李姝梅 張家旭（紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南紅河 661100）

高碘酸鈉法測定齒瓣石斛多糖含量的方法學(xué)探討

李姝梅 張家旭
（紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南紅河 661100）

目的：探討齒瓣石斛中多糖含量測定的方法。方法：采用紫外-分光光度法和酸堿滴定法，取不同量的葡萄糖與定量且過量的高碘酸鈉進(jìn)行定量反應(yīng)，取出一部分反應(yīng)液稀釋2500倍后，以蒸餾水作空白對照，用紫外-可見分光光度計在波長223nm處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線；另取一定量反應(yīng)液，以溴甲酚紫作指示劑，用已標(biāo)定濃度的氫氧化鈉滴定生成的甲酸，計算出甲酸的生成量，以葡萄糖的量為橫坐標(biāo)，甲酸的量為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果：酸堿滴定法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較紫外-分光光度法好，回歸方程為Y=0.0222X+0.0547（r=0.9981）。結(jié)論：酸堿滴定法操作簡便，條件溫和，結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，重現(xiàn)性好，適用于齒瓣石斛多糖的含量測定。

齒瓣石斛 多糖 紫外分光光度法 酸堿滴定法

齒瓣石斛（Dendrobium devonianum Paxt.）為蘭科石斛屬植物，俗稱紫皮石斛，紫皮蘭，小黃草，吊蘭花等。《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品，具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳之功效［1］。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報道，石斛主要含多糖和生物堿等多種成分，其藥理作用與其成分有密切關(guān)系［2-5］。其中石斛多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗衰老、降血糖及抗腫瘤作用［6-8］。齒瓣石斛在我省保山、德宏等地有大規(guī)模種植，本文采集產(chǎn)于保山龍陵的齒瓣石斛，進(jìn)行高碘酸鈉法測定其多糖含量方法的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；電子天平（SHIMADZU AUW120D）。

1.2 試藥

葡萄糖對照品（批號：0701051；廣東·汕頭市西隴化工廠）；溴甲酚紫指示劑（批號：20060731；上海三愛思試劑有限公司）；高碘酸鈉（批號：0408011；廣東·汕頭市西隴化工廠）；甲酸（批號：0805101；上?；瘜W(xué)試劑有限公司）；甲醛（批號：20081114；重慶川東化工集團(tuán)有限公司化學(xué)試劑廠）；碘化鈉（批號：0506281；廣東·汕頭市西隴化工廠）；氫氧化鈉（批號：0708102；上海試四赫維化工有限公司）；0.1mol/L鹽酸滴定液；水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果

2.1 反應(yīng)原理

C6H12O6+5NaIO4——5CHOOH+HCOH+5NaI

NaOH+CHOOH——NaCOOH

一分子的葡萄糖與過量的高碘酸鈉反應(yīng)，生成五分子的甲酸，以溴甲酚紫作指示劑［9］，用已標(biāo)定濃度的氫氧化鈉滴定生成的甲酸，計算出甲酸的生成量，從而可根據(jù)甲酸的生成量得出葡萄糖的量。

2.2 高碘酸氧化反應(yīng)時間的確定

表1 測定吸光度數(shù)據(jù)

表2 濃度的溶液，測定吸光度結(jié)果

稱取葡萄糖樣品50㎎、高碘酸鈉0.4159g置25ml容量瓶中，加適量蒸餾水使溶解并定容。用錫紙包好避光，放置在低溫暗處反應(yīng)，不時振搖，使反應(yīng)完全。分別在0、6、12、24、36、48、60小時，以蒸餾水作空白對照，在波長223nm處測定其吸光度。測定數(shù)據(jù)如表1所示。

試驗結(jié)果表明，高碘酸氧化葡萄糖反應(yīng)在48小時反應(yīng)完全。

2.3 UV法

（1）方法。測定反應(yīng)后剩余高碘酸鈉吸光度，以反應(yīng)后剩余高碘酸鈉的濃度為橫坐標(biāo)，反應(yīng)后剩余高碘酸鈉吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）高碘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。精密稱取高碘酸鈉適量，配制成0.12mM/L、0.24mM/L、0.36 mM/L、0.48 mM/L、0.60 mM/L濃度的溶液，測定吸光度，試驗結(jié)果如表2所示。

線性方程及相關(guān)系數(shù)：Y=1.0217X-0.0016 （r=0.9990）

（3）測定。稱取葡萄糖 10㎎，20㎎，30㎎，40㎎，50㎎分別置于25ml量瓶中，每份再加入高碘酸鈉0.416g，蒸餾水溶解并定容。用錫紙包好避光，放置在低溫暗處，不時振搖，反應(yīng)48小時后，測定吸光度，試驗結(jié)果如表3所示。

以高碘酸鈉的濃度為橫坐標(biāo)，高碘酸鈉吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖1所示。

（4）其它因素考察。分別稱取甲酸、甲醛、碘化鈉適量，加蒸餾水分別制成0.014mM/L、0.0027mM/L、0.014mM/L濃度溶液，測定吸光度，結(jié)果如表4所示。

結(jié)果表明：在相關(guān)反應(yīng)的濃度條件下，甲酸、甲醛、碘化鈉的吸光度較小，對高碘酸鈉的測定影響較小。

表3 測定吸光度試驗結(jié)果

表4 濃度溶液，測定吸光度結(jié)果

（5）討論。由試驗結(jié)果得知，反應(yīng)后溶液中高碘酸鈉的量與吸光度不成線性，高碘酸鈉強(qiáng)氧化性及不穩(wěn)定性，是造成不成線性的主要原因。因此UV法僅僅提供判斷反應(yīng)是否完全的依據(jù)。

2.4 甲酸滴定法

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。稱取葡萄糖 10mg，20mg，30mg，40mg，50mg分別置于25ml量瓶中，每份再加入高碘酸鈉0.416g，蒸餾水溶解并定容。用錫紙包好避光，放置在低溫暗處放置，不時振搖，反應(yīng)48小時。加溴甲酚紫指示劑2滴，用氫氧化鈉滴定液滴定，計算出甲酸的總生成量，以葡萄糖的量為橫坐標(biāo)，甲酸的量為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。甲酸總生成量（mmol）=（氫氧化鈉的準(zhǔn)確濃度×滴定用的體積/所取反應(yīng)液的體積）×反應(yīng)體積。具體數(shù)據(jù)如表5和圖2所示。

（2）討論、以上研究表明，采用酸堿滴定法測定齒瓣石斛多糖的含量簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠。而用高碘酸鈉法測定齒瓣石斛多糖含量，雖可以用光密度監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)行的完全程度，但由于高碘酸鈉本身具有強(qiáng)氧化劑的特性，不能用于含量測定的量化物質(zhì)指標(biāo)；多糖測定過程中，糖及反應(yīng)后的生成物甲醛、甲酸、碘化鈉均不會影響光密度測定，即不會影響反應(yīng)指示的完全程度；因此，本課題針對齒瓣石斛中多糖含量應(yīng)用高碘酸鈉法測定具有可行性，可以為進(jìn)一步進(jìn)行方法學(xué)考察提供實驗依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:62-63.

［2］陳曉梅，郭順星.石斛植物的化學(xué)成分與藥理作用的研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001（1）:70.

［3］魏小勇.石斛屬植物生物堿研究進(jìn)展［J］.中國藥事，2005（7）:445-44.

［4］羅慧玲，蔡體育，陳巧倫，等.石斛多糖增強(qiáng)臍帶血和腫瘤病人外周血LAK細(xì)胞體外殺傷作用的研究［J］.癌癥，2000（12）:1124.

［5］黃民權(quán)，蔡體育，劉慶倫.鐵皮石斛多糖對小白鼠白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞移動抑制因子的影響［J］.天然藥物研究與開發(fā)，1996（3）:391.

［6］趙永靈.兜唇石斛多糖的研究［J］.云南植物研究，1994（4）:19-21.

［7］施紅，陳玉春.石斛復(fù)方制劑的抗氧化和免疫功能的相關(guān)研究［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1997（4）:131.

［8］施紅，陳玲.石斛合劑對高血糖動物模型的實驗研究［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000（2）:23.

［9］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部附錄［XVE］.北京:化學(xué)工藝出版社，2005.

項目來源：云南省科技項目（高黎貢山藥用植物資源保護(hù)和珍稀瀕危藥用植物引種馴化研究）

李姝梅（1986—），女，云南牟定人，碩士研究生，畢業(yè)于云南中醫(yī)學(xué)院，助教，主要從事中藥藥劑研究工作。

張家旭（1991—），男，云南彌勒人，紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院后勤管理中心工作人員，云南財經(jīng)大學(xué)會計專業(yè)本科在讀，E-mail：526135131@qq.com。