張國平焦作市中心血站，河南焦作　454000

無償獻血者ELISA灰區(qū)標本的追蹤檢測結(jié)果分析

張國平
焦作市中心血站，河南焦作454000

目的對無償獻血者ELISA灰區(qū)標本進行追蹤檢測，探討灰區(qū)的設(shè)置原則。方法使用ELISA對39 318名無償獻血者進行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項傳染性指標檢測；對既往獻過血的175名灰區(qū)結(jié)果獻血者進行追蹤檢測。結(jié)果39 318名無償獻血者中，酶免4項合計反應(yīng)性標本105例，占獻血者總數(shù)的0.27%；灰區(qū)標本233例，占獻血者總數(shù)的0.59%。175名灰區(qū)獻血者追蹤檢測結(jié)果仍為灰區(qū)的68例，占38.9%；結(jié)果為非反應(yīng)性的107例，占61.1%；未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標本。結(jié)論4項傳染性指標以初檢復(fù)檢兩次ELISA進行檢測的模式下，為了提高血液安全水平，應(yīng)設(shè)置灰區(qū)；核酸檢測技術(shù)（NAT）應(yīng)用于獻血者傳染性指標檢測后，可以對ELISA灰區(qū)標本進行NAT追蹤檢測，取得一定的研究數(shù)據(jù)后，進一步探討ELISA實驗的灰區(qū)設(shè)置問題。

無償獻血者；ELISA；灰區(qū)；追蹤檢測

［Abstract］Objective To track and test the ELISA grey-area specimens in blood donors without payment and study the setup principles of grey-area.Methods 39318 blood donors without payment were detected by four infectious indicators including HBsAg，anti-HCV，anti-HIV and anti-TP by ELISA，and 175 blood donors with grey-area results were tracked and detected.Results In 39318 blood donors without payment，there were 105 reactive specimens（four items in total by enzyme immunoassay），accounting for 0.27%and 233 grey-area specimens，accounting for 0.59%；tracking test results showed that in the 751 grey-area blood donors，there were still 68 grey-area donors，accounting for 38.9%and 107 non-reactive donors，accounting for 61.1%，and none was converted to reactive specimen.Conclusion In the pattern of four infectious indicators with initial examine and duplicate examine，the gray-area should be set in order to improve the blood safety level；NAT should be applied after the test of infectious indicators of blood donors，the ELISA grey-area specimen can be tracked and tested by NAT，and the grey-area setup problems of ELISA experiment should be further discussed after obtaining a certain research data.

［Key words］Blood donors without payment；ELISA；Grey-area；Tracing test

按照《獻血者健康檢查要求》［1］，血站應(yīng)對無償獻血者，進行乙肝表面抗原 （HBsAg）、丙型肝炎抗體 （抗HCV）、艾滋病病毒抗體（抗HIV）和梅毒抗體（抗TP）初檢復(fù)檢二次檢測。為進一步提高臨床用血安全水平，保證用血者身體健康，很多血站檢驗科在使用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），對上述4項傳染性指標進行結(jié)果判讀時，除了“反應(yīng)性”和“非反應(yīng)性”外，還會設(shè)置“灰區(qū)”［2-4］。為了對灰區(qū)的設(shè)置原則進行探討，該站對檢測結(jié)果為灰區(qū)的獻血者，進行了追蹤檢測，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

2015年1—12月，該市無償獻血者39 318名，年齡18～55歲。使用ELISA對所有無償獻血者血液標本進行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP四項傳染性指標檢測；對既往獻過血的175名灰區(qū)獻血者 （其獻血時間為2014 年1月—2015年6月），使用ELISA對HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP4項傳染性指標進行追蹤檢測。

表1　39 318名無償獻血者四項傳染性指標檢測結(jié)果［n（%）］

1.2試劑

HBsAg ELISA試劑盒，抗HCV ELISA試劑盒，抗HIV ELISA試劑盒，抗TP ELISA試劑盒HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP質(zhì)控品。所有試劑均由合格供方提供，進貨檢驗合格，有效期內(nèi)使用。

1.3主要儀器

STAR全自動樣本處理系統(tǒng)；FAME全自動酶免分析系統(tǒng)；UranusAE全自動酶免分析儀；SUNRISE掃描酶標儀；Columbus洗板機。

1.4方法

1.4.1ELISA檢測流程 每位無償獻血者均留取初檢、復(fù)檢2份標本，應(yīng)用ELISA法，按照HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP試劑的說明書要求，進行初檢、復(fù)檢2次檢測。

1.4.2結(jié)果判讀規(guī)則反應(yīng)性，S/C.O≥1；灰區(qū)，1＞S/C. O≥0.7；非反應(yīng)性，S/C.O＜0.7。

1.4.3灰區(qū)標本追蹤檢測流程 檢測結(jié)果為灰區(qū)的獻血者，6個月后，只采集1份標本，對灰區(qū)項目追蹤檢測，使用原檢測廠家的試劑雙孔復(fù)試。2孔檢測結(jié)果均S/C. O值＜0.7為非反應(yīng)性，解除該獻血者屏蔽狀態(tài)，可以繼續(xù)獻血；2孔檢測結(jié)果有1孔或2孔S/C.O值≥0.7，報告為“灰區(qū)”，該獻血者長期屏蔽，暫不能獻血；2孔檢測結(jié)果均S/C.O值≥1.0為反應(yīng)性，該獻血者永久屏蔽，不宜繼續(xù)獻血。

1.5質(zhì)量控制

檢驗科使用ELISA法檢測時，每板均按照試劑使用說明書要求，設(shè)置相應(yīng)的空白、陰性對照、陽性對照及室內(nèi)質(zhì)控，做好室內(nèi)質(zhì)控工作；同時每年參加國家衛(wèi)生計生委臨檢中心、河南省臨檢中心組織的室間質(zhì)量評價活動。

2　結(jié)果

2.1無償獻血者4項傳染性指標檢測結(jié)果

使用ELISA法對39 318名無償獻血者進行4項傳染性指標檢測，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應(yīng)性結(jié)果共38980名，占99.14%；反應(yīng)性結(jié)果共105名，占0.27%；灰區(qū)結(jié)果共233名，占0.59%。39 318名無償獻血者4項傳染性指標檢測結(jié)果見表1。

灰區(qū)標本數(shù)是反應(yīng)性標本數(shù)的2.22倍，表明灰區(qū)占總不合格的比例較高。

2.2灰區(qū)結(jié)果獻血者追蹤檢測結(jié)果

使用ELISA法對175名灰區(qū)結(jié)果獻血者進行追蹤檢測，HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗TP非反應(yīng)性結(jié)果共107名，占61.1%；反應(yīng)性結(jié)果共0名，占0%；灰區(qū)結(jié)果共68名，占38.9%。175名灰區(qū)結(jié)果獻血者追蹤檢測情況見表2。

表2　175名灰區(qū)結(jié)果獻血者追蹤檢測情況［n（%）］

追蹤檢測結(jié)果仍為灰區(qū)的標本數(shù)是非反應(yīng)性標本數(shù)的0.64倍，未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標本。

2.3質(zhì)控結(jié)果

室內(nèi)質(zhì)控使用Levey-Jennings質(zhì)控圖，采用13 s、22 s和10x質(zhì)控規(guī)則，對每板的質(zhì)控值進行分析，符合選定的質(zhì)控規(guī)則，則實驗結(jié)果在控，可以發(fā)布檢測結(jié)果；如果質(zhì)控值違背質(zhì)控規(guī)則，則應(yīng)分析原因，必要時重新檢測［5-6］。參加國家衛(wèi)生計生委臨檢中心和省衛(wèi)生計生委臨檢中心室間質(zhì)評結(jié)果均100%符合。

3　討論

ELISA實驗靈敏度高、特異性好、試劑穩(wěn)定、操作簡便快速、無放射性污染，可利用全自動酶免分析儀進行自動化檢測，檢測通量大，特別適用于大批量無償獻血者血液標本的傳染性指標檢測，在采供血機構(gòu)得到了廣泛應(yīng)用［7-8］。但是，多種因素包括獻血者體內(nèi)原因、標本質(zhì)量、檢測試劑、儀器設(shè)備、實驗環(huán)境、人員因素等，可影響ELISA實驗結(jié)果［9］。在ELISA實驗的結(jié)果判讀過程中，除了反應(yīng)性和非反應(yīng)性兩種實驗結(jié)果外，還有部分標本OD值非常接近陽性判定值（cut-off），即“灰區(qū)”結(jié)果［10］。

使用ELISA對隨機選取的大批量已知某項目反應(yīng)性和非反應(yīng)性標本進行檢測，以O(shè)D值為橫坐標，以標本數(shù)量為縱坐標，可得到一個分布圖。其中，非反應(yīng)性標本中OD值較高的部分，與反應(yīng)性標本中OD值較低的部分，將會出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，即是灰區(qū)結(jié)果產(chǎn)生的原因［11］。因此，合理科學地設(shè)置灰區(qū)，能使ELISA實驗最大限度地檢出陽性標本，防止弱陽性標本的漏檢，可有效地保證檢測結(jié)果的準確性，對ELISA實驗有重要的現(xiàn)實意義［12］。

該研究表1數(shù)據(jù)顯示，39 318名無償獻血者中，酶免4項合計反應(yīng)性標本105例，占獻血者總數(shù)的0.27%；而灰區(qū)標本233例，占獻血者總數(shù)的0.59%；灰區(qū)標本數(shù)是反應(yīng)性標本數(shù)的2.22倍，表明灰區(qū)占總不合格的比例較高。表2顯示，既往獻過血的175名灰區(qū)獻血者，追蹤檢測結(jié)果仍為灰區(qū)的68例，占38.9%；結(jié)果為非反應(yīng)性的107例，占61.1%；未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)為反應(yīng)性的標本，與謝云崢、張艷梅的報道基本一致［13-14］，與張秀慧等的報道有所不同［15］，這可能與所選取的研究對象不同、所使用的試劑不同等因素有關(guān)。

灰區(qū)結(jié)果具有不確定性，既可能是真陽性，也可能是真陰性。采供血機構(gòu)為了保證臨床用血安全，任何一項傳染性指標檢測結(jié)果為灰區(qū)或反應(yīng)性的血液，均不會發(fā)往臨床使用［16］。如果該灰區(qū)標本為真陽性，則把住了血液安全關(guān)，降低了輸血風險；如果該灰區(qū)標本為真陰性，其結(jié)果也就是假陽性，則浪費了血液資源，造成不必要的血液報廢。

4　結(jié)語

4項傳染性指標以初檢復(fù)檢兩次ELISA進行檢測的模式下，為了提高血液安全水平，應(yīng)設(shè)置灰區(qū)，因其真陽性的概率較大；隨著檢測技術(shù)的快速發(fā)展，近年來核酸檢測技術(shù)（NAT）逐漸應(yīng)用于獻血者傳染性指標的檢測［17-19］，可以對ELISA弱陽性及灰區(qū)標本進行NAT檢測，取得一定的研究數(shù)據(jù)后，再探討ELISA實驗的灰區(qū)設(shè)置問題，這有待于進一步深入研究。

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Analysis of Tracking Test Results of ELISA Grey-area Specimen in Blood Donors without Payment

ZHANG Guo-ping
The Blood Center of Jiaozuo City，Jiaozuo，Henan Province，454000 China

R446.6

A

1672-5654（2016）04（c）-0096-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.12.096

2016-01-22