）-β-D葡聚糖、半乳甘露聚糖、隱球菌莢膜多糖抗原聯(lián)合檢測對晚期艾滋病感染患者的臨床意義

黃素欽，林城，吳秋芳

（福州市傳染病醫(yī)院檢驗科，福建 福州350025）

目的 探討（1，3）-β-D葡聚糖（BG試驗）、半乳甘露聚糖抗原檢測（GM試驗）和隱球菌莢膜多糖抗原聯(lián)合檢測對晚期艾滋病感染患者的臨床意義。方法 收集AIDS晚期患者120例，根據(jù)侵襲性真菌?。↖FD）診斷標(biāo)準(zhǔn)，真菌陽性數(shù)是70例?；仡櫺匝芯克麄兊腃D4數(shù)量，真菌培養(yǎng)情況，BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原檢測的敏感性和特異性的統(tǒng)計結(jié)果。結(jié)果 IFD組與非IFD組的CD4絕對值比較，前者顯著小于后者（55±13/μl VS 250±45/μl，P＜0.05），90%IFD組CD4絕對值小于50/μl。120例AIDS患者中真菌培養(yǎng)出60例陽性（50.0%）。單獨BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗的敏感性分別為：42.9%、64.3%、14.3%；特異性分別為：75.0%、90.0%、100.0%。三者聯(lián)合應(yīng)用的敏感性和特異性分別為：95.7%、78.9%，三者聯(lián)合應(yīng)用的敏感度顯著大于單獨試驗的敏感度 （P＜0.05），也顯著大于真菌培養(yǎng)陽性率 （95.7%VS 50%，P＜0.05）。結(jié)論AIDS晚期患者，尤其當(dāng)CD4絕對值小于50/μl時患真菌感染概率很高，BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗的聯(lián)合檢測可以提高真菌診斷的敏感性，具有重要的臨床意義。

艾滋病；（1，3）-β-D葡聚糖；半乳甘露聚糖；隱球菌莢膜多糖抗原；聯(lián)合檢測

HIV感染人體后，可破壞人體的細(xì)胞免疫功能，導(dǎo)致患者抵抗力降低，易繼發(fā)內(nèi)源性及外源性真菌感染［1］，這成為AIDS病人死亡的重要原因。雖然真菌培養(yǎng)、病理組織檢查還是真菌鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，但是真菌培養(yǎng)存在著陽性率低、時間長的弊端，病理組織檢查存在著取材困難、病人不易接受的特點。AIDS患者真菌感染的常見類型：莢膜組織胞漿菌、馬爾尼菲青霉菌（PM）、念珠菌、隱球菌、曲霉菌［2］。因此探究早期、正確的診斷深部真菌感染的實驗室檢測方法，在臨床上具有重要意義。應(yīng)用免疫學(xué)方法檢測真菌感染，具有快速、簡便易行的特性。目前（1，3）-β-D葡聚糖（BG試驗）、半乳甘露聚糖抗原檢測（GM試驗）和隱球菌莢膜多糖抗原檢測已成為真菌感染的快速診斷依據(jù)［3］。為進一步了解非培養(yǎng)診斷在侵襲性真菌病（IFD）診斷中的臨床意義，我們對2015年1月至2016年2月的AIDS晚期住院患者進行了回顧性調(diào)查。

1　材料與方法

1.1一般資料本院2015年1月至2016年2月收治的AIDS晚期患者120例，其中，男70例，女50例，年齡23～75歲，平均45歲。根據(jù)IFD病診斷標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為2組：⑴IFD組70例，其中男40例，女30例，平均年齡55.5歲。⑵非IFD組50例，其中男30例，女20例，平均年齡60.3歲。

1.2真菌培養(yǎng)血液、腦脊液、深部咳出痰液等其它深部組織液進行真菌培養(yǎng)，實驗方法為API/ATB鑒定系統(tǒng)及配套試劑。

1.3BG檢測BG的檢測方法為用含有少許抗凝劑 （肝素鈉）的無熱源真空玻璃管采取患者血清2ml，及時送檢，儀器采用MB-80微生物快速監(jiān)測系統(tǒng)，試劑由北京金山川科技發(fā)展有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑所明書操作。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：＞10pg/ ml為陽性。

1.4GM實驗應(yīng)用ELISA法，采用Platelia Aspergillus試劑盒（法國Bio-Rad公司），嚴(yán)格按照試劑所明書操作。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩次GM＞0.5為陽性或單次＞1.0為陽性。

1.5隱球菌莢膜多糖抗原檢測采用膠體金免疫層析法，試劑由北京康暉煜科技有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑所明書操作。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05差異有統(tǒng)計意義。

2　結(jié)果

2.1IFD組與非IFD組的CD4絕對值比較前者顯著小于后者 （55±13/μl VS 250±45/μl，P＜0.05），90%IFD組CD4絕對值小于50/μl。

2.2真菌檢出情況 120例AIDS患者中真菌培養(yǎng)出60例陽性，真菌培養(yǎng)陽性率為50%（60/120），分別是10例念珠菌，37例PM、10例新型隱球菌、3例曲霉菌。臨床診斷真菌陽性數(shù)是70例，因此真菌培養(yǎng)還有14.3%（10/70）未被檢出。

2.3BG、GM、隱球菌莢膜多糖抗原試驗單獨檢測和聯(lián)合檢測的診斷能力。見表1。

表1　各診斷方法診斷結(jié)果的描述［例（%）］

單獨BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗的敏感性分別為：42.9%、64.3%、14.3%；特異性分別為：75.0%、90.0%、100.0%。三者聯(lián)合應(yīng)用的敏感性和特異性分別為：95.7%、78.9%，三者聯(lián)合應(yīng)用的敏感度顯著大于單獨BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗的敏感度（P＜0.05），也顯著大于真菌培養(yǎng)陽性率（P＜0.05）

3　討論

AIDS晚期患者，尤其當(dāng)CD4絕對值小于50/ μl時患真菌感染概率很高，真菌培養(yǎng)陽性率很高，達(dá)到了 50%（60/120），主要以馬爾尼菲青霉菌（PM）、念珠菌、隱球菌、曲霉菌為主。

BG試驗檢測的是真菌的細(xì)胞壁成分（1，3）-β-D葡聚糖。當(dāng)真菌進入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，（1，3）-β-D葡聚糖可以從胞壁中釋放出來，當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時，機體免疫系統(tǒng)可以將其清除，可能因此存在一定的假陰性，本研究中就有10例真菌培養(yǎng)PM陽性的BG為陰性。一般認(rèn)為隱球菌細(xì)胞壁外有莢膜包裹，因此不易檢測到細(xì)胞壁上的抗原，但是在一定條件下莢膜自身可釋放微量的BD到血液中，所以檢測值可大于0，但仍小于陽性判斷值［4］，使得隱球菌的BG檢測呈陰性。BG檢測存在一定的假陽性，主要因素有：血液透析者，一周內(nèi)食用真菌類如香菇、靈芝和冬蟲夏草等食物者，以及接受香菇多糖和以真菌為原料制成的抗生素，如磺胺類等，這些因素會造成BG檢測的假陽性［5］，所以檢測時應(yīng)注意。

GM試驗檢測的是半乳甘露聚糖。主要適用于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷。因曲霉菌特有的細(xì)胞壁多糖成分是β（1，5）呋喃半乳糖殘基，菌絲生長時，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原。同時監(jiān)測可對治療效果進行評價，經(jīng)治療后，GM在血液中的濃度明顯下降［6］。近年來多數(shù)研究均證實GM試驗靈敏度可達(dá)50%～95%，特異度可達(dá)85%以上，是一種診斷IFD的有效方法［7］，在本研究中，GM對于 IFD的靈敏度為64.3%，特異度為90.0%。

目前臨床上采用腦脊液涂片墨汁染色、真菌培養(yǎng)及隱球菌多糖莢膜抗原檢測等方法判斷真菌感染。真菌培養(yǎng)和鑒定一般需要3d，培養(yǎng)的陽性率為55%～80%［8，9］。墨汁染色操作簡單，用時短，但靈敏度僅50%～80%［10］。隱球菌莢膜多糖抗原的檢測，根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報道，具有高達(dá)90%以上的敏感度及特異度［11，12］，已經(jīng)作為隱腦確診的依據(jù)。本研究中采用膠體金免疫層析法，該法敏感性和特異性極強，同時具有快速（10min）、便捷、操作簡單的特點，可以作為疑似隱腦患者診斷的常用方法［13］，本研究中10例合并隱球菌感染的AIDS患者隱球菌莢膜多糖抗原全是陽性。

BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗三者聯(lián)合應(yīng)用的真菌檢出的敏感性顯著高于單獨檢測，這是因為這三種試驗針對的是不同種抗原，可以互補，防止因為用單一方法檢測而致一些真菌的漏檢。BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗三者聯(lián)合應(yīng)用的真菌檢出的敏感性顯著高于真菌培養(yǎng)檢出率，這可能是做培養(yǎng)時，由于護士標(biāo)本取得不好或者接種時沒有取病理的標(biāo)本等多種因素，影響了培養(yǎng)陽性率。而且免疫學(xué)檢測快速，較真菌培養(yǎng)縮短了2～5d的時間，為提早抗真菌治療贏得了寶貴時間，降低了病人的死亡率。

因此AIDS晚期患者，尤其當(dāng)CD4絕對值小于50/μl時，BG試驗、GM試驗、隱球菌莢膜多糖抗原試驗的聯(lián)合檢測可以提高真菌診斷的敏感性，并具有快速診斷的特點，所以具有重要的臨床意義。

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A

1674-1129（2016）04-0488-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.024

（2016-03-09；

2016-05-04）