廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫(yī)院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體密度與前列腺術后膀胱痙攣的相關性研究

廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫(yī)院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

目的探討膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體（M受體）M 2、M 3亞型的密度與前列腺電切術后膀胱痙攣的相關性。方法選取2012年5月-2015年5月醫(yī)院收治的良性前列腺增生（B P H）患者作為研究對象，將其分為合并膀胱過度活動癥（OA B）觀察組和不合并OA B對照組，再將觀察組分為發(fā)生膀胱痙攣組及不發(fā)生膀胱痙攣組，比較各組M 2、M 3受體的密度及其相關性。結果觀察組術后膀胱痙攣的發(fā)生率高于對照組；觀察組M 2、M 3受體密度均低于對照組；觀察組中發(fā)生膀胱痙攣患者的M 3受體密度低于不發(fā)生膀胱痙攣患者的M 3受體密度。結論膀胱黏膜M 3受體密度與前列腺術后發(fā)生膀胱痙攣存在相關性，提示M 3受體可能參與膀胱痙攣的發(fā)病機制。

毒蕈堿型膽堿能受體；膀胱黏膜；膀胱痙攣；良性前列腺增生；膀胱過度活動癥

良性前列腺增生（beni g n prostatic hyperplasia，B P H）是引起中老年男性排尿障礙最為常見的一種良性疾病。經(jīng)尿道前列腺電切術（trans u rethral resection o f the prostate，T U R P）是治療B P H的金標準［1］。然而T U R P術后患者容易發(fā)生膀胱痙攣，膀胱痙攣會加重術后出血及患者痛苦，如何預防及控制術后膀胱痙攣是困擾泌尿外科醫(yī)生的難點。膀胱痙攣癥狀屬于膀胱過度活動癥（o v eracti v e bladder，O A B）范疇，有研究顯示，約50%的B P H患者同時伴有O A B癥狀［2-3］，而B P H合并O A B患者行T U R P術后膀胱痙攣發(fā)生率高達20%～25%［4-5］。

目前毒蕈堿型膽堿能受體（以下簡稱M受體）阻滯劑是治療O A B的一線用藥，能夠改善B P H患者的O A B癥狀，然而M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機制至今仍未明確［6］。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，B P H合并O A B患者膀胱黏膜的M受體中M2、M3亞型受體密度比無O A B癥狀的B P H患者明顯降低，且與其發(fā)生O A B癥狀的嚴重程度存在相關性［7］。那么，膀胱黏膜M2、M3亞型受體的密度是否與T U P R術后發(fā)生膀胱痙攣存在相關性，M受體阻滯劑能否改善術后出現(xiàn)的膀胱痙攣癥狀，目前的相關報道較少。

1　資料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析本院2012年5月-2015年5月收治的B P H患者共80例。將其分為B P H合并O A B組（觀察組）40例和B P H組（對照組）40例，使用O A B評分表，將尿急癥狀項目大于或等于2分定義為B P H合并O A B組，尿急癥狀項目0分者定義為B P H組。將觀察組中術后突然出現(xiàn)陣發(fā)性恥骨上區(qū)及尿道疼痛，膀胱沖洗管一過性受阻，伴或不伴有膀胱內(nèi)液體返流至沖洗管或從尿道管周圍流出（排除膀胱血塊堵塞）的患者定義為膀胱痙攣組［8］，不發(fā)生上述癥狀的患者定義為不發(fā)生膀胱痙攣組。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準①符合《2014版中國泌尿外科疾病診斷治療指南》中B P H的診斷標準；②前列腺特異性抗原＜4μg/L；③膀胱殘余尿量＞100ml；④存在行前列腺電切術手術指征患者；⑤年齡60～80歲；⑥簽署知情同意書，同意加入本研究項目。

1.2.2排除標準①術后病理診斷考慮前列腺癌患者；②糖尿病患者；③嚴重尿路感染。尿常規(guī)白細胞≥強陽性（+++）或膿球≥弱陽性（+）的患者；④存在神經(jīng)源性膀胱功能障礙的患者；⑤近期曾使用M受體阻滯劑治療的患者；⑥患有精神疾病或存在語言障礙的患者。

1.3方法

1.3.1標本的獲取通過膀胱鏡活檢取得膀胱頂部的黏膜組織標本。

1.3.2膀胱黏膜的大小及保存方法每位患者均取3塊組織，每塊組織約3mm×4 mm×4 mm（5～20 m g）。將取得的標本放入組織凍存管，并迅速投入液氮中冷卻。手術結束后將標本置入-80℃的冰箱冷凍保存。

1.3.3實驗分析前的標本處理將所有組織標本做成病理切片，行蘇木精-伊紅染色確認為膀胱黏膜組織。

1.3.4使用的試劑及儀器Tri z ol試劑（美國I n v itro g en公司），Thermo S cript R T-PC R S ystem（美國I n v itro g en公司），B rilliantⅡ S YB R g reen Q PC R k it（美國S trata g ene公司），實時熒光定量聚合酶反應（q R T-PC R）儀（美國S trata g ene公司），微量核酸蛋白定量儀（美國Nanodrop公司），微量加樣器（德國Eppendor f公司），低溫高速離心機（德國Eppendor f公司），凝膠成像分析系統(tǒng)（法國V L公司），恒溫循環(huán)水浴箱（美國Thermo公司）等。

1.3.5q R T-P C R提取標本總R N A，保證R N A純度及行R N A的完整性鑒定（見附圖），參照Thermoscript R T-PC R S ystem說明書，通過逆轉錄反應獲得cDN A片段，設計好熒光定量PC R引物，在檢測M2 和M3受體的R N A的同時，利用引物對每個標本進行檢測，從而校正不同標本之間因R N A總量或逆轉錄反應效率差異等因素所致的數(shù)據(jù)差異。使用熒光定量儀做數(shù)據(jù)分析，繪制熒光定量PC R標準曲線，根據(jù)標準曲線標化M2、M3受體基因的拷貝數(shù)，最后將得到的標化的M2和M3基因拷貝數(shù)作為M2和M3受體密度進行統(tǒng)計分析。

1.4指標觀察

附圖　RN A鑒定

測定所有患者膀胱黏膜M2、M3受體的密度及術后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)生率，分析膀胱黏膜M2、M3受體的密度與術后發(fā)生膀胱痙攣的相關性。

1.5統(tǒng)計學方法

采用S P SS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，M2及M3的R N A值用中位數(shù)和四分位間距表示［M（P25～P75）］，定性資料用χ2檢驗進行分析，定量資料用兩獨立樣本的秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1術后膀胱痙攣發(fā)生率的比較

本研究80例手術均順利完成。觀察組與對照組術后膀胱痙攣的發(fā)生率經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義。提示B P H合并O A B患者術后更容易發(fā)生膀胱痙攣。見表1。

2.2M2、M3受體密度的比較

兩組M2、M3受體標化的基因拷貝數(shù)應用兩獨立樣本的秩和檢驗，差異有統(tǒng)計學意義，提示B P H合并O A B患者M2、M3受體密度比B P H患者降低。見表2。

2.3M 2、M 3受體密度與術后發(fā)生膀胱痙攣的相關性

表1　兩組術后膀胱痙攣的發(fā)生率比較 （n=40）

表2　兩組M 2、M 3受體密度的比較　［n=40，M（P25～P75）］

表3　觀察組中術后膀胱痙攣組與不發(fā)生膀胱痙攣組M 2、M 3受體密度比較　M（P25～P75）

為分析觀察組患者的M2、M3受體密度是否與術后發(fā)生膀胱痙攣存在相關性，筆者將觀察組再分為術后膀胱痙攣組及術后不發(fā)生膀胱痙攣組，兩組的M2、M3受體密度比較見表3，B P H合并O A B患者無論術后是否發(fā)生膀胱痙攣，M2受體密度并不存在差異性，而M3受體密度卻存在差異性，提示M3受體可能參與術后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)病機制。

3　討論

M受體分為M1～M5 5個亞型［9］。已有研究證實人類的膀胱逼尿肌中存在所有的M受體亞型，其中M2、M3受體的R N A占絕大多數(shù)［10］。既往的研究認為，M受體阻滯劑通過阻斷膀胱逼尿肌M受體（主要是M2和M3亞型），抑制逼尿肌過度收縮［11］，從而改善B P H患者的O A B癥狀，但是無法解釋已抑制患者的逼尿肌收縮，卻很少有B P H患者因服用M受體阻滯劑而出現(xiàn)排尿困難加重甚至出現(xiàn)尿潴留。近年來的研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜同樣存在M受體的5個亞型，其中主要的受體亞型仍然是M2、M3受體。那么M受體阻滯劑是否通過抑制膀胱黏膜的M受體，從而緩解O A B癥狀的呢？這是近年來研究的熱點。

關于膀胱黏膜M受體的報道較多。有相關研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜上的M受體密度與膀胱逼尿肌的M受體密度相似［12］，刺激膀胱黏膜的M受體可導致尿路上皮源性的抑制因子釋放，從而調(diào)節(jié)逼尿肌的收縮［13-14］，膀胱黏膜的M受體在O A B的發(fā)生機制中起著重要作用［15-16］。M受體阻滯劑不僅作用于膀胱逼尿肌的M受體，而且對膀胱黏膜M受體的抑制也起著重要作用［17］。大量的動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，M受體阻滯劑的主要作用可能是通過抑制膀胱傳入通路上傳入神經(jīng)的活性，從而減弱膀胱黏膜對乙酰膽堿的敏感性［18-20］。以上的研究結果均提示膀胱黏膜上的M受體與O A B的發(fā)生密切相關。

那么，做為屬于O A B范疇的膀胱痙攣癥狀是否與M2、M3受體密度存在相關性呢？在本研究的觀察組中筆者發(fā)現(xiàn)膀胱痙攣患者的M3受體密度明顯降低，結合既往的研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜對激動M受體引起的的逼尿肌收縮反應存在抑制作用［14-15］，筆者認為，膀胱黏膜可能存在一種保護作用，在B P H合并O A B的病理狀態(tài)下，膀胱黏膜發(fā)揮其保護作用，通過減少M受體的密度，降低膀胱黏膜對乙酰膽堿的敏感性，緩解O A B癥狀，然而B P H合并O A B的患者因膀胱黏膜中M受體的過度減少，特別是M3受體亞型的減少可能導致術后更容易發(fā)生膀胱痙攣，M3受體在前列腺電切術后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)病機制中可能起著重要的作用。

綜上所述，M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機制是相當復雜的。本研究中B P H合并O A B行經(jīng)尿道前列腺電切術術后發(fā)生膀胱痙攣的患者膀胱黏膜的M3受體密度明顯下降，至少說明M3受體密度對術后發(fā)生膀胱痙攣的影響。雖然目前仍然缺乏膀胱黏膜M受體在疾病狀態(tài)下是如何發(fā)揮作用的研究，但作為與前列腺電切術后發(fā)生膀胱痙攣相關的M3受體卻可以作為研發(fā)新藥的靶點，高選擇性的M3受體阻滯劑對預防和控制經(jīng)尿道前列腺電切術術后發(fā)生膀胱痙攣可能起著更加有效的作用。

［1］那彥群，葉章群，孫穎浩，等.中國泌尿外科疾病診斷治療指南［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2014:259-261.

［2］K N U T S O N T，ED L U ND C，F(xiàn) A LL M，et al.B P H w ith coe x istin g o v erati v e bladder dys fu nction-an e v eryday u rolo g ical dilemma［J］. Ne u ro u rol U rodyn，2001，20（3）:237-247.

［3］高中偉，辛士永，張建國，等.坦索羅辛聯(lián)合索利那新在治療輕中度良性前列腺增生合并膀胱過度活動癥中的療效分析［J］.中華男科學雜志，2014，20（3）:239-243.

［4］龔海華，錢良軍.琥珀酸索利那新、鹽酸坦索羅辛單用或聯(lián)用治療經(jīng)尿道離子束刀前列腺切除術后膀胱過度活動癥效果對比［J］.實用藥物與臨床，2014，17（6）:774-777.

［5］HO MM A Y，K A K I Z A K I H，Y A M A Q U C H I O，et al.A ssessment o f o v eracti v e bladder symptoms:comparison o f 3-day bladder diary and the o v eracti v e bladder symptoms score［J］.U rolo g y，2011，77（1）:60-64.

［6］P A T R A P B，P A T R A S.R esearch f indin g s on o v eracti v e bladder［J］. C u rr U rol，2015，8（1）:1-21.

［7］張進生，李瑋，劉寧，等.良性前列腺增生合并膀胱過度活動癥患者膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體、亞型的表達及臨床意義［J］.中國微創(chuàng)外科雜志，2014，8（14）:747-750.

［8］梅驊，陳凌武，高新，等.泌尿外科手術學［M］.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:425-426.

［9］E G L EN R M.Ov er v ie w o f m u scarinic receptor s u btypes［J］.H andb E x p P harmacol，2012，1（208）:3-28.

［10］S IG A L A S，MI R A B E LL A G，P E R O N I A，et al.Di ff erential g ene o f choliner g ic m u scarinic receptor s u btypes in male and f emale normal h u man u rinary bladder［J］.U rolo g y，2002，60（4）: 719-725.

［11］Y A M A D A S，KU R A OK A S，O S A N O A，et al.C haracteri z ation o f bladder selecti v ity o f antim u scarinic a g ents on the basis o f in v i v o dr u g-receptor blindin g［J］.I nt Ne u ro u rol J，2012，16（3）: 107-115.

［12］YO S H I D A A，S E K I M，N A SR I N S，et al.C haracteri z ation o f m u scarinicreceptors intheh u manbladder m u cosa:direct q u anti f ication o f s u btypes u sin g 4-D A MP m u stard［J］.U rolo g y，2011，78（3）:1357-1366

［13］C H A I Y A P R A S I T H I B，M A N G C F，K I L B I N G E R H，et al.I nhibition o f h u man detr u sor contraction by a u rotheli u mderi v ed f actor［J］.J U rol，2003，170（5）:1897-1900.

［14］H A W T HO R N M H，C H A PP L E C R，C O C K M，et al.U rotheliu m-deri v ed inhibitory f actor（s）in f l u ence on detr u sor m u scle contractility in v itro［J］.B r J P harmacol，2000，129（3）:416-419.

［15］M O R O C，U C H I Y A M A J，C H E SS-W I LL I A M S R.U rotheliallamina propria spontaneo u s acti v ity and the role o f M3 m u scarinic receptors in mediatin g rate responses to stretch and carbachol［J］. U rolo g y，2011，78（6）.D O I:10.1016/j.u rolo g y.2011.08.039.

［16］B I R DE R L A，R U GGI E R IM，T A K ED A M，et al.H o w does the u rotheli u ma ff ect bladder fu nction in health and disease？ICI-RS 2011［J］.Ne u ro u rol U rodyn，2012，31（3）:293-299.

［17］A NDE RSS O N K E.M u scarinic acetylcholine receptors in the u rinary tract［J］.H andb E x p P harmacol，2011，1（202）:319-344.

［18］H ED L U ND P，S T R EN G T，L EE T，et al.E ff ects o f tolterodine ona ff erent ne u rotransmissioninnormal andresini f erato x in treated conscio u s rats［J］.J U rol，2007，178（1）:326-331.

［19］KOVY A Z I N A I V，T S ENT S E V I T S KY A N，N I KO LS KY E E.I-denti f ication o f the m u scarinic receptor s u btypes in v ol v edin a u tore g u lation o f acetylcholine q u antal release f rom f ro g motor ner v e endin g s［J］.Do k l B iol S ci，2015，460（1）:5-7.

［20］M A T S U M O T O Y，MI Y A Z A T O M，YOKOY A M A H，et al.R ole o f M2 and M3 m u scarinic acetylcholine receptor s u btypes in acti v ation o f bladder a ff erent path w ays in spinal cord in j u red rats［J］.U rolo g y，2012，79（5）.D O I:10.1016/j.u rolo g y.2012.01.022.

（申海菊 編輯）

Correlation study between density of muscarinic receptors in bladder mucosa and bladder spasm after prostate surgery

Bin Liao，Shi-wang Huang，Jing-huai Cai，Wei-yi Chen，Yi-min Chen
（Department of Urology，the People's Hospital of Chaozhou City，Chaozhou，Guangdong 521000，China）

Objective To analyze the correlation of the bladder spasm after prostate surgery and the density of M2 and M3 muscarinic receptors in bladder mucosa.M ethods Patients with benign prostatic hyperplasia（BPH）in our hospital from May 2012 to May 2015 were enrolled as research objects and divided into observation group［BPH with overactive bladder（OAB）］and control group（BPH without OAB）.And then the observation group was further divided into bladder spasm subgroup and non-spasm subgroup.The density of M2 and M3 receptors were determined and their correlations with bladder spasm were analyzed.Results The rate of bladder spasm of the observation group was higher than that of the control group.The density of M2 and M3 muscarinic receptors of the observation group was lower than that of the control group.The density of M3 muscarinic receptor in the bladder spasm subgroup was lower than that in the non-spasm subgroup. Conclusions There is a correlation between bladder spasm after prostate surgery and density of M3 muscarinic receptor in bladder mucosa，suggesting M3 receptor may be involved in the pathogenesis of bladder spasm and it can be used as a target to design drugs for prevention and control of bladder spasm.

muscarinic receptor；bladder mucosa；bladder spasm；benign prostatic hyperplasia；overactive bladder

R 697.32

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.020

1005-8982（2016）15-0106-04

2015-12-28