王文凈，高春燕（大理大學公共衛(wèi)生學院，云南大理671003）

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地參多糖抗氧化活性的研究

王文凈，高春燕*
（大理大學公共衛(wèi)生學院，云南大理671003）

采用水提醇沉法提取2個采收地3個采收期的地參多糖，并采用硫酸-苯酚法測定其多糖含量；通過DPPH自由基清除活性、FRAP和對亞硝酸鹽的清除作用評價了地參多糖的抗氧化活性。結(jié)果表明，地參多糖得率范圍為28.40 g/100 g～42.20 g/100 g，且隨著采收期的延后，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢；地參多糖含量范圍為16.95 g/100 g DW～31.61 g/100 g DW，且在整個采收過程中，不同采收地的地參其多糖含量變化不同；地參多糖具有較強的抗氧化活性，對DPPH自由基的清除率范圍為68.34%～76.38%，鐵還原抗氧化能力范圍為122.75 μmol Fe（II）/g～239.00 μmol Fe（II）/g，對亞硝酸鹽的清除率范圍為58.82%～87.37%；且同一抗氧化體系中，不同采收地的地參在整個采收過程中其抗氧化活性的變化不同；不同采收地的地參，在不同的抗氧化體系中，隨著采收期的延后其變化也不同。

地參；多糖；抗氧化活性

1　材料與方法

1.1材料與儀器

地參：分別于2013年11月19日（T1）、2013年12月22日（T1）和2014年1月25日（T3）采于云南省劍川縣沙溪鎮(zhèn)四聯(lián)村（S1）和鰲鳳村（S2），真空冷凍干燥備用；1，1-二苯基-2-苦苯肼自由基（DPPH·）：美國sigma公司；2，4，6-三（2-吡啶基）-1，3，5-三嗪（TPTZ）：FLUKA公司；葡萄糖、濃硫酸，硫酸亞鐵、三氯化鐵、冰乙酸、氯化鈉、對氨基苯磺酸、亞硝酸鈉等試劑均為分析純。

RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞東生化儀器廠；FD-1型冷凍干燥機：北京博醫(yī)康技術(shù)有限公司；WFJ2000型可見分光光度計：尤尼柯（上海）儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1地參多糖的提取

參照陳貴元等［13］的方法，并稍作修改。精密稱取地參粉末5.0 g，加蒸餾水75 mL，80℃水浴提取3 h，抽濾，濾液加水重復提取1次，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至15 mL左右，加入3倍體積95%乙醇，放入4℃冰箱醇沉24 h；待醇沉結(jié)束，除去上清液，取其沉淀，用95%乙醇、無水乙醇、丙酮依次洗3次，冷凍干燥，即得地參多糖精制粗品，按下式計算多糖得率。

精思的關(guān)鍵是善于提出問題和解決問題。讀書的時候，要用腦子把作者的觀點過濾一遍，提出有疑慮的地方，然后千方百計地解決疑問。這個過程能使我們在學習前人的基礎(chǔ)上，取得發(fā)展和進步。

多糖得率/%=多糖質(zhì)量/原料質(zhì)量×100

1.2.2地參多糖含量的測定

按文獻［14］采用硫酸-苯酚法進行測定，以配制好的葡萄糖標準溶液（100 μg/mL）做標準曲線，得回歸方程為y=7.658 9x-0.103 7，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 3，多糖含量以g/100 g DW表示。

1.2.3抗氧化活性的測定

1.2.3.1地參多糖清除DPPH自由基能力測定

分別吸取2 mL地參多糖溶液（2.0 mg/mL）與2 mL DPPH乙醇溶液（60 μmol/L）混合，于室溫暗室放置15 min后，在517 nm下測定吸光度值。各試樣對DPPH自由基清除率用下式計算：

DPPH自由基清除率/%=［1-（M2-M1）/M0］×100

式中：M0為2 mL乙醇+2 mL DPPH溶液的吸光度值；M1為2 mL樣品溶液+2 mL甲醇的吸光度值；M2為2 mL樣品溶液+2 mL DPPH溶液的吸光度值。

1.2.3.2鐵還原抗氧化能力的測定

將TPTZ用40 mmol/L HCl配制成10 mmol/L溶液，然后與新鮮配制的0.3 mol/L乙酸納緩沖液，20 mmol/L FeCl3·6H2O，以1∶10∶1（體積比）的比例混合制成FRAP工作液，使用之前于37℃水浴中保溫30 min。將0.1mL試樣，1.4mL FRAP工作液，2mL蒸餾水混合，并于37℃水浴中保溫30min，之后于593nm下測定吸光度值。以FeSO4·7H2O做標準曲線（100μmol/L～1 000 μmol/L），得回歸方程為y=0.000 6x+0.011 8，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 0。地參多糖鐵還原抗氧化能力以μmol Fe（II）/g表示。

1.2.3.3地參多糖對亞硝酸鹽清除作用研究

參照郭小鵬等［15］方法，稍作修改。準確稱取50 mg的地參多糖置于50 mL容量瓶中，加入25 mL模擬胃液，用超聲輔助增溶，37℃預熱10 min，再加入5 μg/mL亞硝酸鈉溶液2 mL，然后把混合物置于37℃水浴鍋中避光反應30 min；加入0.4%對氨基苯磺酸2 mL，搖勻靜置5 min；再加入0.2%鹽酸萘基乙二胺顯色劑1 mL，搖勻加水定容，靜置15 min后，在可見光538 nm下測各溶液的吸光值，按以下公式計算地參多糖對NO2-的清除率：

清除率/%=（A-A0）/A

式中：A為未加樣液的吸光度值；A0為加提取液后的吸光度值。

1.3數(shù)據(jù)處理

2　結(jié)果與討論

2.1地參多糖得率及含量

地參多糖得率及含量結(jié)果見表1。

由表1可以看出，S1和S2采收的地參，隨著采收期的延后，多糖得率都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢；而多糖含量不同采收地在整個采收過程中其變化不同；S1采收的地參，隨著采收期的延后，多糖含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢；而S2采收的地參，隨著采收期的延后，多糖含量沒有顯著性的差異。表明同不同采收地點對地參生長發(fā)育過程中多糖的合成與代謝具有顯著的影響。糖類的合成主要通過光合作用［16］，因此光照強度直接影響植物體內(nèi)糖類的合成與代謝；已有報道，在低溫條件下，植物體內(nèi)與糖類的合成與代謝相關(guān)的酶發(fā)生變化，而導致植物體內(nèi)糖的積累改變［17］；K、Zn等礦物質(zhì)元素對植物體內(nèi)糖類的合成與代謝也有顯著影響，而植物體內(nèi)礦物質(zhì)元素的含量與土壤中的含量密切相關(guān)［18-19］；此外，田間管理如灌溉、施肥等也會影響植物體內(nèi)糖類的合成與代謝。因此，不同采收地的地參在采收過程中多糖的變化是光照、溫度、土壤中礦物質(zhì)元素含量、田間管理等共同作用的結(jié)果。

表1　地參多糖得率及含量Table 1　Yield and content of polysaccharide from L.lucidus Turcz.

2.2地參抗氧化活性

采用DPPH自由基、鐵還原力和亞硝酸鹽清除活性3種體系評價了地參多糖的抗氧化活性，結(jié)果見表2。

表2　地參多糖抗氧化活性Table 2　Antioxidant activity of polysaccharide from lycopus lucidus Turcz.

由表2中數(shù)據(jù)可以看出，2 mg/mL地參多糖對DPPH自由基具有一定的清除活性。除了S2地TI采收的地參，其他地參多糖樣品對DPPH自由基的清除活性均超過了70%，其中以S1地T2采收的地參清除率最高，達到76.38%；鐵還原抗氧化能力體系中，各地參多糖樣品均表現(xiàn)出了一定的鐵還原力，其中以S2地T3采收的地參為最低，S2地T1采收的地參為最高；亞硝酸鹽清除體系中，各地參多糖樣品均對亞硝酸鹽均有一定的清除作用，其中以S2地T2采收的地參為最低，S1地T1采收的地參為最高，且整體上而言，S1地采收的地參對亞硝酸鹽的清除作用強于S2地。

由表2中數(shù)據(jù)可以看出，同一抗氧化體系中，不同采收地的地參在整個采收過程中其抗氧化活性的變化不同，如在FRAP體系中，S1采收的地參其鐵還原力隨著采收期的延后呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，而S2地采收的地參呈現(xiàn)出不斷降低的趨勢；此外，S1采收的地參，在不同的抗氧化體系中隨著采收期的延后其變化相同，都呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢；而S2采收的地參在不同的抗氧化體系中隨著采收期的延后其變化存在差異，如在DPPH自由基清除體系中呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，而在FRAP體系中呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢。多糖單糖的組成、結(jié)構(gòu)的差異導致其抗氧化活性不同。不同采收地地參多糖抗氧化活性的差異可以歸功于其多糖單糖的組成以及結(jié)構(gòu)的差異。另外，多糖提取物中的非糖類物質(zhì)可能也具有一定的抗氧化活性，對于不同采收地地參多糖抗氧化活性的差異也具有一定的貢獻。

2.3相關(guān)性分析

對地參多糖含量與抗氧化活性以及不同抗氧化體系之間進行了相關(guān)性分析，結(jié)果見表3。

表3　相關(guān)性分析Table 3　Correlational analyses

由表3中數(shù)據(jù)可以看出，地參多糖含量與抗氧化活性無顯著相關(guān)性，表明多糖提取物中的非糖類成分對抗氧化活性也具有一定的貢獻；此外，由于抗氧化體系反應機理的差異，不同抗氧化體系之間也無顯著的相關(guān)性。

3　結(jié)論

2個不同采收地3個不同采收期的地參，其多糖得率范圍為28.40 g/100 g～42.20 g/100 g，且隨著采收期的延后，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢；地參多糖含量范圍為16.95 g/100 g DW～31.61 g/100 g DW，且在整個采收過程中，不同采收地的地參其變化不同；地參多糖具有較強的抗氧化活性，對DPPH自由基的清除率范圍為68.34%～76.38%，鐵還原抗氧化能力范圍為122.75 μmol Fe（II）/g～239.00 μmol Fe（II）/g，對亞硝酸鹽的清除率范圍為58.82%～87.37%；且同一抗氧化體系中，不同采收地的地參在整個采收過程中其抗氧化活性的變化不同；不同采收地的地參，在不同的抗氧化體系中，隨著采收期的延后其抗氧化活性的變化也不同。

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Antioxidant Activity of Polysaccharide from Lycopus lucidus Turcz.

WANG Wen-jing，GAO Chun-yan*
（College of Public Health，Dali University，Dali 671003，Yunnan，China）

The polysaccharide of Lycopus lucidus Turcz.harvested form two sites and three periods were obtained through hot water extraction and ethanol precipitation.The polysaccharide content was determined by Folin-phenol method.The antioxidant activity of L.lucidus Turcz.polysaccharide was evaluated by DPPH radical scavenging activity，F(xiàn)RAP and nitrite scavenging effect.The results showed that the polysaccharide yield of L.lucidus Turcz.was in range of 28.40 g/100 g to 42.20 g/100 g，which was first increased and then decreased with the harvest time delayed.The polysaccharide content of L.lucidus Turcz.was in range of 16.95 g/100 g DW to 31.61 g/100 g DW，and their changes were various in the period of harvest.The polysaccharide of L.lucidus Turcz.possesed higher antioxidant activity.The DPPH radical scavenging capacity，F(xiàn)RAP value and nitrite scavenging effect ranged from 68.34%to 76.38%，122.75μmol Fe（II）/g to 239.00 μmol Fe（II）/g and 58.82% to 87.37%，respectively.In the same antioxidant system，the antioxidant activity of L.lucidus Turcz.polysaccharide obtained from different sites were discrepant in the period of harvest.The antioxidant activity of L.lucidus Turcz.polysaccharide obtained from different sites were varoius in different antioxidant system in the period of harvest.

Lycopus lucidus Turcz.；polysaccharide；antioxidant activity

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.005

大理大學博士科研啟動費（KYBS201303）

王文凈（1986—），女（漢），在讀碩士研究生，研究方向：營養(yǎng)與慢性疾病。

高春燕（1981—），女，副教授，博士，碩士生導師，主要從事植源性食品資源開發(fā)與利用的研究。

2016-04-13