張敏，呂潔，吳乾波

（1、浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310012；2、中國人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻(xiàn)服二科，浙江 杭州310005）

CS5100全自動凝血分析儀性能驗(yàn)證

張敏1，呂潔2，吳乾波3

（1、浙江省立同德醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310012；2、中國人民解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310004；3、浙江省血液中心獻(xiàn)服二科，浙江 杭州310005）

目的 驗(yàn)證Sysmex CS5100全自動凝血儀的系統(tǒng)性能，確定該檢測系統(tǒng)是否穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠。方法 從變異系數(shù)（CV）、準(zhǔn)確度、檢測限、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗(yàn)等方面對Sysmex CS5100系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 驗(yàn)證精密度最大CV為8.6%；驗(yàn)證準(zhǔn)確度最大偏倚為7.12%；Fg線性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Fg線性范圍為1.032～5.878，相關(guān)系數(shù)為r為0.9999；攜帶污染率最大值為-2.49%；血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時，偏離值小于或等于10%，驗(yàn)證全部通過。結(jié)論 Sysmex CS5100凝血分析儀檢測精密度好，準(zhǔn)確度高，檢測范圍寬，攜帶污染率低，抗干擾能力強(qiáng)，能夠較好的滿足實(shí)驗(yàn)室對于凝血功能檢測的需求。

性能驗(yàn)證；Sysmex CS5100；檢測系統(tǒng)

凝血功能測試通常包括PT、APTT、TT、Fg和D-二聚體等項(xiàng)目，根據(jù)這些檢測項(xiàng)目，醫(yī)生可以判斷病人凝血、出血狀況，繼而再根據(jù)病人病情進(jìn)展來決定下一步診治方案，例如對于創(chuàng)傷性大出血病人進(jìn)行大量輸血時，醫(yī)生需要及時監(jiān)測患者凝血功能，來科學(xué)配比血漿與濃縮紅細(xì)胞［1］，所以凝血檢查對于醫(yī)生的診治有著重要指導(dǎo)意義。隨著科技水平的不斷提高，醫(yī)院檢驗(yàn)科越來越多的檢測項(xiàng)目都可以通過自動化的設(shè)備來完成，自動化設(shè)備有著檢測快速、結(jié)果穩(wěn)定、標(biāo)本用量少等許多優(yōu)點(diǎn)，但是，由于檢測設(shè)備屬于一個檢測系統(tǒng)，可能存在著一定的系統(tǒng)誤差，所以ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則》對于臨床實(shí)驗(yàn)室儀器性能評估做出了明確要求：儀器安裝后或每次維修后，必須對儀器的技術(shù)性能進(jìn)行評估。Sysmex CS5100凝血分析儀是一部集凝固法、發(fā)色底物法和免疫法于一體，采用透射光加百分比測定原理的全自動凝血儀。為保證檢驗(yàn)質(zhì)量，我們對該儀器進(jìn)行了系統(tǒng)評價，包括變異系數(shù)（CV）、準(zhǔn)確度、線性范圍、攜帶污染率、干擾試驗(yàn)等指標(biāo)。現(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑Sysmex CS5100全自動凝血儀。CS5100全自動凝血儀使用廠家配套試劑及質(zhì)控品：包括PT試劑（批號546833），APTT試劑（批號557161A），TT試劑 （批號44695），F(xiàn)g試劑 （批號547225），質(zhì)控品（批號528155，548248E）；高濃度樣本及低濃度樣本均來自解放軍第一一七醫(yī)院，按需由健康體檢標(biāo)本與患者標(biāo)本制備而成；干擾物：用血常規(guī)管采集靜脈血3ml，1500r/min離心5min，棄去上層血漿，留下紅細(xì)胞層，加入蒸餾水后充分混勻，待紅細(xì)胞完全破壞后上機(jī)測血紅蛋白濃度，待用；收集臨床上乳糜血清3ml，上機(jī)測量甘油三酯，放干凈容器內(nèi)，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用；收集臨床上黃疸血清3ml，上機(jī)測量總膽紅素，放干凈容器內(nèi)，充分混勻密封后放置于-80℃冰箱保存待用［2］。

1.2方法

1.2.1精密度驗(yàn)證⑴批內(nèi)精密度：根據(jù)CLSI EP15-A文件［3］，取2個水平的標(biāo)本，同一批次盡可能短時間內(nèi)連續(xù)重復(fù)測定20次，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測定結(jié)果，計算CV和SD（要求CV值低于廠商規(guī)定）。⑵批間精密度：參照CLSI EP5-A文件［4，5］，選取正常（Control-1）、異常（Control-2）質(zhì)控品。每日每批次測2遍，早晚各1遍，連續(xù)5d，記錄每次PT、APTT、TT和Fg測定結(jié)果，計算CV 和SD（要求CV值低于廠商規(guī)定）。

1.2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證取2個水平質(zhì)控品進(jìn)行測定，記錄PT、APTT、TT和Fg結(jié)果，每個標(biāo)本測3次，與參考值進(jìn)行比較，計算偏倚。

1.2.3FIB可報告范圍驗(yàn)證選取一份Fg濃度接近預(yù)期上限的高濃度血漿（H），用儀器自帶的緩沖液按照如下比例進(jìn)行稀釋：1：0（0倍）、1：1（2倍）、1：3（4倍）、1：7（8倍）、1：15（16倍）、1：31（32倍），每個濃度測3次，將均值與理論值進(jìn)行比較得出R，R在0.8到1.2之間的最大稀釋度為Fg可報告范圍。

1.2.4Fg線性驗(yàn)證選取一份接近預(yù)期上限的高濃度血漿樣本（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例稀釋，每個濃度測3次，計算均值，求得回歸方程Y=aX+b，驗(yàn)證線性范圍。

1.2.5攜帶污染驗(yàn)證使用制備的PT、APTT、TT、Fg高值和低值血漿，按以下方法驗(yàn)證：⑴高值樣本污染：將低值樣本（N）置1和3位置，高值樣本（A）置于2位置，每個樣本測3次，記錄結(jié)果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。計算：k1=［N4-均值（N1，N2，N3）］/均值（N1，N2，N3）；⑵低值樣本污染：將高值樣本（A）置1和3位置，低值樣本（N）置于2位置，每個樣本測3次，記錄結(jié)果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。計算：k2=［A4-均值（A1，A2，A3）］/均值（A1，A2，A3），測定結(jié)果應(yīng)符合廠家要求（≤10%）［6］。

1.2.6干擾試驗(yàn)驗(yàn)證在正?；旌涎獫{中加入干擾物（血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯），分別測定PT、APTT、Fg、TT，每個樣本測2次計算均值，以原混合血漿為對照，并計算偏離值，得出偏離值控制在10%以內(nèi)的最大干擾物濃度。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用Office 2010及SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。

2　結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證批內(nèi)、批間驗(yàn)證結(jié)果見表1，CV值均低于10%，驗(yàn)證通過。

2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果在質(zhì)控品標(biāo)識可控范圍內(nèi)，見表2。

表1　精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2　準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3可報告范圍將標(biāo)本按2、4、6、8、16倍稀釋，每個濃度測定3次得均值，再用均值除以理論值得R值，求R在0.8～1.2之間的最大稀釋倍數(shù)，再用最大稀釋倍數(shù)乘以高濃度樣品值得到的最高值即為最大可報告范圍［7］。

2.4線性驗(yàn)證各濃度的Fg測定值和標(biāo)準(zhǔn)值之間具有良好的線性關(guān)系，r值為0.9999，＞0.975，a值為0.9989，在所要求的1±0.05范圍內(nèi)，線性范圍1.032～5.878g/L，見圖1。

2.5攜帶污染驗(yàn)證高值樣本對低值樣本的污染和低值樣本對高值樣本的污染的攜帶污染率均在±10%范圍內(nèi)，驗(yàn)證通過，結(jié)果見表4。

圖1　線性驗(yàn)證

2.6干擾試驗(yàn)驗(yàn)證當(dāng)干擾物在以下濃度：血紅蛋白小于或等于4.83g/L；甘油三酯小于或等于5.64 mmol/L；總膽紅素小于或等于322μmol/L時，偏離值小于或等于10%，驗(yàn)證通過。

3　討論

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展和對質(zhì)量要求的提高，人們開始認(rèn)識和關(guān)注檢測系統(tǒng)的重要性，并且市場上充斥著各種各樣品牌的設(shè)備，使得用戶對于不同種類設(shè)備性能無法完全了解，所以，國內(nèi)出現(xiàn)越來越多關(guān)于凝血儀性能評價的報道［8-11］。SysmexCS5100全自動凝血儀無疑有著優(yōu)秀的檢測能力，相比其前幾代產(chǎn)品，其檢測速度、多項(xiàng)目綜合處理能力不斷提高，可監(jiān)測樣本溶血、黃疸及乳糜情況，自動調(diào)整波長，具備自動再檢、自動連鎖篩選及凝血因子抑制物分析等功能。然而，在投入使用前，由于是新使用的檢測系統(tǒng)，盡管儀器廠商在裝機(jī)時已經(jīng)提供了儀器性能的初步參數(shù)，但因?yàn)楦鲗?shí)驗(yàn)室之間存在各種差異，在使用前必須對儀器重新進(jìn)行性能評價。這是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的一個重要措施，也是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求。

表3　不同稀釋度樣品Fg結(jié)果

表4　攜帶污染驗(yàn)證結(jié)果（%）

在我們的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，Sysmex CS5100檢測系統(tǒng)在檢測PT、APTT、TT和Fg時，批內(nèi)不精密度≤5%，批間不精密度≤10%，均小于廠家參數(shù)，可以認(rèn)為該系統(tǒng)具有較好穩(wěn)定性，檢測重復(fù)性良好；使用兩個固定值質(zhì)控檢測準(zhǔn)確度，將3次檢測求得的平均結(jié)果與靶值相比，F(xiàn)g在兩個水平質(zhì)控物測定中，偏倚均在±5%以內(nèi)，PT、APTT、TT偏倚均在± 10%內(nèi)，可以認(rèn)為系統(tǒng)準(zhǔn)確性高；Fg可報告范圍驗(yàn)證中，將標(biāo)本稀釋16倍時為Fg檢測限，我們得出其檢測限為0.3g/L；Fg濃度在1.032～5.878g/L范圍內(nèi)時，期望值與測定值差異極小，線性關(guān)系良好，能夠滿足大部分標(biāo)本的檢測范圍；另外，干擾實(shí)驗(yàn)反映了該系統(tǒng)對于血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯的抗干擾能力較強(qiáng)，反映出儀器確實(shí)能夠自動監(jiān)測異常樣本，通過自動調(diào)整波長的方式降低了樣本要求，這不僅較好的保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，也減少了我們工作人員重新采樣的次數(shù)。

所以，通過我們的性能驗(yàn)證，可以認(rèn)為Sysmex CS5100全自動凝血儀不僅達(dá)到了臨床檢驗(yàn)需求，也符合標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理要求。當(dāng)然，另一方面來說，操作人員的因素對于儀器運(yùn)行狀態(tài)也有著較大影響，我們在平時的檢測過程中應(yīng)注意：樣本是否達(dá)到要求，嚴(yán)重溶血、黃疸、脂血對于結(jié)果會產(chǎn)生較大影響；采集是否足量，抗凝劑的稀釋作用會造成PT、APTT結(jié)果異常；必須保證所有標(biāo)本盡快離心、檢測，使結(jié)果更可信；與臨床醫(yī)生保持溝通，提醒其知曉部分藥物對結(jié)果造成的干擾；嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作，每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，定期參加室間質(zhì)評，定期進(jìn)行校正、保養(yǎng)及維護(hù)［12］，這樣才可以保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

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R446.11+1

A

1674-1129（2016）04-0482-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.022

吳乾波，E-mail：dick2349@sina.com

（2016-02-24；

2016-04-28）