饒李亮

(廣東省惠州市中醫(yī)醫(yī)院，廣東　惠州　516001)

?

川芎對大鼠心肌缺血再灌注NF-κB的影響作用

饒李亮

(廣東省惠州市中醫(yī)醫(yī)院，廣東惠州516001)

目的探討川芎治療心肌缺血再灌注的作用機理。方法將SD大鼠50 只，隨機分為5 組，每組各10只、以及空白組10只。共60只大鼠。即空白對照組(生理鹽水20 mL/kg)、模型組(生理鹽水20 mL/kg)、川芎高劑量(100 mg/kg)、川芎中劑量(50 mg/kg)、川芎低劑量(25 mg/kg)組。采用放免法檢測血清TNF-α含量，免疫組化法測定心肌組織中核因子κB 的表達。結果川芎對各組及治療組血清TNF-α含量與正常組比較顯著降低(P<0.01), NF-κB的活化程度正常組比較顯著降低(P<0.01)。其中以中劑量治療組效果最為顯著。結論川芎可降低血清中TNF-α含量，減少心肌組織中NF-κB活化程度，達到對心肌缺血再灌注作用。

心肌缺血；再灌注；TNF-α；NF-κB

川芎為常用的活血化瘀中藥之一， 始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。藥用部分為傘形科植物川芎(Liggusticum chuanxion Hort)的干燥根莖。其化學成分主要有四甲基毗嗦即川芍嚓、阿魏酸、川芍酚、川芍內(nèi)酷、維生素A、維生素E、葉酸、街醇等。味辛、微苦、性溫，有活血化瘀，理氣止痛作用。常用于頭痛、胸脅痛、腹痛、風濕痹痛等癥。近年來很多研究表明川芍有降壓、擴張血管、抗血栓、鎮(zhèn)靜及解痙等作用，臨床中廣泛用于心腦血管等疾病的治療。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物SD級大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量為(200±20) g，每組10只。

1.1.2藥物藥物購于惠州市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，取30 g川芎置容器中，加10倍量水浸泡20 min，加熱至沸，改用文火煎煮30 min，趁熱濾過，濾渣另加8倍量水，同法煎煮30 min，濾過，合并兩次濾液于燒杯中備用。

1.1.3儀器手術器械由南方醫(yī)科大學基礎實驗室提供；AvantiTM230型超速冷凍離心機( 美國BECKMAN 公司)；PL303 型電子天平[梅特勒托利多儀器(上海)有限公司]；BCD-216B型冰箱(合肥容事達有限公司)。

1.2實驗方法

1.2.1動物分組造模成功的雄性SD大鼠50 只，隨機分為5 組，每組各10只、以及空白組10只。共60只大鼠。即空白對照組(生理鹽水20 mL/kg)、模型組(生理鹽水20 mL/kg)、川芎高劑量(100 mg/kg)、THP組(中)：川芎中劑量(50 mg/kg)、THP組(低)：川芎低劑量(25 mg/kg)組。每天灌胃給相應藥物1次，持續(xù)2周。

1.2.2動物模型制備3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，大鼠四肢固定于手術臺上，將心電圖機置于大鼠四肢皮下(用注射器針頭替代扎于大鼠皮下)，觀察記錄術前Ⅱ?qū)?lián)心電圖。頸前正中切開皮膚、筋膜，逐層分離至氣管，在3～4氣管軟骨環(huán)之間切開氣管，插入自制氣管插管(20 mL一次性無菌注射針，前端剪粗鈍，保持管腔通暢)，連接小型動物呼吸機，呼吸頻率調(diào)至100 次/分，呼氣吸氣的比率為1:2，潮氣量1.0，靜觀5 min，待小鼠呼吸抵抗消失、呼吸平穩(wěn)后開胸。剪開左側皮膚，逐層分離后在4～5助骨間鈍性分離，撐開肋骨，打開心包，暴露心臟，沿室間溝仔細找尋左冠狀動脈前降支，在左心耳與肺動脈圓錐處結扎血管，結扎線處套一聚乙烯管，仔細觀察II導聯(lián)心電圖，可發(fā)現(xiàn)隨著缺血時間延長，心電圖上會出現(xiàn)ST段抬高，心尖處可見心肌發(fā)白、水腫明顯，心尖搏動減弱，缺血30 min后，放開結扎線，恢復血流灌注，再次監(jiān)測Ⅱ?qū)?lián)心電圖可見ST段逐漸回落，缺血心肌恢復為正常心肌色，可證明心肌缺血再灌注模型制備成功，再灌注2 h后，摘除心肌及實驗動物取血。

1.2.3給藥方法每日清晨空腹灌胃給藥1 次，連續(xù)7日。單純?nèi)毖俟嘧⒛Ｐ徒M: 生理鹽水2 mL/次，末次灌藥后1 h 行左主冠狀動脈結扎30 min，再灌注2 h。空白組: 生理鹽水2 mL/次，末次灌藥后1 h于左主冠狀動脈只穿線不結扎2 h。治療組: 藥物原液2 mL/次，末次灌藥后1 h 行左冠狀動脈結扎0.5 h，再灌注2 h。

1.2.4指標檢測

(1)血清TNF-α含量測定，采用放射免疫法測定，按試劑盒說明書嚴格操作。

(2) 各組實驗動物均于心肌梗死模型復制成功0.5 h，再灌2 h 后，取下心臟，以結扎線為參考點剪取缺血區(qū)左室前壁心肌約0.2 g，運用免疫組化法測定心肌組織中核因子κB 的表達。

1.2.5統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)用(x±s)表示，組間數(shù)據(jù)比較用兩獨立樣本t檢驗，多組比較用單因素方差分析，采用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學分析。

2　結　果

(1)實驗發(fā)現(xiàn)缺血再灌注模型組中含量顯著高于其余各組(P<0.01), 川芎各治療組TNF-α含量與正常組均有所下降，而中劑量組顯著降低(P<0.01)，可發(fā)現(xiàn)川芎均可以減少大鼠炎性因子的生成，對炎癥損傷有保護和干預作用。見表1。

表1　各組大鼠血清TNF-α的含量(x±s)

注：與模型組比較，▲P<0.01，●P>0.05；與正常對照組比較，★P>0.05。

(2)空白組僅于心肌細胞的胞漿中有少量表達；模型組于胞漿和胞核中均有明顯表達；治療組均在NF-κB在胞漿和/或胞核中的表達有不同程度的減少，而于中劑量治療表達顯著減少。見心肌細胞切片圖(圖1)。

圖1　心肌細胞切片圖

3　討　論

心肌缺血炎癥時NF-κB的激活心肌缺血能誘導NF-κB的激活，參與心肌缺血后的炎癥反應。多種炎癥遞質(zhì)基因的啟動子和增強子中包含κB位點[1]，如細胞間黏附分子-1、E-選擇素、血管細胞黏附分子-1、白細胞介素-1、IL、8、IL-6、腫瘤壞死因子-α和環(huán)氧合酶-2[2]，這些促炎因子促進缺血區(qū)白細胞浸潤，進一步誘導缺血性心肌損傷。抑制NF-κB活化是減輕心肌缺血炎癥損傷的重要途徑,NF-κB是心肌缺血炎癥反應的中心環(huán)節(jié)[3]，所以拮抗NF-κB的活化，可能起到有效的抗炎效果，從而發(fā)揮心肌保護作用。心肌缺血啟動一系列炎癥反應，加重缺血性損傷，導致神經(jīng)系統(tǒng)病變，因此干預炎癥反應是較有效的治療途徑。目前中藥在治療心肌缺血炎癥方面已有許多研究，但針對中藥作用于NF-κB信號轉導途徑的研究還較少，到底中藥是否作用于這條途徑，又是如何作用于這條途徑起到心肌保護作用的還需要更深一步的研究。

目前復方研究甚多，川藥經(jīng)大量臨床證實有較強的抗心肌缺血再灌注損傷作用，但中醫(yī)單一藥物功效不是簡單的單味藥效，中藥具多靶向及多作用。本實驗擬通過觀察川芎不同配伍對大鼠心肌缺血- 再灌注損傷因子-κB表達和TNF-α含量的影響，從而探討成方對心肌缺血- 再灌注損傷的療效以及是否優(yōu)于心肌缺血-再灌注損傷，并為以后川芎有效物質(zhì)的提取打下基礎，為新藥的發(fā)現(xiàn)提供科學依據(jù)。

[1] FENG Y, LIU Y M, LEBLANC M H, et al. Grape seed extract given three hours after injury suppresses lipid peroxidation and reduces hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rats[J]. Pediatr Res, 2007 ,61(3):295-300.

[2]TOMOBE K, FUJII H, SUN B, et al. Modulation of infection-induced inflammation and locomotive deficit and longevity in senescence-accelerated mice-prone (SAMP8) model by the oligomerized polyphenol oligonol[J]. Biomed Pharmacother, 2007 ,61(7):427-434.

[3]BAGCHI D, BAGCHI M, STOHS S J, et al. Free radicals and grape seed proanthocyanidin extract: importance in human health and disease prevention[J].Toxicology, 2000,148(2/3):187-197.

Chuanxiong on Myocardial Ischemia Reperfusion Role of NF-κB

RAO Liliang

(Huizhou City of Guangdong Province Traditional Chinese Medicine Hospital, Guangdong Huizhou 516001, China)

ObjectiveTo investigate the mechanism of chuanxiong myocardial ischemia reperfusion therapy. Methods50 SD rats were randomly divided into five groups, each group 10, and the control group 10. A total of 60 rats. Blank control group (saline 20 mL/kg), model group (saline 20 mL/kg), Chuanxiong high dose (100 mg/kg), Chuanxiong dose (50 mg/kg), Chuanxiong low dose (25 mg/kg )group. Radioimmunoassay of serum TNF-α content in myocardial tissue expression of nuclear factor-κB measured using immunohistochemistry. ResultsSignificantly lower (P<0.01) than group therapy Chuanxiong of serum TNF-α content with the normal group, NF-κB activation of the normal group was significantly lower (P<0.01). Among them, the middle dose treatment group the most significant effect. ConclusionChuanxiong can reduce serum TNF-α, the reduction of myocardial tissue NF-κB activation degree, to the role of myocardial ischemia and reperfusion.

myocardial ischemia; reperfusion; TNF-α； NF-κB

1006-446X(2016)07-0010-04

2016 - 01 - 07

饒李亮(1982—)，男，廣東河源，本科，主治醫(yī)師，研究方向：心血管科。

R 285.5

A