王雪芬王　磊陳樹杰（1.河北省邯鄲市第二醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；.河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲056001）

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苦參素對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究*

王雪芬1△王磊2陳樹杰2
（1.河北省邯鄲市第二醫(yī)院，河北 邯鄲 056001；2.河北省邯鄲市中心醫(yī)院，河北 邯鄲056001）

目的 研究苦參素（OMT）對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。方法 120只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，OMT（25、50、100 mg/kg）組和地爾硫（1 mg/kg）組；通過夾閉冠狀動(dòng)脈30 min后松夾的方法制備心肌缺血再灌注損傷大鼠模型；再灌注后立即通過腹腔注射給藥治療（每天1次，療程7 d），假手術(shù)組和模型組給予等體積生理鹽水。通過TTC染色分析計(jì)算心肌梗死面積，測(cè)定心肌組織中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性和丙二醛（MDA）含量，測(cè)定血清中心肌酶（AST、CPK、LDH）含量，HE染色觀察心肌組織病理性形態(tài)學(xué)變化，TUNEL染色觀察心肌細(xì)胞凋亡狀況并計(jì)算凋亡指數(shù)（AI）；RT-PCR法測(cè)定心肌組織中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)并計(jì)算Bcl-2/Bax表達(dá)比值，Western blot法測(cè)定心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)。結(jié)果 經(jīng)OMT（50、100 mg/kg）治療7 d能夠顯著降低心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌組織梗死面積，改善心肌組織中SOD、GSH-Px、CAT活性并降低MDA含量，降低血清中AST、CPK、LDH含量，改善心肌組織病變，抑制心肌細(xì)胞凋亡、降低AI，上調(diào)Bcl-2 mRNA表達(dá)、下調(diào)Bax mRNA表達(dá)，提高Bcl-2/Bax比值，降低心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)；與模型組比較，上述差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論 OMT能夠降低心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌組織梗死面積、抑制心肌組織病變和心肌細(xì)胞凋亡、改善心功能，提示OMT對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用；作用機(jī)制可能與OMT能夠有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化應(yīng)激損傷，調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因表達(dá)以及降低NF-kB蛋白表達(dá)有關(guān)。

缺血再灌注苦參素心肌保護(hù)機(jī)制

【Abstract】Objective：To investigate the protective effects of Oxymatrine（OMT）on the rats with myocardial ischemia-reperfusion injury and its mechanism.Methods：120 rats were randomly devided into six groups：sham operation group，the model group，OMT（25，50，100 mg/kg）treated groups and diltiazem（1 mg/kg）treated group；rat models with myocardial ischemia-reperfusion injury were made by clamping the artery for 30min；and the drugs were given after operation immediately，once a day for 7 days.The areas of myocardial infarction were analysised by TTC staining，the activity of SOD，GSH-Px，CAT and the content of MDA in myocardial tissue were determined，as well as the content of AST，CPK，LDH in serum；the histopathological changes of myocardial tissue was observed by HE staining，and the apoptosis of cardiomyocytes was observed by TUNEL and the apoptosis index（AI）was calculated；the expression of Bcl-2 mRNA and Bax mRNA were determined and the ratio of Bcl-2/ Bax were calculated；the expression of caspase-3 and NF-kB were examined with Western blot.Results：The myocardial infarction areas in OMT（50，100 mg/kg）treated groups were significantly decreased；the activity of SOD，GSH-Px，CAT in myocardial tissue were significantly increased and the activity of MDA was significantly decreased，as well as the level of AST，CPK，LDH in serum；the myocardial tissue histopathological changes and cardiomyocytes apoptosis were significantly improved；the AI in OMT（50，100 mg/kg）treated groups were significantly decreased；the expression of Bcl-2 mRNA was significantly up-regulated and the Bax mRNA was signifi-cantly down-regulated；the ratio of Bcl-2/Bax was significantly increased；the expression of caspase-3 and NF-kB protein were significantly decreased；compared with the model group，all of the difference above was significant（P <0.05 or P<0.01）.Conclusion：OMT can effectively lower the myocardial infarction areas of myocardial ischemia-reperfusion injury rats，inhibit the histopathological changes and cardiomyocytes apoptosis，and improve heart function，suggesting that OMT has protective effects on the rats with myocardial ischemia-reperfusion injury，which is perhaps related to its effects on enhancing the activity of antioxidant enzymes，inhibiting the oxidative stress，regulating the expression of apoptosis related genes and protein，and lowering the expression of NF-kB protein.

【Key words】Oxymatrine；Myocardial；Ischemia-reperfusion；Protection；Mechanism

冠心病及其所引發(fā)的急性心肌梗死已經(jīng)發(fā)展成為嚴(yán)重危害人類生命健康的主要疾病，目前臨床上主要采取溶栓、介入、支架等方法及時(shí)恢復(fù)血流供應(yīng)，極大降低了心肌梗死患者的死亡率，但“再灌注損傷”并發(fā)癥的存在嚴(yán)重影響著該類患者的愈后。因此，研究開發(fā)能夠有效改善再灌注損傷的藥物及治療方法，成為有效改善心肌梗死患者治療效果的關(guān)鍵?？鄥⑺兀∣MT）是從中藥苦參（Sophora flavescens Ait.）中提取的一種喹諾西啶類生物堿，具有抗炎、抗病毒、抗凋亡、抗肝纖維化等多種生物學(xué)活性［1-3］。有研究發(fā)現(xiàn)，OMT對(duì)腎臟、肝臟缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用［4-5］，但仍未見文獻(xiàn)報(bào)道OMT是否對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過夾閉冠狀動(dòng)脈30 min后松夾恢復(fù)血流再灌注的方法制備心肌缺血再灌注損傷大鼠模型，研究OMT對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1藥物與試劑OMT（南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)20141025，純度≥98%）；注射用鹽酸地爾硫（天津田邊制藥有限公司，批號(hào)1408026）；TTC（美國Sigma公司）；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、T-AOC和丙二醛（MDA）含量測(cè)定試劑盒，HE、TUNEL染色試劑盒 （南京建成生物工程研究所）；天門冬氨酸氫基轉(zhuǎn)移酶 （AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CPK）測(cè)定試劑盒（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；RNA提取液Trizol試劑盒（北京Trans Gen公司）；bcl-2、bax的上下游引物 （上海博亞生物公司）；Caspase-3、NF-κB單抗 （碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性SD大鼠（8周齡，體質(zhì)量220～260 g），由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（冀）2008-1-003，動(dòng)物合格證號(hào)：201408026。

1.3主要儀器DH-150型動(dòng)物人工呼吸機(jī) （浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器有限公司）；wi93962生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（北京北瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司）；BS-300全自動(dòng)生化分析儀 （深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；UV762型紫外-可見分光光度計(jì) （上海楚定分析儀器有限公司）；RT-PCR儀 （武漢新未來儀器技術(shù)有限公司）；BI-2000醫(yī)用圖像分析系統(tǒng)；RM-2135型石蠟切片機(jī) （德國Leica公司）；DYY-11型多用電泳儀、JYSCZ2電泳槽（北京六一儀器廠）。

1.4分組與造模120只實(shí)驗(yàn)用大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，OMT（25、50、100 mg/kg）組和地爾硫（1 mg/kg）組［6］。模型的制備：麻醉后通過肢體二導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測(cè)心功能，氣管切開、插管并連接動(dòng)物呼吸機(jī)（頻率60次/min，潮氣量20 mL/kg，呼吸比1.5∶1）；穩(wěn)定10 min后，開胸、剪開心包、暴露心臟，于左心耳下緣約2 mm處夾閉冠狀動(dòng)脈，心電圖示ST段抬高或T波高聳表示心肌缺血；30 min后松開動(dòng)脈夾恢復(fù)血流灌注，抬高的ST段降低或高聳的T波得以恢復(fù)表示心肌再灌注成功。假手術(shù)組行手術(shù)通路，除不夾閉冠狀動(dòng)脈外，其余操作與試驗(yàn)組完全一致。再灌注后，OMT各組和地爾硫組立即通過腹腔注射給藥治療，每天1次，療程7 d，假手術(shù)組和模型對(duì)照組給予等體積0.9%氯化鈉注射液。

1.5標(biāo)本采集與檢測(cè)1）心肌組織梗死面積的測(cè)定：麻醉后開胸取心臟組織，用0.9%氯化鈉注射液沖洗干凈，-20℃凍存20 min后進(jìn)行切片，于1%TTC溶液恒溫（37℃）避光孵育15 min，正常組織呈紅色、梗死區(qū)呈灰白色，然后通過BI-2000醫(yī)用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算心肌組織梗死面積。2）心肌組織中抗氧化酶活性和MDA含量的測(cè)定：參照前法取心臟組織，剪碎后加入適量冷裂解液行研磨勻漿，3000 r/min離心10 min后取上清液，然后按照各試劑盒操作方法步驟，通過紫外-可見分光光度計(jì)平行測(cè)定各組大鼠心肌組織中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性和MDA含量。3）血清中心肌酶含量的測(cè)定：于前法取心臟組織前，開腹經(jīng)腹主動(dòng)脈取血并離心取血清，然后按照各試劑盒操作方法步驟，通過全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定各組大鼠血清中心肌酶（AST、CPK、LDH）含量。4）心肌組織病理性形態(tài)學(xué)變化的觀察：參照前法取心肌組織，經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定、石蠟包埋，切片和展片處理后，行常規(guī)HE染色和封片處理，然后通過倒置光學(xué)顯微鏡觀察心肌組織病理性形態(tài)學(xué)變化并照相保存。5）心肌細(xì)胞凋亡的檢測(cè)：取制備的心肌組織石蠟切片，按照試劑盒操作步驟行TUNEL染色（細(xì)胞核黃褐色為陽性著色），然后通過光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡狀況并照相保存。凋亡指數(shù)（AI）的計(jì)算：每張染色切片隨機(jī)選取6個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)和陽性細(xì)胞數(shù)，各組分別取平均值，AI（%）=（陽性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）× 100%。6）心肌組織中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)的檢測(cè)及Bcl-2/Bax比值的計(jì)算：從基因庫中查閱大鼠Bcl-2、Bax、β-actin基因cDNA序列并通過Oligo軟件設(shè)計(jì)上、下游引物。Bcl-2：上游5′-GGGATGCCTTTGT GGAACTA-3′，下游5′-TGATTT GACCATTTGCCTGA-3′；Bax上游5′-ATCCAGGATCGAGCAGGGAGGATGG -3′，下游5′-AGATGGTCACTGTCTGCCATGTGGG-3′；β-actin上游5′-CCTGTATGCC TCTGGTCGTA-3′，下游5′-CCATCTCTTGCTCGAAGTCT-3′。取制備的心肌組織勻漿，加入適量Trizol試劑提取總RNA，測(cè)定總RNA濃度，取1 μg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)，擴(kuò)增完畢后，取PCR產(chǎn)物于瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像儀觀察并照相。以β-actin為內(nèi)參，由灰度值進(jìn)行半定量分析Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)，并計(jì)算bcl-2/Bax表達(dá)比值。7）心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)的檢測(cè)：取上述所制備心肌組織勻漿液，經(jīng)12000 r/min低溫（4℃）離心10 min后取沉淀，BCA法進(jìn)行蛋白定量，然后通過Western blot法測(cè)定各組大鼠心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用Quantity One軟件進(jìn)行分析。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠心肌組織梗死面積比較見表1。模型組大鼠心肌組織梗死面積較假手術(shù)組顯著增高 （P< 0.01）；與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組大鼠心肌組織梗死面積顯著減?。≒<0.05或P<0.01）。

表1　各組大鼠心肌組織梗死面積及心肌細(xì)胞AI比較（±s）

表1　各組大鼠心肌組織梗死面積及心肌細(xì)胞AI比較（±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2各組心肌組織中 SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量比較見表2。模型組大鼠心肌組織中SOD、GSH-Px、CAT活性較假手術(shù)組顯著降低 （P< 0.01），MDA含量顯著升高 （P<0.01）；而與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組大鼠SOD、GSH-Px、CAT活性顯著升高且MDA含量顯著降低 （P<0.05或P< 0.01）。

表2　各組大鼠心肌組織中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量比較（±s）

表2　各組大鼠心肌組織中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量比較（±s）

組別假手術(shù)組模型組OMT（25 mg/kg）組n 10 10 10 OMT（50 mg/kg）組　10 OMT（100 mg/kg）組　10地爾硫（1 mg/kg）組　10 SOD（U/mg）GSH-Px（U/mg）82.3±11.4　4.9±1.0 47.2±7.6**　2.6±0.8**54.1±8.5　2.9±1.1 62.9±10.3△　3.5±1.1△70.4±12.2△△　4.0±1.5△63.8±9.7△　3.1±1.3 CAT（U/mg）MDA（nmol/mg）4.6±1.3　2.4±0.5 2.5±0.9**　5.1±0.7**2.8±0.7　4.6±0.9 3.4±1.0△　3.5±0.6△△3.9±1.2△△　2.7±0.6△△3.5±0.9△　2.2±0.5△△

2.3各組大鼠血清中AST、CPK、LDH含量比較見表3。模型組大鼠血清中AST、CPK、LDH含量較假手術(shù)組顯著升高（P<0.01）；而與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組AST、CPK、LDH含量均顯著降低 （P< 0.05或P<0.01）。

表3　各組大鼠血清中AST、CPK、LDH含量比較（U/L，±s）

表3　各組大鼠血清中AST、CPK、LDH含量比較（U/L，±s）

組別假手術(shù)組模型組OMT（25 mg/kg）組n 10 10 10 OMT（50 mg/kg）組　10 OMT（100 mg/kg）組　10地爾硫（1 mg/kg）組　10 AST　CPK 276.8±57.1　532.7±64.0 560.4±96.5**1005.4±142.9**519.2±103.7　876.1±137.2 431.6±85.2△　729.5±113.8△△385.7±71.9△△　671.4±98.6△△450.5±93.1△　753.8±120.4△LDH 618.2±73.5 1107.4±136.1**926.8±140.2 815.9±113.4△728.6±108.3△△942.7±144.1

圖1　各組大鼠心肌組織比較（HE染色，×400）

2.4各組大鼠心肌組織病變比較見圖1。觀察心肌組織病理切片發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組心肌組織結(jié)構(gòu)和心肌細(xì)胞形態(tài)均未見異常；模型組心肌組織呈現(xiàn)心肌纖維紊亂、斷裂，間質(zhì)水腫變性，心肌細(xì)胞呈空泡變性、胞質(zhì)著色不均、胞核固縮等明顯的病理性形態(tài)學(xué)變化；與模型組比較，OMT組大鼠心肌組織病理性形態(tài)學(xué)變化明顯改善，以O(shè)MT（100 mg/kg）組效果最為顯著。

2.5各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況比較見圖2、表1。假手術(shù)組僅可見極少量凋亡心肌細(xì)胞，模型組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量較假手術(shù)組明顯增多；而與模型組比較，OMT治療組大鼠心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少，其中以O(shè)MT（100 mg/kg）組最為顯著。比較AI發(fā)現(xiàn)：模型組心肌細(xì)胞AI較假手術(shù)組顯著升高（P<0.01）；而與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組大鼠心肌細(xì)胞AI顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。

圖2　各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡情況比較（TUNEL染色，×400）

2.6各組大鼠心肌組織中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)和Bcl-2/Bax比值比較見表4。模型組心肌組織中Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表達(dá)均顯著升高 （P< 0.05或P<0.01），Bcl-2/Bax表達(dá)比值顯著降低 （P< 0.01）；與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組 Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著升高且Bax mRNA表達(dá)顯著降低，Bcl-2/Bax表達(dá)比值顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。

表4　各組大鼠心肌組織中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)和Bcl-2/Bax比值比較（±s）

表4　各組大鼠心肌組織中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)和Bcl-2/Bax比值比較（±s）

組別假手術(shù)組模型組OMT（25 mg/kg）組n 10 10 10 OMT（50 mg/kg）組　10 OMT（100 mg/kg）組　10地爾硫（1 mg/kg）組　10 Bcl-2（×10-3） Bax（×10-3）35.1±7.4　64.8±17.2 44.8±7.9*　120.5±31.7**51.6±9.3　104.6±35.1 62.4±11.5△　83.9±28.5△△70.1±12.2△△　76.0±24.1△△52.8±10.4　94.2±33.6△Bcl-2/Bax 0.54±0.23 0.36±0.17**0.43±0.21 0.74±0.28△△0.93±0.36△△0.56±0.18△

2.7各組大鼠心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)比較見圖3、表5。模型組大鼠心肌組織Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)量較假手術(shù)組顯著升高（P<0.01）；而與模型組比較，OMT（50、100 mg/kg）組Caspase-3、 NF-κB蛋白表達(dá)量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。

圖3　OMT對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌組織Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)的影響

表5各組大鼠心肌組織中Caspase-3、NF-κB蛋白表達(dá)比較（±s）

組別假手術(shù)組模型組OMT（25 mg/kg）組n 10 10 10 OMT（50 mg/kg）組　10 OMT（100 mg/kg）組　10地爾硫（1 mg/kg）組　10 Caspase-3/β-actin　NF-κB/β-actin 0.20±0.04　0.17±0.03 0.46±0.09**　0.43±0.09**0.41±0.10　0.39±0.08 0.36±0.07△　0.32±0.09△0.27±0.06△△　0.24±0.05△△0.32±0.08△　0.30±0.07△

3　討　論

缺血再灌注損傷是病理機(jī)制非常復(fù)雜，近年來Han ShX等［7］和Zhao YJ等［8］研究發(fā)現(xiàn)再灌注后，隨著氧的涌入和抗氧化酶活性降低氧自由基大量產(chǎn)生和過剩，而引發(fā)廣泛的氧化應(yīng)激損傷以及其繼發(fā)的細(xì)胞凋亡可能是心肌缺血再灌注損傷重要的病理機(jī)制，這也為學(xué)者研發(fā)改善心肌缺血治療效果的新型藥物提供了新的思路。OMT是中藥苦參的主要活性成分之一，是喹諾西啶類生物堿，具有抗氧化和抗凋亡的生物學(xué)活性［5-9］。本實(shí)驗(yàn)通過夾閉冠狀動(dòng)脈30 min后松夾恢復(fù)血流再灌注的方法制備的心肌缺血再灌注損傷大鼠模型進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，OMT能夠顯著降低心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌梗死面積、抑制細(xì)胞凋亡、改善心肌組織病變，提示OMT對(duì)缺血再灌注損傷大鼠具有保護(hù)作用。

正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)氧自由基的生成與清除處于動(dòng)態(tài)平衡，而缺血再灌注后氧的大量涌入與抗氧化酶活性的降低，將導(dǎo)致該平衡的破壞而引發(fā)氧化應(yīng)激損傷。SOD是體內(nèi)非常重要的抗氧化酶，它能夠催化還原氧自由基生成H2O2，并且能夠在GSH-Px或CAT的進(jìn)一步催化作用下還原生成對(duì)人無害的H2O 和O2［10-11］，所以SOD、GSH-Px、CAT的活性能夠反映機(jī)體抗氧化能力；而脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA的含量也能間接反映機(jī)體氧化應(yīng)激損傷程度。本實(shí)驗(yàn)研究表明，經(jīng)OMT（50～100 mg/kg）治療7 d能夠顯著改善抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性、降低MDA含量，降低血清中心肌酶（AST、CPK、LDH）含量，提示OMT具有降低心肌缺血再灌注大鼠氧化應(yīng)激損傷、改善心功能的作用。

細(xì)胞凋亡是一種由多種基因參與調(diào)控的程序性死亡的過程，存在著非常復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制。Bcl-2基因家族在細(xì)胞凋亡過程中起著非常重要的調(diào)控作用，其中Bcl-2抑制細(xì)胞凋亡、Bax促細(xì)胞凋亡，二者間相互作用共同調(diào)控細(xì)胞凋亡；并且細(xì)胞凋亡不僅與Bcl-2和Bax的表達(dá)密切相關(guān)，甚至更依賴于Bcl-2/Bax比值［12-13］。Caspases蛋白家族參與細(xì)胞凋亡啟動(dòng)以及整個(gè)過程的調(diào)節(jié)，其中Caspase-3被認(rèn)為是各種凋亡刺激因子激活的關(guān)鍵蛋白酶，Cspsase-3激活并介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是心肌缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一［14］。細(xì)胞凋亡具有多種誘發(fā)因素，包括氧化應(yīng)激損傷，而NF-κB蛋白則是連接氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的“橋梁”；常態(tài)下，NF-κB以無活性形式存在于胞質(zhì)中，而當(dāng)受到外界因素刺激時(shí)NF-κB將進(jìn)入胞核并調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，Zhang Q等［15］研究發(fā)現(xiàn)NF-κB激活與氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，OMT（50～100 mg/kg）治療7 d能夠明顯改善心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞凋亡狀況，顯著上調(diào)Bcl-2表達(dá)、下調(diào)促Bax表達(dá)、提高Bcl-2/Bax比值，降低凋亡相關(guān)蛋白NF-κB、Caspase-3表達(dá)，提示OMT能夠通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)而起到抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用。

綜上所述，OMT可能通過降低氧化應(yīng)激損傷和抑制細(xì)胞凋亡對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠起到保護(hù)作用；今后可通過培養(yǎng)心肌細(xì)胞并制作缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞模型、給予OMT進(jìn)行干預(yù)，從而在體外細(xì)胞水平上進(jìn)一步探討OMT對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。

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河北省衛(wèi)生廳重點(diǎn)科技研究計(jì)劃（20130359）

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（2015-11-01）