李爭，陳瑜，王振國

(1河北北方學(xué)院，河北張家口075000；2中國人民解放軍第三○九醫(yī)院)

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宮頸癌組織中KGF、KGFR及MMP-9的表達(dá)變化

李爭1，陳瑜1，王振國2

(1河北北方學(xué)院，河北張家口075000；2中國人民解放軍第三○九醫(yī)院)

目的觀察宮頸癌組織中角化生長因子(KGF)、KGF受體(KGFR)與基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法檢測56例宮頸癌組織(宮頸癌組)及21例正常宮頸組織(對照組)中的KGF、KGFR、MMP-9，分析三者與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及三者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)陽性分別為40、26、44例，對照組分別為4、2、4例，宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)與對照組相比，P均<0.05。有脈管轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中KGF、KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于無脈管轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)；低分化者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于中、高分化者(P<0.05)。宮頸癌組織中KGF表達(dá)與KGFR、MMP-9表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.272、0.440，P均<0.05)。結(jié)論宮頸癌組織中KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)增高，三者的異常表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，三者之間可能存在協(xié)同作用。

宮頸癌；角化生長因子；角化生長因子受體；基質(zhì)金屬蛋白酶9

我國宮頸癌發(fā)病率為5.54%，在所有女性腫瘤中發(fā)病率居第四[1]。目前認(rèn)為宮頸癌是一種感染性疾病，主要由高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染所致，但并非所有感染HPV的患者都會發(fā)生宮頸癌。所以宮頸癌發(fā)病可能是多因素共同作用的結(jié)果。角化生長因子(KGF)、KGF受體(KGFR)在上皮性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，目前已發(fā)現(xiàn)二者在多種腫瘤組織中異常表達(dá)[2]。KGFR在宮頸癌細(xì)胞系Hela、CaSki及宮頸癌組織中亦呈高表達(dá)[3,4]，推測其表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。KGF主要作用于上皮細(xì)胞，具有促進(jìn)上皮細(xì)胞有絲分裂、生長、分化、遷移等生物活性[5]，KGF可通過激活NF-κB從而誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子A、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和尿激酶型纖維酶原激活物表達(dá)[6]。MMP-9被證實(shí)與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)。我們觀察了宮頸癌組織中KGF、KGFR與MMP-9的表達(dá)變化，并探討三者與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1組織標(biāo)本2011年8月～2015年12月中國人民解放軍第309醫(yī)院手術(shù)切除的宮頸癌組織標(biāo)本56例份(均為宮頸鱗癌，宮頸癌組)、正常宮頸組織標(biāo)本21例份(對照組)。所有標(biāo)本均來源于行宮頸癌根治術(shù)的宮頸癌患者?；颊吣挲g25～65歲，F(xiàn)IGO分期ⅠA期7例、ⅠB期29例、ⅡA期15例、ⅡB期4例、Ⅲ期1例，組織病理學(xué)分級為高分化6例、中分化20例、低分化30例，術(shù)前未接受過放化療及靶向治療。

1.2主要試劑兔抗人KGF及KGFR多克隆抗體購自武漢博士德生物有限公司，鼠抗人MMP-9單克隆抗體、山羊血清封閉液和免疫組化試劑盒PV6000(一步法聚合物檢測系統(tǒng))購自北京中杉生物技術(shù)公司。

1.3KGF、KGFR、MMP-9檢測方法采用免疫組化染色(即用型一步法)：石蠟包埋組織切片，常規(guī)脫蠟水化，高壓修復(fù)抗原(KGF、KGFR選用檸檬酸緩沖液，MMP-9選用EDTA)，經(jīng)內(nèi)源性過氧化酶(3% H2O2)阻斷劑孵育10 min，PBS緩沖液沖洗。5%山羊血清37 ℃封閉15 min，濾紙吸凈液體后加KGF/KGFR兔抗人多克隆抗體、MMP-9鼠抗人單克隆抗體(稀釋度1∶50)，4 ℃冰箱過夜。PBS緩沖液沖洗后加入即用型二抗，37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液沖洗，常規(guī)DAB顯色，蘇木素復(fù)染、脫水、透明，封片鏡檢。相同石蠟切片以PBS替代一抗作為陰性對照，用已知陽性片作陽性對照。采用雙盲法由兩位病理科主任醫(yī)師分別閱片。蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜。參照文獻(xiàn)[7]方法，以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比判定結(jié)果，染色強(qiáng)度為無色計(jì)0分、淡黃色計(jì)1分、棕黃色計(jì)2分、棕褐色計(jì)3分，陽性細(xì)胞百分比為0%計(jì)0分、≤10%計(jì)1分、>10%～50%計(jì)2分、>50%～75%計(jì)3分、>75%計(jì)4分，兩項(xiàng)得分相乘，>3判定為目的蛋白表達(dá)陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1宮頸癌組與對照組KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)比較宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)陽性分別為40、26、44例，對照組分別為4、2、4例，宮頸癌組KGF、KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)與對照組相比，P均<0.05。見圖1～3。

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖1兩組KGF表達(dá)情況

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖2兩組KGFR表達(dá)情況

注：A為宮頸癌組，B為對照組。

圖3兩組MMP-9表達(dá)情況

2.2KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系有脈管轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中KGF、KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于無脈管轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者KGFR、KGF/KGFR、MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)；低分化者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于中、高分化者(P<0.05)。詳見表1。

表1　KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

注：與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，#P<0.05；與有脈管轉(zhuǎn)移者相比，*P均<0.05；與低分化者相比，ΔP均<0.05。

2.3宮頸癌組織中KGF、KGFR、MMP-9表達(dá)的相關(guān)性KGF表達(dá)陽性的40例宮頸癌組織中，KGFR陽性22例、MMP-9陽性36例，Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，KGF表達(dá)與KGFR、MMP-9表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.272、0.440，P均<0.05)。

3　討論

KGF是成纖維細(xì)胞生長因子家族成員之一，由Robin等[8]從胚胎肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液上清中分離純化得到。KGF主要由各種來源的間質(zhì)細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，作用于上皮細(xì)胞，具有促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖、分化、遷移等活性[9]。KGFR主要表達(dá)于上皮細(xì)胞，可被KGF特異性識別[10]，同時也可識別FGF-1、3、10，但KGF與KGFR之間的連接更具高效性，二者共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理活動。早期研究[3,4,11,12]發(fā)現(xiàn)KGF、KGFR在宮頸癌細(xì)胞系Hela、CaSki及宮頸癌組織中有異常高表達(dá)，推測其表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究中，宮頸癌組KGF、KGFR陽性表達(dá)例數(shù)高于對照組，且在有脈管轉(zhuǎn)移者和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中陽性表達(dá)例數(shù)更多，提示KGF、KGFR參與宮頸癌的發(fā)病，二者高表達(dá)與宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，與相關(guān)研究結(jié)果一致。

MMP-9為MMP家族成員之一，主要參與基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)Ⅳ膠原的水解，從而使腫瘤細(xì)胞突破組織屏障，對周圍正常組織進(jìn)行侵襲并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[13,14]。早期研究[15]表明，MMP-9表達(dá)隨宮頸病變嚴(yán)重程度增高而增高，可能是宮頸損傷的一種標(biāo)志物。本研究中，宮頸癌組MMP-9陽性表達(dá)例數(shù)高于對照組，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管轉(zhuǎn)移者的宮頸癌組織中表達(dá)更高，推測MMP-9高表達(dá)參與了宮頸癌的發(fā)病和進(jìn)展，可能成為宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的參考指標(biāo)。

KGF僅能與KGFR相連接而發(fā)揮作用，因此抑制KGFR即可使KGF的生理活性受到抑制，二者在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中KGF與KGFR表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，二者聯(lián)合表達(dá)在有脈管轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中更為常見，證實(shí)了上述觀點(diǎn)。同時，宮頸癌組織中KGF表達(dá)與MMP-9表達(dá)也呈正相關(guān)關(guān)系，提示KGF、MMP-9協(xié)同參與宮頸癌的發(fā)病和侵襲，但二者協(xié)同致病的具體機(jī)制尚不明確，推測二者間可能存在一定的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，KGF可誘導(dǎo)MMP-9表達(dá)，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[16～18]。

總之，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是多階段、多步驟的，KGF、KGFR、MMP-9異常表達(dá)參與了宮頸癌的發(fā)病和侵襲過程，三者之間存在一定相互作用。KGF、KGFR及MMP-9有望成為宮頸癌診斷及預(yù)后評估的標(biāo)志物，甚至可能成為宮頸癌靶向治療的新的靶點(diǎn)。

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王振國(E-mail: guozheng1963@163.com)

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B

1002-266X(2016)19-0050-03

2016-02-22)