周大慶，胡俊光，徐 波山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南 250355；2山東大學附屬省立醫(yī)院

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玫瑰糠疹合劑質(zhì)量標準研究

周大慶1，胡俊光1，徐 波2△
1山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南 250355；2山東大學附屬省立醫(yī)院

目的：建立玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量標準。方法：采用薄層色譜法對玫瑰糠疹合劑中赤芍、防風進行定性鑒別；通過高效液相色譜法測定制劑中芍藥苷、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量。芍藥苷的色譜條件為ZO RBA XSB-C18色譜柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流動相以乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液（14∶86），柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測波長230 nm；升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷色譜條件為ZO RBA XSB-C18色譜柱（4.6 m m×250 m m，5 μm），流動相以乙腈-0.1%磷酸水（40∶60），柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測波長為254 nm。結(jié)果：赤芍、防風薄層鑒別斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾。芍藥苷在10～60 μg/m L范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系（r=1），平均加樣回收率為98.53%，RSD為1.18%；升麻素苷在5.98～35.88 μg/m L范圍內(nèi)，升麻素苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系（r=0.999 9），平均加樣回收率為98.3%，RSD 為1.77%；5-O-甲基維斯阿米醇苷在2.86～17.1 6 μg/m L范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系（r=1），平均加樣回收率為99.07%，RSD為1.09%。結(jié)論：本實驗方法可靠、準確，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

玫瑰糠疹合劑；質(zhì)量標準；赤芍；防風

玫瑰糠疹合劑是根據(jù)臨床驗方開發(fā)研制而成的一種中藥制劑，由赤芍、防風、荊芥、苦參、生地黃、白鮮皮、甘草等10味中藥組成，具有涼血、祛風止癢之功效［1］，治療玫瑰糠疹具有良好療效。方中赤芍清熱涼血，散瘀止痛，用于熱入營血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、目赤腫痛、肝郁脅痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、癮瘕腹痛、跌撲損傷、癰腫瘡瘍。防風祛風解表，勝濕止痛、止痙，用于感冒頭痛、風濕痹痛、風疹瘙癢、破傷風［2］。原標準質(zhì)量控制方法簡單，無定量控制方法。本研究采用TLC及H PLC法對方中主要藥味赤芍、防風進行定性及定量分析，為全面有效控制玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量提供實驗依據(jù)。

1 材料

Agi l ent 1260型高效液相色譜儀(美國Agil ent公司)；芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201337)；升麻素苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111522-201310)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111523-201208)；荊芥對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：120911-201110)；甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 赤芍的TLC鑒別［2］取本品10 m L，加乙醇20 m L，振搖超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 m L使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 m L含2 m g的溶液，作為對照品溶液。按處方比例稱取缺赤芍的其他藥材，按制備工藝制備陰性樣品，同法制備缺赤芍的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點，陰性無干擾，見圖1。

圖1 玫瑰糠疹合劑中赤芍的TLC

2.2 防風的TLC鑒別［1］取本品10 m L，加丙酮20 m L，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，加乙醇1m L使殘渣溶解，得到供試品溶液。取升麻素苷對照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，加乙醇制成每1 m L各含1 m g的混合溶液，作為對照品溶液。另取防風對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按處方比例稱取缺防風的其他藥材，按制備工藝制備陰性樣品，同法制備缺防風的陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液、供試品溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾，見圖2。

圖2 玫瑰糠疹合劑中防風的TLC

2.3 芍藥苷的H PLC法測定

2.3.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗 ZO RBAX SB-C18色譜柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流動相為乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)，柱溫30℃，流速1.0 m L/m i n，檢測波長230 nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于3000，進樣量10μL，見圖3。

圖3 玫瑰糠疹合劑中芍藥苷H PLC圖

2.3.2 溶液的制備 1)對照品溶液的制備。精密稱取芍藥苷5.00 m g甲醇溶解定容至100 m L(芍藥苷的濃度為50 μg/m L)備用；2)供試品溶液的制備。取本品1m L，置100m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用；3)陰性對照樣品溶液的制備。按處方比例精密稱取缺赤芍的其余藥材，按上述制備工藝制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照樣品溶液。

2.3.3 線性關系考察 取“2.3.2”項下芍藥苷對照品溶液分別進樣2、4、6、8、10、12 μL，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積A為縱坐標，進樣濃度C(m g/m L)為橫坐標，得到芍藥苷回歸方程為A=11.056C-2.793(r=0.9998)。結(jié)果表明，在10～60 μg/m L范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系。

2.3.4 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣5次，測定峰面積。結(jié)果顯示RSD=0.57%，表明儀器精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時進樣，測定芍藥苷的峰面積。測定結(jié)果RSD=2.32%，表明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 重復性實驗 精密稱取同一批樣品，按“2.3.2”項下供試品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液，測定峰面積，計算含量。測定結(jié)果為RSD=1.35%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.3.7 加樣回收實驗 精密量取已知含量的同批樣品0.5m L，共6份，分別加入一定量的芍藥苷標準品，按“2.3.2”項下供試品溶液的制備方法制備，按照確定的色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率實驗結(jié)果

2.4 升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測定

2.4.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗 ZO RBAX SB-C18色譜柱(4.6 m m×250 m m，5 μm)，流動相以乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)，柱溫30℃，流速1.0m L/m i n，檢測波長為254 nm，理論板數(shù)按升麻素苷峰計算應不低于2000，進樣量10μL，結(jié)果見圖4。

圖4 玫瑰糠疹合劑中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC圖

2.4.2 溶液的制備 1)對照品溶液的制備。精密稱取升麻素苷對照品2.99 m g及5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品1.43 m g，置容積為100 m L同一量瓶中，加甲醇溶解后，稀釋至刻度，搖勻，備用(升麻素苷濃度為29.9μL，5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度為14.3μL)。2)供試品溶液的制備。取本品5 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。3)陰性對照樣品溶液的制備。按處方比例精密稱取缺防風的其余藥材，按上述制備工藝制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照樣品溶液。

2.4.3 線性關系考察 取“2.4.2”項下對照品溶液分別進樣2、4、6、8、10、12 μL，記錄色譜圖，測定峰面積，并以峰面積A為縱坐標，進樣濃度C(m g/m L)為橫坐標，得升麻素苷回歸方程：A=48.017C+1(r=0.999 9)；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程：A=30.212C-0.053 3(r=0.999 7)。結(jié)果表明在 5.98～35.88 μL/m L范圍內(nèi)，升麻素苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系；在2.86～17.16μL/m L范圍內(nèi)，5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線性關系。

2.4.4 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10 μL，重復進樣5次，測定峰面積。測定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=0.52%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.42%，本法重現(xiàn)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時進樣，測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積。測定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=0.74%；5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.40%，表明供試品溶液在10小時穩(wěn)定。

2.4.6 重復性實驗 精密稱取同一批樣品，按“2.4.2”項下供試品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液，測定峰面積，計算含量。測定結(jié)果表明，升麻素苷RSD=1.53%；5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD=1.61%，本法重現(xiàn)性良好。

2.4.7 加樣回收實驗 精密量取已知含量的同批樣品10 m L，共6份，分別精密加入一定量的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷標準品，按“2.4.2”項下樣品溶液的制備方法制備，按照確定的色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表2—3。

表2 升麻素苷加樣回收率實驗結(jié)果

表3 5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收率實驗結(jié)果

2.5 樣品測定結(jié)果 取不同批號的樣品，按前述供試品溶液

制備法制備，按照確定的色譜條件測定，計算結(jié)果，見表4。

表4 樣品測定結(jié)果（n=3） m g/m L

3 討論

本研究在參考2010年版《中國藥典》(一部)及文獻的基礎上，對玫瑰糠疹合劑中的赤芍和防風進行了TLC定性鑒別研究和H PLC色譜分析。防風的TLC鑒別參照2010年版《中國藥典》(一部)及文獻方法，樣品的處理方法分別采用了丙酮處理和氯仿處理，丙酮處理后的樣品TLC結(jié)果不理想。在展開劑的選擇上采用了三氯甲烷和甲醇的不同比例，分別選用了三氯甲烷-甲醇(4∶1)、三氯甲烷-甲醇(6∶1)、三氯甲烷-甲醇(8∶1)，結(jié)果三氯甲烷-甲醇(6∶1)效果較好。

在芍藥苷的H PLC分析中，采用三種不同的流動相，結(jié)果甲醇-水(40：60)有拖尾現(xiàn)象，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(25：75)分離效果不理想，乙腈-0.2%磷酸和0.04%三乙胺溶液(14∶86)比較適宜。在升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測定中分別采用了甲醇-水(40∶60)［3］、甲醇-0.04 m ol/L乙酸鈉(30∶70)［4］、乙腈-水-醋酸(13∶88∶0.03)［5］作為流動相進行分離，效果均不理想，最終選擇乙腈-0.1%磷酸水(40∶60)作為升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷H PLC測定的流動相效果最佳。

綜上所述，本實驗方法簡單，結(jié)果穩(wěn)定，重復性好，完善了玫瑰糠疹合劑的質(zhì)量標準，可以有效控制制劑質(zhì)量。

［1］ 肖永慶，楊濱，姚三桃，等.防風質(zhì)量標準的研究［J］.中國中藥雜志，2001，26（3）：185-187.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］ 黃杰芳，李惠霞，鄧慧敏.辛夷鼻炎丸的質(zhì)量標準研究［J］.中草藥，2009，40（8）：1245-1247.

［4］ 劉煥蓉，王虹，秦雪梅，等.H PLC法測定玉屏風不同配伍中4種黃酮成分［J］.中草藥，2011，42（6）：1122-1124.

Quality Standard of Gibert′s Disease Mixture

ZHOU Daqing1，HU Jun′guang1，XU Bo2△
1 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 Shandong Provincial Hospital

Objective：To establish quality standard of gibert's disease mixture.Methods：ChiShao（Radix paeoniae rubra）and FangFeng（Radix Saposhnikoviae）in gibert's disease mixture were qualitatively identified by TLC；the contents of peoniflorin，prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in the preparations were determined by HPLC.Chromatographic conditions of peoniflorin were ZORBAX SB-C18chromatographic column （4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.2%phosphoric acid and 0.04%triethylamine solution as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 230nm；chromatographic conditions of prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol were ZORBAX SB-C18chromatographic column（4.6 mm×250 mm，5 μm），acetonitrile-0.1%phosphoric acid（40：60）as mobile phase，column temperature 30℃，flow rate 1.0mL/min，detection wavelength 254 nm.Results：ChiShao and FangFeng showed clear spots，good separation and non-interference in negative control in TLC identification.Peoniflorin showed a good linear relationship in the range between 10 and 60μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship （r=1），average recovery rate was 98.53%，RSD was 1.18%；prim-O-glucosylcimifugin showed a good linear relationship in the range between 5.98 and 35.88 μg/mL，its peak area and concentrationswereinagoodlinearrelationship（r=0.9999），averagerecoveryratewas98.3%，RSDwas1.77%；4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol showed a good linear relationship in the range between 2.86 and 17.16 μg/mL，its peak area and concentrations demonstrated better linear relationship（r=1），average recovery rate was 99.07%，RSD was 1.09%.Conclusion：The method，reliable and accurate，could be used for quality control of the preparation.

gibert's disease mixture；quality standard；ChiShao；FangFeng

R283.61

A

1004-6852（2016）01-0040-05

2015-06-29

周大慶（1988—），男，在讀碩士研究生。研究方向：中藥制劑及臨床藥學。