謝瑩，魏博

(第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院 感染科，上海 200070)

脾多肽注射液對晚期高侵襲性肝癌患者血清生化學及腫瘤指標的影響

謝瑩，魏博Δ

(第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院 感染科，上海 200070)

目的探討脾多肽對晚期高侵襲性肝癌患者血清生化學及腫瘤指標的影響。方法選取晚期高侵襲性肝癌患者60例，按隨機數(shù)字表法分為2組，各30例，對照組予以肝動脈介入化療聯(lián)合常規(guī)治療，研究組在對照組治療基礎上予以脾多肽注射液10 mL，1次/2天，治療1月后改為2次/周，共治療6個月為一療程，測定血清腫瘤標志物，取肝腫瘤組織測定基質金屬蛋白、侵襲性相關指標，同時隨訪對比安全性狀況。結果與治療前相比，對照組治療后CD3+、CD4+水平升高，研究組治療后CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平升高，2組治療后甲胎蛋白(alpha fetal protein，AFP)、癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、糖類抗原CA125及CA199水平降低，基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)、基質金屬蛋白酶7(MMP-7)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)及基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)水平降低，肝癌衍生生長因子(hepatoma derived growth factor，HDGF)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)及微血管密度(microvascular vascular density，MVD)水平降低(P<0.05)；與對照組相比，研究組治療后CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平較高，AFP、CEA、CA125及CA199水平較低，MMP-2、MMP-7、MMP-9及TIMP-1水平較低，HDGF、VEGF及MVD水平較低(P<0.05)。結論脾多肽可以提高晚期高侵襲性肝癌患者免疫功能，降低腫瘤標志物及侵襲性相關指標水平，安全性高。

脾多肽；晚期高侵襲性肝癌；免疫功能；腫瘤標志物；侵襲性相關指標

對于原發(fā)性肝癌，根治手術是公認的有效方案，然而早期診斷較為困難，大多數(shù)晚期患者存在多發(fā)轉移及高侵襲性，80%～90%不能選擇手術治療[1]。經(jīng)肝動脈化療栓塞是晚期原發(fā)性肝癌非手術的首選措施，然而化療藥物不良反應多，部分患者難以耐受[2]。隨著分子生物學及免疫學的進展，腫瘤標志物、基質金屬蛋白及VEGF等侵襲性相關指標與肝癌高侵襲性和轉移具有一定相關性。肝癌免疫治療成為研究的重心，增強肝癌免疫功能，可以提高腫瘤特異性免疫能力，阻斷腫瘤轉移及高侵襲性，成為目前我國乃至全世界研究的重點[3]。醫(yī)學者逐漸將免疫調節(jié)劑應用于腫瘤的治療當中，脾多肽是從動物脾臟中提取的活性肽類藥物，可以抑制腫瘤增殖，調節(jié)機體免疫功能，在晚期高侵襲性肝癌治療中具有一定的潛力[4]。本次選取晚期高侵襲性肝癌患者60例，探討脾多肽對血清生化學及腫瘤指標的影響，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年11月～2015年8月第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院感染科以及上海曙光醫(yī)院腫瘤內科確診的晚期高侵襲性肝癌患者60例，均符合納入標準：①經(jīng)影像學診斷及病理確診，符合《新編常見惡性腫瘤診治規(guī)范》[5]的相關標準，且患者腫瘤位置不適宜手術，且曾經(jīng)進行過介入手術的患者；②入選患者年齡在40～69歲之間，治療前卡氏評分≥70分，預計生存期>6個月；③均不能行手術切除及局部消融治療；④自愿參與研究，并簽署藥物同意及化療知情同意書；⑤無智力、精神功能障礙，遵醫(yī)囑按時服藥；⑥經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審核通過，符合倫理道德標準。按隨機數(shù)字表法分為對照組和研究組，分別為30例，對照組予以肝動脈介入化療聯(lián)合常規(guī)治療，其中男性20例，女性10例，年齡40～70歲，平均年齡(53.98±6.12)歲，平均病程為(1.35±0.41)年，腫瘤原因：乙型肝炎致肝癌患者22例，自身免疫性肝病或酒精性肝病致肝癌患者8例，肝內轉移類型：門靜脈轉移27例，其他轉移3例；研究組在對照組治療基礎上予以脾多肽注射液治療，其中男性19例，女性11例，年齡41～69歲，平均年齡(54.03±5.91)歲，平均病程為(1.36±0.40)年，腫瘤原因：乙型肝炎致肝癌患者23例，自身免疫性肝病或酒精性肝病致肝癌患者7例，肝內轉移類型：門靜脈轉移26例，其他轉移4例2組間性別、年齡等基線數(shù)據(jù)對比差異無統(tǒng)計學意義。

排除標準：①入選患者年齡>70歲或<40歲；②合并心、腦血管等嚴重原發(fā)性疾病或凝血障礙難以完成化療者；③對脾多肽注射液等研究藥物存在禁忌或過敏者；④近期6個月內曾接受過可能影響免疫功能的其他藥物者，或有靜脈化療禁忌癥者；⑤妊娠或哺乳期婦女、精神障礙難以配合檢查者；⑥治療依從性差、未按規(guī)定服藥者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：行常規(guī)體格檢查及生化、肝腎功能，均予以肝動脈介入化療方案治療，參照《2009原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治專家共識》[6]和《腫瘤化學預防及藥物治療》[7]，采用改良式Seldinger技術穿刺右側股動脈，將導管插入腫瘤供血動脈，盡可能選至腫瘤供血動脈后行化療栓塞，通過導管注入化療藥物，包括注射用絲裂霉素(日本 Kyowa Hakko Kirin Co.,Ltd.，注冊證號：H20090868)，注射用氟尿嘧啶(黃石李時珍藥業(yè)集團武漢喜素制藥有限公司，國藥準字H20050466)，順鉑注射液(澳大利亞 Hospira Australia Pty Ltd，注冊證號：H20090521)，用藥量根據(jù)患者肝功能及全身狀態(tài)進行調整，超選擇至腫瘤供血動脈近端透視下緩慢注入超液化碘油進行栓塞，分流量較大病灶采用明膠海綿(1/3～1/2)栓塞。對照組予以肝動脈介入化療聯(lián)合常規(guī)治療，予保肝、補液支持治療；研究組在肝動脈介入化療聯(lián)合常規(guī)治療基礎上予以脾多肽注射液(吉林豐生制藥有限公司，國藥準字H22026497)治療，10 mL+5%葡萄糖注射液500 mL靜脈滴注，1次/2天，治療1月后改為2次/周，2組共治療6個月為一療程，治療期間避免采用與本次研究無關的藥物及措施。

1.2.2 血液學指標測定：標本選取：于治療前后采集所有患者晨起空腹肘靜脈血3～5 mL，離心機3000 r/min離心10 min，取上層清液，低溫條件下統(tǒng)一保存，檢測指標如下：①免疫功能指標：主要包括T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)，上述指標均采用美國BD公司生產(chǎn)的流式細胞儀進行檢測，試劑盒為美國BD公司提供，完全參照試劑盒要求進行；②腫瘤標志物指標：包括血清甲胎蛋白(alpha fetal protein，AFP)、癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、糖類抗原CA125及CA199水平，上述指標均采用化學發(fā)光免疫分析法檢測，儀器為德國羅氏全自動電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)儀，試劑為Access專用試劑盒，完全參照試劑盒要求進行。

1.2.3 肝腫瘤組織學測定：于治療前后取肝腫瘤標本，置于10%福爾馬林中固定,常規(guī)脫水、石蠟包埋切片，檢測指標如下：①基質金屬蛋白測定：包括基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)、基質金屬蛋白酶7(MMP-7)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)及基質金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)含量，上述指標均采用免疫組織化學法定量測定，鼠抗人MMP-2、MMP-9單克隆抗體由MaximBiotech.Inc提供，鼠抗人TIMP-1單克隆抗體由武漢博士德生物技術有限公司提供；②侵襲性相關指標：包括肝癌衍生生長因子(hepatoma derived growth factor，HDGF)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)及微血管密度(microvascular vascular density，MVD)含量，采用免疫組織化學法定量測定高遷移率族蛋白(high mobility group box 1，HMGB1)及VEGF含量，兔抗人HDGF單克隆抗體由武漢三鷹生物技術有限公司提供，兔抗VEGF多克隆抗體由北京賽馳生物科技有限公司提供，采用酶標鏈親和素-生物素(labeled streptavidin-biolin technique，LSAB)測定MVD含量，試劑盒由美國Zymed公司提供。

1.2.4 安全性分析：治療過程中行常規(guī)體格檢查，包括血/尿常規(guī)、肝/腎功能等檢查，觀察2組患者的術后不良反應及并發(fā)癥。

2 結果

2.1 2組間血清免疫功能指標測定狀況 與治療前相比，對照組治療后CD3+、CD4+水平升高，研究組治療后CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平升高(P<0.05)；與對照組相比，研究組治療后CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平較高(P<0.05)。見表1。

表1 2組間治療前后血清免疫功能指標測定狀況對比Tab.1 Comparison of serum immune function between two groups(±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 2組間血清腫瘤標志物指標測定狀況 與治療前相比，2組治療后AFP、CEA、CA125及CA199水平降低(P<0.05)；與對照組相比，研究組治療后AFP、CEA、CA125及CA199水平較低(P<0.05)。見表2。

表2 2組間治療前后血清腫瘤標志物指標測定狀況對比Tab.2 Comparison of serum tumor markets between two groups(±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 2組間肝腫瘤組織基質金屬蛋白測定狀況 與治療前相比，2組治療后MMP-2、MMP-7、MMP-9及TIMP-1水平降低(P<0.05)；與對照組相比，研究組治療后MMP-2、MMP-7、MMP-9及TIMP-1水平較低(P<0.05)。見表3。

表3 2組間治療前后肝腫瘤組織基質金屬蛋白測定狀況對比Tab.3 Comparison of serum matrix metalloproteinases in tumor tissue between two groups(±s，ng/mL)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.4 2組間肝腫瘤組織侵襲性相關指標狀況 與治療前相比，2組治療后HDGF、VEGF及MVD水平降低(P<0.05)；與對照組相比，研究組治療后HDGF、VEGF及MVD水平較低(P<0.05)。見表4。

表4 2組間治療前后肝腫瘤組織侵襲性相關指標狀況對比Tab.4 Comparison of liver tumor tissue invasiveness between two groups(±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.5 安全性分析 隨訪截止到2016年9月，對照組1例失隨，具體原因不詳，研究組1例死亡，其余患者均獲得隨訪，無病例脫落現(xiàn)象，治療后均出現(xiàn)不同程度的疼痛、發(fā)熱、惡心嘔吐等反應,對癥處理后逐漸緩解，均無感染、肝腎功能損害加重等情況出現(xiàn)，2組間不良率數(shù)據(jù)對比，差異無統(tǒng)計學意義。

3 討論

肝細胞肝癌是較為常見的惡性腫瘤，死亡率居高不下，晚期原發(fā)性肝癌患者往往失去手術切除的機會，主要原因為高侵襲性及肝內和(或)肝外轉移[8]，而且現(xiàn)階段常用的TACE手段不可避免地帶來負面影響,如肝功損害、抑制機體免疫功能，對患者預后造成不良影響。近年來關于細胞分子生物學在惡性腫瘤中表達，并影響患者生存預后的研究受到關注，基質金屬蛋白及相關高侵襲性指標，例如HDGF、VEGF過度表達促進肝癌微血管生成，與肝癌侵襲轉移密切相關[9-10]。因此通過肝腫瘤細胞分子生物學特性研究判斷和預測肝癌的復發(fā)、轉移及生存預期具有重要意義。目前結合免疫治療的綜合治療方法已經(jīng)是晚期高侵襲性肝癌治療的重要研究方向[11]。血清腫瘤標志物對惡性腫瘤的診斷及療效觀察有重要價值?，F(xiàn)階段臨床常用的肝癌腫瘤標志物有血清AFP、CEA、CA125及CA199等，其中甲胎蛋白(AFP)被公認為原發(fā)性肝癌診斷的腫瘤標志物[12]。據(jù)報道原發(fā)性晚期肝癌患者血清CA125、CA199水平升高，與病情惡性發(fā)展、高侵襲性及肝功能惡變具有一定的相關性[13]。因此檢測腫瘤標志物對判斷脾多肽在晚期高侵襲性肝癌的效果有重要意義。采用脾多肽輔助治療后血清AFP、CEA、CA125及CA199水平降低程度更加明顯(P<0.05)，說明脾多肽輔助治療能夠增強人體免疫功能，解除免疫抑制，極大限度地抑制原發(fā)性晚期肝癌病情發(fā)展及高侵襲性。

肝癌患者多存在細胞免疫功能紊亂和抗腫瘤免疫功能低下,尤其是晚期高侵襲性患者更為顯著。提高晚期肝癌患者免疫功能可以抑制腫瘤惡性侵襲，對治療及預后起到推動作用[14]。T淋巴細胞是機體免疫系統(tǒng)中最重要的細胞群,通過相互作用維持機體正常的免疫應答[15]。脾多肽中含有豐富的細胞營養(yǎng)成分及細胞因子,特別是細胞中的免疫調節(jié)因子等小分子多肽，可以改善機體的免疫狀態(tài)。經(jīng)脾多肽輔助治療后CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平較高(P<0.05)，說明脾多肽輔助治療對機體免疫功能有調節(jié)作用,能夠激活免疫系統(tǒng),增強機體非特異性免疫功能。

肝癌細胞的增殖、侵襲能力較強，治療后易發(fā)生腫瘤復發(fā)和轉移，提高機體免疫力等措施可有效抑制癌細胞分化和增殖，抑制癌細胞的侵襲能力[16]。據(jù)報道腫瘤的侵襲和轉移是惡性腫瘤的重要生物學特征，基底膜(basement membrane，BM)和細胞外基質(extracellular matrix，ECM)是腫瘤生長和擴散的基礎屏障,ECM的降解是腫瘤侵襲和轉移的關鍵環(huán)節(jié)[17]。以基質金屬蛋白酶(MMPs)為代表，能夠降解ECM各種成分，是腫瘤細胞浸潤與轉移的關鍵步驟，與肝癌侵襲、轉移有關,可作為反映肝癌復發(fā)、轉移潛能的生物學指標。經(jīng)脾多肽輔助治療后肝腫瘤組織MMP-2、MMP-7、MMP-9及TIMP-1水平降低程度更為明顯(P<0.05)，患者可以耐受，說明脾多肽輔助治療對阻斷肝臟腫瘤的轉移、高侵襲性與復發(fā)具有重要意義。

有學者對肝癌、胃癌和肺癌瘤的腫瘤血管研究發(fā)現(xiàn),腫瘤組織在生長過程中存在異常的微血管形成，說明MVD與腫瘤的脈管侵襲和轉移行為具有一定相關性,可作為判定晚期肝癌轉移及預后的指標。VEGF是血管生成關鍵的刺激因子，參與腫瘤血管生成的多個環(huán)節(jié)，與肝癌微血管形成過程相關,可作為判斷肝細胞癌侵襲能力、血管生成及預后的重要標志。經(jīng)脾多肽輔助治療后HDGF、VEGF及MVD水平較低(P<0.05)，說明脾多肽輔助治療能夠降低晚期肝癌侵襲能力、抑制血管生成，避免了實體腫瘤的惡性發(fā)生、發(fā)展及轉移。

本次研究發(fā)現(xiàn)脾多肽可以提高晚期高侵襲性肝癌免疫功能，降低腫瘤標志物及侵襲性相關指標水平，安全性高。本次研究尚存在一定缺陷，關于脾多肽在晚期高侵襲性肝癌中的應用需要臨床進一步研究。

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(編校：王儼儼)

Effectoflienalpolypeptideinjectiononserumbiochemicalandtumormarkersinadvancedhighlyaggressivelivercancer

XIE Ying, WEI BoΔ
(Department of Infectious Disease, Shanghai Changzheng Hospital Affiliated to Second Military Medical University, Shanghai 200070, China)

ObjectiveTo investigate the effect of lienal polypeptide injection on serum biochemical and tumor markers in the treatment of patients with advanced highly aggressive liver cancer.Methods60 cases of advanced highly aggressive liver cancer in our hospital were selected and randomly divided into 2 groups, 30 cases respectively.The control group

transcatheter arterial chemoembolization combined with routine treatment, and the experimental group received more with lienal polypeptide injection 10 mL once every 2 days, and after changed to two times weekly after 1 month, a total of 6 months for a course of treatment.Serum tumor markers, invasive and matrix metalloproteinase related indicators were determined, and the two groups were followed up, then compared safety condition after the treatment.ResultsCompared with before treatment, the levels of CD4+and CD3+in the control group after treatment increased, levels of CD3+, CD4+and CD4+/CD8+in the experimental group increased, levels of alpha fetal protein (AFP),carcino embryonie antigen (CEA), CA125 and CA199 decreased in the two groups, levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), MMP-7, MMP-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) decreased and levels of hepatoma derived growth factor (HDGF), vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvascular vascular density (MVD) decreased (P<0.05), compared with the control group, the levels of CD3+, CD4+and CD4+/CD8+in the experimental group after treatment were higher, levels of AFP, CEA, CA125 and CA199 were lower, levels of MMP-2, MMP-7, MMP-9 and TIMP-1 were lower, and levels of HDGF, VEGF and MVD were lower (P<0.05).ConclusionLienal polypeptide injection can improve the immune function of patients with advanced highly aggressive liver cancer, and reduce the levels of tumor markers and invasive related indicators, with high safety.

lienal polypeptide injection; advanced highly aggressive liver cancer; immune function; tumor markers; invasive correlation indexes

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.012

謝瑩，女，碩士，住院醫(yī)師，研究方向：慢性肝病、肝硬化、肝癌及不明原因發(fā)熱，E-mail：xieyingmalalongxia@126.com；魏博，通信作者，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：慢性肝病、肝硬化、肝癌及不明原因發(fā)熱，E-mail：Weibo0816@163.com。

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