周民民 程 姣 朱玉芳

(江蘇省濱海中學(xué) 鹽城 224500)(蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院 215123)

血球計數(shù)板是對細(xì)胞進(jìn)行直接計數(shù)的重要工具，高中生物學(xué)教材中使用血球計數(shù)板對酵母菌等微生物進(jìn)行計數(shù)。在教學(xué)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，教師對計數(shù)板的認(rèn)識有局限。

1 “鏡”中窺“室”，只知其一

高中生物學(xué)教材中，“探究酵母菌種群大小的動態(tài)變化”實(shí)驗以及“顯微鏡直接計數(shù)土壤浸出液中分解尿素的細(xì)菌”實(shí)驗都需使用血球計數(shù)板，在蘇教版選修一教材中具體介紹了血球計數(shù)板的構(gòu)造、使用操作、計數(shù)方法等。其呈現(xiàn)順序為：血球計數(shù)板整體構(gòu)造→計數(shù)室(九個大方格)→中央大方格→其四角的中方格→每個中方格中的小方格。這種呈現(xiàn)順序引導(dǎo)師生由整體到局部逐步分析血球計數(shù)板，最終圍繞計數(shù)室進(jìn)行計數(shù)并計算，但主要涉及中央大方格的結(jié)構(gòu)和使用。而部分習(xí)題和一些高中生物學(xué)的教學(xué)論文[1]也側(cè)重于中方格的使用。由此師生對血球計數(shù)板的認(rèn)識比較局限。

2延展視域，全面認(rèn)識

酵母菌、細(xì)菌等微生物的計數(shù)確實(shí)是在中央大方格范圍內(nèi)計數(shù)，那計數(shù)板的其他區(qū)域可用于哪些細(xì)胞的顯微計數(shù)呢？

紅細(xì)胞的計數(shù)與酵母菌等微生物的計數(shù)方法相同，根據(jù)不同血球計數(shù)板的規(guī)格，在中央大方格(圖1中的A區(qū)域)內(nèi)選擇4或5個中方格為樣方來計數(shù)。但白細(xì)胞的計數(shù)則不同，應(yīng)選取四角大方格(圖1中的B、C、D、E區(qū)域)為樣方來計數(shù)(設(shè)計數(shù)的細(xì)胞總數(shù)為N)。每個大方格的體積都為0.1mm3，再利用公式計算：細(xì)胞數(shù)/mL=N/4×104×稀釋倍數(shù)，最后得到結(jié)果。

圖1 血球計數(shù)板的計數(shù)室

另外，在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，往往在細(xì)胞懸液制備后，需進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，以確定細(xì)胞接種密度和數(shù)量，并了解細(xì)胞存活率和增殖度。此時，按白細(xì)胞計數(shù)方法進(jìn)行計數(shù)，選擇四角大方格[2](B、C、D、E)作為樣方來計數(shù)細(xì)胞，或者選擇四角大方格和中央大方格[3](A、B、C、D、E)作為樣方來計數(shù)細(xì)胞。這是因為一些動物細(xì)胞體積比微生物大，如果在中央大方格內(nèi)選擇4或5個中方格計數(shù)，樣方較小，易造成較大的誤差。