楊軍+廖志勇+巨容

【摘要】 目的 探討TGF-β/smad蛋白在大鼠高氧肺損傷中的表達及意義， 探求高氧肺損傷的原因以及TGF-β/smad蛋白的表達及其作用。方法 60只10 d日齡的大鼠， 隨機分為實驗組和對照組， 實驗組大鼠讓其處于95%氧氣的高氧環(huán)境下暴露7 d， 而對照組在正常的空氣環(huán)境下暴露7 d， 觀察檢測大鼠的肺情況， TGF-β/smad蛋白， 肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白的表達和分布， 分析蛋白的表達和意義。結(jié)果 與對照組比較， 實驗組的肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白下降明顯， 呈高表達， 實驗組肺組織中LKB1與TGF-β1蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.491， P=0.033） 結(jié)論 TGF-β/smad蛋白可以作為判斷高氧的肺損傷的損害程度和判預(yù)后的一種重要指標(biāo)， 并且受到信號分子的調(diào)控， 在高氧的情況下， 可影響肺功能的正常情況， 并對肺部產(chǎn)生損傷。

【關(guān)鍵詞】 TGF-β/smad蛋白；高氧肺損傷；表達及意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.21.200

現(xiàn)階段人們經(jīng)常有肺損傷的情況，而其中的原因可能由于細胞、細胞因子和炎癥介質(zhì)構(gòu)成的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的失控， 而導(dǎo)致肺內(nèi)皮細胞肺泡的上皮間質(zhì)細胞等靶細胞受到影響而不能正常接收信號出現(xiàn)障礙， 而TGF-β/smad蛋白則在其中擔(dān)當(dāng)了很大一部分的效果， 醫(yī)療護理的工作者需要盡自己的工作的責(zé)任[1]， 發(fā)現(xiàn)TGF-β/smad蛋白在大鼠高氧肺損傷中的表達及意義并且能在后續(xù)的研究中發(fā)現(xiàn)治療方法讓患者盡快康復(fù)， 研究蛋白情況與高氧肺損傷關(guān)系， 發(fā)現(xiàn)新的思路等作出探索， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 選擇60只10 d日齡的大鼠， 隨機分為實驗組和對照組， 各30只。采集大鼠的體重、身長等數(shù)據(jù)并記錄， 制備高氧肺損傷的模型， 使用一個容量適當(dāng)?shù)乃芰先萜鳎?并且在塑料箱中防治一臺測氧儀， 時刻監(jiān)控氧氣含量濃度， 當(dāng)大鼠放入塑料瓶內(nèi)時， 由于呼吸作用會有二氧化碳產(chǎn)生， 在塑料容器內(nèi)放入石灰吸附， 并保持塑料箱的溫度與濕度適中。實驗組大鼠體重30.6～42.3 g， 身長21.3～26.3 cm， 對照組體重29.8～40.1 g， 身長20.2～24.8 cm， 兩組大鼠體重、身長等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 實驗組大鼠稱重、做好標(biāo)記， 記錄數(shù)據(jù)之后放置于高氧濃度的容器中連續(xù)7 d， 而對照組置于空氣中， 其他環(huán)境都不變， 同樣放置7 d， 之后在同一時間對每只大鼠稱重并重新測量身長， 之后處死， 剪開胸腔并觀察， 采用氯胺酮腹腔麻醉， 常規(guī)消毒鋪巾， 沿胸骨中線打開胸腔， 剔除結(jié)締組織和脂肪組織、氣管支氣管及其他非肺組織成分， 取出大鼠的肺臟肺組織， 完整地取出之后肉眼觀察， 并使用生理鹽水沖洗， 觀察之后在甲醛溶液中固定， 做病理解剖切片， 使用活性酶等物質(zhì)做標(biāo)記顯色等， 并做好陰性陽性對照， 采取不用制作的單克隆抗體， 都是相同的品種。采用專業(yè)圖像軟件對其進行分析， 并且測定相關(guān)值[3]。

1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 在同一時間， 對于制作成功的每種切片在顯微鏡下依次觀察， 在不同視野下觀察， 陽性的細胞所測得的百分數(shù)<5%則判定為為陰性， 5%～20%是弱陽性， 20%～75%是純陽性， 而>75%則判定為強陽性。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

60只大鼠接受實驗測定后， 在與對照組比較， 實驗組的肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白下降明顯， 呈高表達， 并且TGF-β/smad蛋白的含量以及變化情況在高氧肺損傷中有顯著的意義。實驗組肺組織中LKB1與TGF-β1蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.491， P=0.033）

3 討論

TGF-β/smad蛋白可以作為判斷高氧下肺損傷的損害程度和預(yù)后的一種重要指標(biāo)[4]。實驗測定之后， 發(fā)現(xiàn)兩組大鼠在各自環(huán)境中生長發(fā)育之后， 大鼠的體重和身長都有所減少說明生長滯后， 并且肉眼觀察肺組織發(fā)生損害。轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β） 通路主要由TGF-β配體、Ⅰ型Ⅱ型受體和smad蛋白介導(dǎo)。并且在TGF-β/smad蛋白關(guān)系通路之下參加上皮細胞生長過程， 而肺組織的上皮細胞與受體結(jié)合之后需要將信號傳送才能繼續(xù)進行合成轉(zhuǎn)錄等， TGF-β通路可促進細胞增殖，并且在一定時候也有抑制的作用， 有時分泌過少則導(dǎo)致細胞過度增殖、增生， LKB1可以調(diào)節(jié)VEGF的水平導(dǎo)致大鼠通路抑制受到抑制而生長停滯。實驗組肺組織中LKB1與， TGF-β1蛋白表達呈正相關(guān)， （r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關(guān)（r=0.491， P=0.033）， 提示LKB1缺失間質(zhì)中， TGF-β1分泌降低， SIK可以負向調(diào)控TGF通路， 間接指出LKB1與TGF通路的相互關(guān)系， 然而LKB1與TGF蛋白相互作用的具體機制仍不明確， 需進行進一步研究。

參考文獻

[1] KatajistoP， VaahtomeriK， EkmanN， et al. LKB1 signaling in mesenchymal cells required for suppression of gastrointestinal polyposis. NatGenet， 2008， 40（4）：455-459.

[2] 雷玲， 鐘小寧. Th17與TGFβ1的關(guān)系及在肺纖維化中的作用. 實用醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 29（4）：671-673.

[3] 徐麗娜， 劉倩， 王建海. IL-31與TGF-131在小鼠肺纖維化過程中的表達及關(guān)系.菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校學(xué)報， 2011， 23（4）：1-3.

[4] 李莉， 李燕芹.格列衛(wèi)對肺纖維化小鼠的干預(yù)機制.中國呼吸與危重監(jiān)護雜志， 2009， 8（4）：365-370.

[收稿日期：2016-03-04]