曾昭偉 ，王學(xué)謙，常艷敏

(天津市南開醫(yī)院，天津300100)

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妊娠早期孕婦血清PAPP-A水平觀察

曾昭偉 ，王學(xué)謙，常艷敏

(天津市南開醫(yī)院，天津300100)

目的觀察孕早期婦女血清妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)水平變化。方法采用基于免疫微球標記的化學(xué)發(fā)光法檢測160份孕8～14周婦女血清標本中的PAPP-A，并比較不同年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)的孕12周婦女血清PAPP-A水平。結(jié)果孕8、9、10、11、12、13、14周孕婦中位血清PAPP-A水平分別為0.37、0.89、1.76、2.85、4.53、7.29、10.46 μg/mL，孕早期血清PAPP-A水平隨孕周增加而增高(P均<0.05)。孕12周孕婦中，年齡≤25歲、>25～30歲、>30～35歲、>35歲孕婦血清PAPP-A水平分別為(4.78±0.43)、(5.02±0.38)、(4.28±0.29)、(3.62±0.18)μg/mL，其中年齡>35歲者血清PAPP-A水平低于年齡≤25歲、>25～30歲、>30～35歲者(P均<0.05)；BMI 16～19者、>19～24者、>24者血清PAPP-A水平分別為(6.36±0.81)、(5.79±0.66)、(4.70±0.45)μg/mL，其中BMI>24者血清PAPP-A水平高于BMI 16～19者、>19～24者(P均<0.05)。結(jié)論孕早期婦女血清PAPP-A水平隨孕周增加而增高，高齡者(年齡>35歲)和高BMI者(BMI>24)血清PAPP-A顯著降低；在校正孕婦BMI、年齡等因素影響后，可得到更為精確的檢測結(jié)果。

妊娠相關(guān)血漿蛋白A；妊娠早期；體質(zhì)量指數(shù)；年齡；唐氏綜合征

妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)是Lin等[1]于1974年在孕婦血清中發(fā)現(xiàn)并分離的特異蛋白，主要由胎盤合體滋養(yǎng)層和蛻膜細胞合成分泌[2]。研究[3]表明，PAPP-A可能特定細胞生長有關(guān)，血清PAPP-A是產(chǎn)前篩查的參考指標之一，目前多用于唐氏綜合征(DS)的篩查[4，5]。在孕婦血清中，PAPP-A與嗜酸性主要堿性蛋白前體(proMBP)以異源四聚體的形式存在[6]。常規(guī)檢測手段ELISA法的靈敏性和特異性不足，檢測結(jié)果易受到孕婦年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)等的影響[7]，且常規(guī)檢測所用抗體未排除proMBP的固有干擾，因此在診斷DS方面不夠精確。2015年4～8月，本研究采用基于微球的化學(xué)發(fā)光檢測法，觀察孕早期婦女血清PAPP-A水平變化，并分析孕婦年齡和BMI對PAPP-A檢測結(jié)果的影響，現(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1試劑與儀器PAPP-A檢測超敏試劑盒(由本實驗室建立)，離心機(型號Allegra X-22，貝克曼公司)，0.22 μm微孔濾膜(美國Millipore公司)，辣根過氧化物酶(HRP，美國GE公司)，牛血清白蛋白(天津北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)，生物素、親和素(Sigma公司)，Lica Research 化學(xué)發(fā)光分析儀(上海博陽生物技術(shù)有限公司)，96孔發(fā)光微孔板、鏈霉素親和素包被供體球、受體微球(美國Perkin Elmer公司)，其余試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2孕早期婦女血清標本的來源及處理收集來院孕檢的婦女孕8、9、10、11、12、13、14周的靜脈血標本分別為8、15、20、32、56、16、13份，共計160份、每份4 mL。孕婦年齡19～40歲，平均年齡28.5歲，平均BMI為21.77，入選者均為早孕期8～14周，排除各種異常妊娠者(如異位妊娠、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、妊娠高血壓綜合征、子癇前期)及合并其他嚴重疾病者(如心血管疾病、關(guān)節(jié)炎)。將血液標本以3 000 r/min離心10 min，取上清，-80 ℃保存。

1.3血清PAPP-A檢測采用基于微球標記的化學(xué)發(fā)光免疫法檢測血清PAPP-A。PAPP-A標準品濃度分別為0、1、2.5、5、10、25、50 μg/mL，每瓶0.5 mL分裝，4 ℃保存?zhèn)溆?；利用基于PAPP-A特異表位的重組抗原免疫小鼠制備PAPP-A抗體；在帶有濾膜的離心管中加入0.1 mg PAPP-A抗體，9 000 r/min離心8 min，緩沖液洗滌6次，在抗體液中加入受體微球0.5 mg、25 mg/mL的 氰基硼氫化鈉(NaBH3CN) 10 μL、10%Tween-20 1.25 μL，加磷酸鹽緩沖液(PBS)至100 μL，37 ℃振蕩48 h；在離心管中加入另一標記抗體1 mg，9 000 r/min離心8 min，緩沖液洗滌6次，在50 μL抗體溶液中加入22 mg/mL的生物素5 μL，室溫振蕩20 h，用帶有濾膜的離心管去除剩余生物素；在96孔板中加入生物素化抗體(1∶2 000)25 μL、受體球(1∶100)25 μL、血清樣本25 μL，37 ℃孵育30 min；避光條件下加入175 μL供體微球，37 ℃孵育10 min，測定信號值。PAPP-A檢測結(jié)果均以中位數(shù)(MOM)表示[8]。

2　結(jié)果

2.1不同孕周孕婦血清PAPP-A水平孕8、9、10、11、12、13、14周孕婦中位血清PAPP-A水平分別為0.37、0.89、1.76、2.85、4.53、7.29、10.46 μg/mL，孕早期血清PAPP-A水平隨孕周增加而增加(P均<0.05)。

2.2不同年齡孕婦血清PAPP-A水平比較孕12周孕婦中，年齡≤25歲、>25～30歲、>30～35歲、>35歲孕婦血清PAPP-A水平分別為(4.78±0.43)、(5.02±0.38)、(4.28±0.29)、(3.62±0.18)μg/mL，其中年齡>35歲者血清PAPP-A水平低于年齡≤25歲、>25～30歲、>30～35歲者(P均<0.05)。

2.3不同BMI孕婦血清PAPP-A水平比較孕12周孕婦中，BMI 16～19者、>19～24者、>24者血清PAPP-A水平分別為(6.36±0.81)、(5.79±0.66)、(4.70±0.45)μg/mL，其中BMI>24者血清PAPP-A水平高于BMI 16～19者、>19～24者(P均<0.05)。

3　討論

DS是一種最常見的染色體異常遺傳性疾病，智力發(fā)育不全是該病最突出、最嚴重的表現(xiàn)，并伴有其他嚴重的先天性、多發(fā)性畸形[9]。DS已成為影響我國出生人口素質(zhì)的重要因素之一，盡早診斷并終止妊娠可減輕社會負擔(dān)、提高出生人口素質(zhì)。

PAPP-A是金屬結(jié)合蛋白酶鋅指多肽超家族成員之一，分子量約為500 kD[10]。PAPP-A可以由不同類型的細胞分泌，組織分布非常廣泛，在子宮內(nèi)膜、黃體、前列腺、睪丸、心肌、腎臟等處均有分布。巨噬細胞、成纖維細胞、成骨細胞、骨髓基質(zhì)細胞、血管平滑肌細胞及胎盤滋養(yǎng)層的合體細胞、蛻膜細胞、卵巢粒膜細胞等均具有合成PAPP-A的能力[11]。近年來研究[12]表明，孕婦血清PAPP-A水平異?？赡芘c胎兒染色體異常、異位妊娠、先兆流產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩有關(guān)。研究[13]表明，母體血清PAPP-A異常低值與胎兒染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常有關(guān)，PAPP-A是孕早期最常用的篩查指標之一，敏感篩查時間為孕8～14周。PAPP-A與AFP、β-HCG聯(lián)合檢測，可提高染色體疾病檢出率，減少畸形兒出生率[14]。PAPP-A檢測還為滋養(yǎng)層細胞疾病、妊娠高血壓綜合征等妊娠相關(guān)疾病的篩查提供重要參考，有助于孕婦加強防范，保證母嬰健康。

目前PAPP-A常用的檢測手段為ELISA法，但檢測準確率尚不理想[15]，血清PAPP-A檢測結(jié)果也易受到BMI[16]、年齡[17]以及單雙胎[18]等多因素影響。為此，我們在制備PAPP-A特異抗體從而排除proMBP非特異干擾的基礎(chǔ)上，利用靈敏性和準確性均較高的基于微球標記的化學(xué)發(fā)光法檢測血清PAPP-A。我們選擇了孕8～14周婦女的血清標本，檢測結(jié)果顯示，孕早期婦女血清PAPP-A水平隨孕周增加而增加；在孕12周婦女中，高齡者(年齡>35歲)和高BMI者(BMI>24)血清PAPP-A顯著降低，與國外研究結(jié)果相符[19]。因此，我們推測年齡、BMI等因素對血清PAPP-A檢測結(jié)果有一定影響。

綜上所述，PAPP-A檢測雖不能做出診斷，但對胎兒無創(chuàng)傷，且對篩查出的高危人群可采取后續(xù)檢查措施進一步確認，避免了對所有孕早期婦女進行有創(chuàng)檢查。另外，血清PAPP-A水平也可間接反映胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況。但根據(jù)上述結(jié)果，我們認為PAPP-A檢測結(jié)果必須對年齡、BMI等影響因素進行校正[20]，才能反映真實的血清PAPP-A水平。然而，本研究收集的血清標本量相對較小，上述觀點有待后續(xù)擴大標本量進行驗證。我們將利用本實驗室建立的優(yōu)良檢測體系，根據(jù)孕婦年齡及BMI細化分組，校正影響因素，推算出適用于特定地區(qū)的個性化系數(shù)，建立孕早期血清PAPP-A正常范圍，使PAPP-A檢測更好地應(yīng)用于臨床產(chǎn)前篩查。

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天津市衛(wèi)生局科技基金項目(2013KY24)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.027

R714.1

B

1002-266X(2016)19-0074-03

2015-12-08)