張霞

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076）

HPLC法測定長春西汀原料的有關(guān)物質(zhì)研究

張霞

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076）

建立高效液相色譜法測定長春西汀有關(guān)物質(zhì)的方法.色譜柱C18柱（4.6×250 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-乙酸銨（0.2 mol/L）（55∶45），流速為1.0m L/min，進(jìn)樣量為20μL，檢測波長為280 nm.結(jié)果表明，依據(jù)本法檢測，長春西汀的線性關(guān)系良好，專屬性強(qiáng)；精密度和穩(wěn)定性良好.該方法準(zhǔn)確、靈敏、專屬性強(qiáng)，可用于長春西汀的檢測.

長春西??；有關(guān)物質(zhì)測定；高效液相色譜法

長春西汀是由匈牙利GedeonRichter公司開發(fā)成功，1978年開始生產(chǎn)上市［1］，其化學(xué)名稱為乙基阿樸長春胺-22-醋酸乙酯，分子式：C22H26N2O2，分子質(zhì)量為350.46.長春西汀主要用于缺血性腦血管疾病的治療和預(yù)防.本文參照英國藥典2013年版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對長春西汀原料進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)研究，為企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù).

1　儀器與試藥

1.1儀器

日本島津高效液相色譜儀（SPD-20A）

1.2試藥

長春西汀原料藥（生產(chǎn)廠家：東北制藥集團(tuán)股份有限公司，批號：140801、140901、141001）；長春西汀對照品（中國食品藥品檢定研究院 編號：100947）；雜質(zhì)A對照品（USP藥典對照品 編號：1714619）；雜質(zhì)B對照品（USP藥典對照品 編號：1714620）；雜質(zhì)C對照品（USP藥典對照品 編號：1714641）；雜質(zhì)D對照品（USP藥典對照品 編號：1714652）；乙腈（色譜純）；乙酸銨（分析純）；鹽酸（分析純）；氫氧化鈉（分析純）；過氧化氫（分析純）；注射用水（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司）

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱（填充劑：十八烷基硅膠，4.6×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈：乙酸銨（0.2 mol/L）（55∶45）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測波長：280 nm.

2.2供試品溶液的制備

精密稱取長春西汀原料適量加注射用水溶解稀釋制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的溶液，混勻，作為供試品溶液.

2.3對照溶液的制備

精密稱取長春西汀對照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含長春西汀對照品0.001 mg的溶液.精密稱取雜質(zhì)A對照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對照品0.006 mg，精密稱取雜質(zhì)B對照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)C對照品加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)D對照品適量加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對照品0. 005 mg的溶液，作為對照品溶液.

2.4專屬性試驗(yàn)

分別取長春西汀原料適量置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解照下述方法試驗(yàn)：1）加入鹽酸溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置4 h，中和，定容，搖勻，作為酸破壞樣品.2）加入氫氧化鈉溶液（1.0 mol/L）2 mL后，放置2 h，中和，定容，搖勻，作為堿破壞樣品.3）加入3%過氧化氫溶液2 mL后，放置8 h后定容，搖勻，作為氧化破壞樣品.4）放入105℃烘箱，放置24 h后定容，作為熱破壞樣品.5）置強(qiáng)光下（照度：4 500 lx）照射，放置48 h后定容，作為光照降解樣品.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：長春西汀原料在酸、堿、氧化劑、熱及光照條件下較穩(wěn)定，各個(gè)降解產(chǎn)物分離度良好.

2.5線性關(guān)系考察

分別精密稱取長春西汀對照品加流動(dòng)相使溶解，稀釋制成每1 mL含長春西汀對照品0.001 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)A對照品加流動(dòng)相使溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對照品0.006 mg，精密稱取雜質(zhì)B對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)C對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)D對照品適量加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對照品0.005 mg的溶液，作為對照品溶液.分別精密量取上述各對照品溶液10、15、20、25、30 μL分別進(jìn)樣，記錄色譜圖峰面積.以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各個(gè)雜質(zhì)峰面積為縱坐標(biāo)，回歸方程分別為：A=36.867x+36.659，R=0.999 9；B=47.311x +44.027，R=0.999 8；C=26.454x+23.937，R= 0.999 6；D=36.328x+34.654，R=0.999 8.結(jié)果證明各個(gè)雜質(zhì)在0.06～0.2μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均線性關(guān)系良好.

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液及對照品溶液各20μL，按照如上液相條件進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算所得主峰面積的RSD值，結(jié)果如表1所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該法重復(fù)性良好.

表1　有關(guān)物質(zhì)測定分析方法重復(fù)性精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密稱取長春西汀對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含長春西汀對照品0.001 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)A對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)A對照品0.006 mg，精密稱取雜質(zhì)B對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)B對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)C對照品加流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)C對照品0.005 mg的溶液，精密稱取雜質(zhì)D對照品適量用流動(dòng)相溶解，稀釋制成每1 mL含雜質(zhì)D對照品0.005 mg的溶液，作為對照品溶液.另取長春西汀原料制備的供試品溶液，在室溫條件下，分別于0、3、6、9、12、18 h測定，記錄色譜圖.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，本品的供試品溶液在室溫條件下，18 h之內(nèi)穩(wěn)定.

表2　有關(guān)物質(zhì)測定分析方法穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.8回收率試驗(yàn)

精密量取本品9份，每份50mL，分別向其中加入適量6.35μg/mL雜質(zhì)A、5.15μg/mL雜質(zhì)B、5. 51μg/mL雜質(zhì)C、5.93μg/mL雜質(zhì)D，制成含雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為各自雜質(zhì)限度的80%、100%、120%的回收率樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度各3份.按照如上液相條件進(jìn)樣，結(jié)果表明，各雜質(zhì)回收率良好（見表3）.

表3　有關(guān)物質(zhì)測定方法分析方法雜質(zhì)A回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測定

對批號為140801、140901、141001的長春西汀原料樣品，按照“2.2及2.3”項(xiàng)下的方法分別制備供試品溶液和對照品溶液，依法測定，結(jié)果見表4.

表4　樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3　結(jié)語

參考英國藥典2013年版收載的長春西汀原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2-3］，對雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C和雜質(zhì)D進(jìn)行研究，長春西汀的線性關(guān)系良好，專屬性強(qiáng)；精密度和穩(wěn)定性良好，RSD均小于2.0%.該方法準(zhǔn)確、簡便、快速，可用于長春西汀有關(guān)物質(zhì)的檢測.檢驗(yàn)結(jié)果表明：雜質(zhì)D的含量在三批原料的檢測當(dāng)中含量均在0.1%以下，所以不將雜質(zhì)D定入長春西汀原料企業(yè)內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中.

［1］許焱，田軍，等.長春西汀的藥理作用與臨床應(yīng)用［J］.中西醫(yī)結(jié)合研究，2012，4（1）：38-39.

［2］長春西汀原料標(biāo)準(zhǔn).英國藥典［S］.2013.

［3］吳倫，蘇陽，范海潮，等.RP-HPLC法測定北五味子中6種木脂素類成分［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2015，31（5）：536-539

Determ ination of related substances in vinpocetine by HPLC

ZHANG Xia
（Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China）

To establish an HPLCmethod for determining the contents of related substances in vinpocetine.The chromatographic separation was performed on a C18column（4.6×250 mm，5μm）.Themobile phase consisted of acetonitrile and 0.2 mol/L ammonium acetate （55∶45）；the flow rate was 1.0 mL/min；the injection volume was 20μL.The detection wavelength was 280 nm.The Results indicated that the calibration curves of related substances had a good linearity.The specificity was strong and the precision and stability were good.Themethod was sensitive，accurate and specific，and could be applied in determining the related substances in vinpocetine.

vinpocetine；related substances；HPLC?

R927

A

1672-0946（2016）02-0234-03

2015-08-28.

張霞（1977-），女，碩士，高級工程師，研究方向：制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).