樊孝瓊

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宮頸癌分子病理特征與其預(yù)后的相關(guān)性

樊孝瓊

目的研究恩施地區(qū)宮頸癌患者的分子病理特征及其與預(yù)后的相關(guān)性。方法選取59例宮頸癌患者作為研究對(duì)象，對(duì)患者的survivin、p27、CD44v6、MMP-2、TIMP-2的蛋白表達(dá)情況和mRNA表達(dá)量與預(yù)后情況進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果患者5年總生存率為84.7%?；颊遱urvivin、MMP-2、CD44v6表達(dá)量與預(yù)后情況之間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性(P<0.05)，TIMP-2蛋白和mRNA表達(dá)量與預(yù)后效果呈正相關(guān)(P<0.05)；p27表達(dá)量與預(yù)后效果無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論恩施地區(qū)宮頸癌患者有良好的預(yù)后效果，其主要分子病理特點(diǎn)體現(xiàn)在survivin、MMP-2、TIMP-2、CD44v6的表達(dá)。

宮頸癌；分子病理特征；預(yù)后

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.07.012

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1081～1083)

宮頸癌是婦科最為常見的1種惡性腫瘤，但臨床特征不明顯，而且其預(yù)后效果較差。近些年來(lái)宮頸癌發(fā)病呈現(xiàn)出低齡化的趨勢(shì)，并且患病人數(shù)還在逐年上升[1]。恩施地區(qū)的居民有著自己獨(dú)特的生活以及飲食習(xí)慣，調(diào)查顯示此地區(qū)居民飲食中攝入微量元素硒的量遠(yuǎn)高于其他地區(qū)[2]，并且有報(bào)道指出微量元素硒以及其化合物對(duì)惡性腫瘤的增殖、浸潤(rùn)有著一定的抑制作用[3]。目前為止，宮頸癌患者的分子病理特征與預(yù)后不良的分子病理之間的相關(guān)性尚不明確。有鑒于此，本研究選擇我院收治的59例宮頸癌患者作為研究組，對(duì)患者病理結(jié)果進(jìn)行分析研究，現(xiàn)詳細(xì)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集我院2008年7月-2010年6月收治的59例宮頸癌患者作為研究對(duì)象?；颊吣挲g40～65歲，平均年齡為(51.9±13.8)歲，其中處于宮頸癌Ⅰa期的患者19例，Ⅰb期15例，Ⅱa期15例，Ⅱb期10例；病理類型：46例為鱗癌，13例為腺癌。以上患者的診斷病歷資料以及病理診斷均分別由婦科及病理科醫(yī)師進(jìn)行整理核對(duì)，所有診斷均由宮頸癌HE病理切片診斷標(biāo)準(zhǔn)作為最終診斷依據(jù)，使用國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的分期標(biāo)準(zhǔn)作為宮頸癌臨床分期的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)臨床分期的不同采用不同的治療方法：使用廣泛子宮切除術(shù)對(duì)Ⅰa期患者進(jìn)行治療，使用子宮切除術(shù)加淋巴結(jié)清掃術(shù)對(duì)處于其他分期患者進(jìn)行治療。對(duì)所有患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，納入本次研究的患者均獲得長(zhǎng)期隨訪資料。對(duì)患者的5年生存率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，作為評(píng)價(jià)預(yù)后的指標(biāo)。

1.2研究方法

本次研究所使用的試劑盒survivin多克隆抗體、MMP-2、TIMP-2、CD44v6單克隆抗體、SP試劑盒以及DAB顯色劑均采購(gòu)自福州邁新公司，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行操作。

定位于細(xì)胞胞質(zhì)的是survivin、MMP-2、TIMP-2陽(yáng)性染色，染色定位在細(xì)胞膜上的是CD44v6陽(yáng)性染色。細(xì)胞陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：胞膜、胞質(zhì)或者細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃到棕黃色顆粒者判斷為陽(yáng)性。使用圖像分析儀對(duì)陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行采集并定量分析。

使用購(gòu)自德國(guó)的Leica-Q500IW自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行圖像分析處理，并在放大倍數(shù)為200的鏡下隨機(jī)挑選5個(gè)視野，系統(tǒng)自動(dòng)隨機(jī)測(cè)定每個(gè)視野中的3個(gè)不同部位，將陽(yáng)性細(xì)胞提取后，測(cè)定其光密度值(OD)[4]。

1.3mRNA提取檢測(cè)

使用TrizolTM(Promega公司，美國(guó))提取血液中總RNA，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，并使用DNA/RNA測(cè)定儀對(duì)總RNA濃度和純度進(jìn)行測(cè)定。取3 μl總mRNA，70 ℃處理10 min后加入4 μl 25 mmol/L MgCl2,2 μl 10×緩沖液，2 μl濃度為10 mmol/L的脫氧核糖核苷三磷酸混合液(dNTP)，1 μl的0.5 g/L寡聚脫氧胸苷酸(Oligo-dT15)，0.5 μl的RNAsin Ribonuclease,0.6 μl濃度為25 U/μl AM逆轉(zhuǎn)錄酶以及6.9 μl的ddH2O，將混合液充分混合后60 min 42 ℃，5 min 95 ℃。

survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2引物由北京奧科生物工程公司設(shè)計(jì)合成。Survivin基因引物序列上游為5'-CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC-3'；下游為5'-CTGGCTCCCAGCCTTCCA-3'。P27基因引物序列上游為5'-ACGGAATTCATGT-3'；下游為5'-ACGCTCGAGTTACGTTTGACGTCTTCTGA-3'。CD44v6基因引物序列上游為5'-TCCAGGCAACTCCTGTTGTCGAA-3';下游為5'-ACAGAGTACTTGCGCTCAGGGAG-3'。MMP-2基因引物序列上游為5'-CACCTACACCAAGAACTTCC-3';下游為5'-GTTCCCCACGAATCAACGAGA-3'。TIMP-2基因引物序列上游為5'-ATGCCATCCTGCGTCTG-3';下游為5'-AACACAGCCTTCTCCTCCTG-3'。以β-actin作為內(nèi)參照，上游引物為：5'-CAACTTCATCCACGTTCACC-3';下游為5'-GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3'。在總體積為25 μl的總反應(yīng)體積中加入2 μl cDNA，各1 μl上下游引物，12.5 μl的PCR,Master Mix，在加入8.5 μl的去離子水，放于PCR儀中，反應(yīng)條件設(shè)定為：10 min 95 ℃的預(yù)變性，30 s 95 ℃，30 s 72 ℃，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后在72 ℃下延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后采用瓊脂糖凝膠電泳，使用軟件自動(dòng)讀取灰度值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1患者5年生存率

患者5年生存率為84.7%，其中鱗癌患者的5年生存率要高于腺癌患者，Ⅰ期患者生存率也要高于Ⅱ期患者。見表1。

表1　患者5年生存率(例，%)

2.2分子指標(biāo)表達(dá)情況對(duì)比

研究組中survivin、MMP-2、CD44v6分子表達(dá)量明顯隨著分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表達(dá)量則表現(xiàn)出相反的趨勢(shì)(P<0.05)；p27表達(dá)量之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2　分子指標(biāo)表達(dá)情況對(duì)比±s)

2.3Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2 mRNA表達(dá)對(duì)比

研究組中survivin、MMP-2、CD44v6表達(dá)量明顯隨著分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表達(dá)量則表現(xiàn)出相反的趨勢(shì)(P<0.05)；P27mRNA表達(dá)量之間無(wú)明顯差異(P>0.05)，見表3。

表3　Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2mRNA表達(dá)水平

3　討論

宮頸癌預(yù)后效果較差，5年生存率相對(duì)較低，目前對(duì)其原因的研究發(fā)現(xiàn)主要是與其組織病理學(xué)有著密切的相關(guān)性[5]。 但是通過常年的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，在我院所在的恩施地區(qū)，宮頸癌患者有良好的預(yù)后效果，并且患者預(yù)后5年生存率相對(duì)較高，對(duì)此進(jìn)行研究可以對(duì)其他地域患病人群具有指導(dǎo)意義。

在給予相同的治療方案進(jìn)行治療后，患者預(yù)后效果較差主要是由于局部控制較差和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高所引起的，然而這兩個(gè)因素與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和凋亡相關(guān)分子有著密切的聯(lián)系[6]。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibition apoptosis protein,IAP)家族的同族體，其表達(dá)在惡性腫瘤中較為常見，在成人分化組織和癌旁正常組織中不表達(dá)。研究證實(shí)，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中有著極其重要的作用[7]。本次研究我們發(fā)現(xiàn)，恩施地區(qū)宮頸癌患者survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高。

CD44屬于粘附分子家族，CD44v6可能是判斷腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后因素的重要指標(biāo)[8]。在本次研究中，恩施地區(qū)宮頸癌患者CD44v6蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高，此結(jié)果提示恩施地區(qū)宮頸癌患者CD44v6蛋白具有顯著的地區(qū)特征，其有可能也是導(dǎo)致恩施地區(qū)宮頸癌患者預(yù)后良好的原因之一。

通過大量的臨床發(fā)現(xiàn)，腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移以及預(yù)后效果較差與基質(zhì)金屬蛋白酶的過度表達(dá)有著直接的關(guān)系，故此在判斷腫瘤預(yù)后效果以及生物學(xué)特征時(shí)，基質(zhì)蛋白酶便成為了一個(gè)重要的指標(biāo)[9]。其中MMPs和TIMPs之間的動(dòng)態(tài)平衡的破壞是導(dǎo)致腫瘤繼續(xù)發(fā)展的重要因素之一，因此可以通過抑制MMP-2的活性，使其不能和TIMP-2結(jié)合，進(jìn)而使得腫瘤血管的生成受到抑制，最終達(dá)到控制腫瘤浸潤(rùn)的效果[10]。

[1]徐妍婷，蔡為民，耿建祥，等.健康婦女及宮頸癌患者HPV感染基因型分布的研究〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014,35(22)：3022-3024.

[2]張欣，牟敏，彭祚全.恩施高硒區(qū)居民膳食硒攝入量監(jiān)測(cè)報(bào)告〔J〕.微量元素與健康研究，2013，30(3)：42-44.

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(編輯：甘艷)

Correlation between Molecular Pathologic Features and Prognosis of Cervical Carcinoma

FANXiaoqiong.

AffiliatedHospitalofHubeiInstituteforNationalities,Enshi,445000

ObjectiveTo study the correlation between molecular and pathological factors of cervical cancer in Enshi area.Methods59 cases of cervical cancer patients were selected as the research object,the p27,CD44v6,survivin,MMP-2,TIMP-2 protein expression and prognosis were compared.ResultsThe overall 5-year survival rate of patients was 84.7%.The expression levels of survivin,MMP-2,CD44v6 were negatively correlated with the prognosis(P<0.05).The expression of TIMP-2 in patients with mRNA was positively correlated with the prognosis(P<0.05);the expression of p27 was not correlated with the prognosis(P>0.05).ConclusionThe prognosis of cervical cancer patients in Enshi region is good,and the main molecular pathological features of cervical cancer patients are survivin,TIMP-2,MMP-2 and CD44v6.

Cervical cancer;Molecular pathological features;Prognosis

445000 湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院

R737.33

A

1001-5930(2016)07-1081-03

2015-09-07

2016-05-05)