姜清華，劉　莉，孫　簫，李　嫄，趙　鐵

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濃百精簡合劑質(zhì)量控制方法的研究

姜清華，劉莉，孫簫，李嫄，趙鐵

中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院藥學(xué)部，沈陽 110004

[摘要]目的建立濃百精簡合劑的質(zhì)量標準控制方法。方法采用薄層色譜法對濃百精簡合劑中黃芩、五味子2味中藥進行定性鑒別；采用RP-HPLC法測定濃百精簡合劑中厚樸酚及和厚樸酚的含量，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.1%磷酸水(65∶35，v∶v)，流速為1.0 mL/min，檢測波長294 nm。結(jié)果薄層色譜法能檢測出濃百精簡合劑中的黃芩、五味子，特征明顯，專屬性強；RP-HPLC可測定厚樸酚、和厚樸酚的含量。厚樸酚在0.050 8～0.355 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 3)，和厚樸酚在0.025 15～0.176 05 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 3)。厚樸酚加樣回收率為98.28%，RSD=1.25%；和厚樸酚為98.62%，RSD=0.76%。結(jié)論通過制定該質(zhì)量標準，確保對濃百精簡合劑進行快速地定性及定量分析，實驗重復(fù)性良好，結(jié)果穩(wěn)定、可靠，能夠控制濃百精簡合劑的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞]濃百精簡合劑；質(zhì)量控制；薄層色譜法；含量

0　引言

濃百合劑為我院臨床使用多年的醫(yī)院制劑，具有宣肺平喘，化痰止咳之效，主治百日咳及其他咳喘癥，療效非常確切。由于濃百合劑藥味繁多，幾乎囊括了所有止咳、祛痰、平喘的中藥，為了用更少的藥味達到相同的效果，本研究對濃百合劑進行了精簡。在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下確立濃百合劑精簡方組成：蜜麻黃、苦杏仁、厚樸、石菖蒲、五味子、黃芩及甘草。功能主治：宣肺降逆，止咳平喘。用于感冒、上呼吸道感染、慢性支氣管炎所見之咳嗽、喘促。方解：蜜麻黃為君，宣肺降逆，止咳平喘，苦杏仁、石菖蒲、厚樸助麻黃宣肺降逆、止咳平喘之用，共為臣藥；以五味子收斂肺氣，以防君臣諸品宣降太過，取黃芩清宣肺氣，以除留戀之邪；甘草之用，功在三端，一是助君臣諸藥祛痰止咳，二可調(diào)和眾品，合取其效[1-2]。

為了驗證濃百精簡合劑在止咳、祛痰、平喘和抗炎的功效，本實驗室進行了濃百精簡合劑與濃百合劑藥效學(xué)平行研究[3]。同時，為了能更好地開發(fā)濃百合劑，本研究采用TLC和RP-HPLC法，從定性和定量建立了濃百精簡合劑的質(zhì)量標準，為開發(fā)及臨床的安全使用奠定了一定的基礎(chǔ)。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1100型液相色譜儀(安捷倫公司)，SZ-96型自動純水蒸餾器(上海亞榮電化儀器廠)，SHZ-D循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，AS10200B型超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，B-260恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)，CPA2250電子分析天平(德國Sartorius)。

1.2試劑與藥材厚樸酚(中國藥品生物制品檢定所，批號：110729-200411)，和厚樸酚(中國藥品生物制品檢定所，批號：110730-201011)，甲醇及乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2　五味子和黃芩的薄層層析

2.1五味子的鑒別取濃百精簡合劑10 mL，減壓濃縮至干，殘渣加入三氯甲烷20 mL使溶解，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為樣品溶液。取缺五味子的陰性制劑溶液，同法制成陰性樣品溶液。五味子醇甲標準品，加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作為五味子醇甲對照品溶液。吸取上述3種溶液各10 μL，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)∶甲酸乙酯∶甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與五味子醇甲對照溶液相應(yīng)的位置上顯相同顏色(紫色)的斑點，陰性液無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1　五味子的薄層鑒別

2.2黃芩的鑒別[4]取濃百精簡合劑10 mL，減壓濃縮至干，加甲醇20 mL，超聲處理30 min后過濾，濾液蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為樣品溶液。取除黃芩以外的6味藥，按同法制得黃芩陰性對照溶液。取黃芩苷標準品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為黃芩苷對照品溶液。取上述溶液各5 μL，依次點在同一硅膠G板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出晾干后，噴1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品在薄層板與黃芩苷對照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色(綠色)的斑點，陰性液無干擾，結(jié)果見圖2。

圖2　黃芩的薄層鑒別

3　厚樸酚及和厚樸酚的含量測定

3.1色譜條件色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.1%磷酸水(65∶35,v∶v)；流速為1 mL/min；檢測波長294 nm；進樣量10 μL。按厚樸酚計算理論塔板數(shù)應(yīng)不低于5 000。分別吸取供試品溶液與對照品溶液進樣測定，用外標法計算厚樸酚、和厚樸酚的含量[5-6]。

3.2對照品溶液的制備精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含厚樸酚50 μg、和厚樸酚25 μg的溶液。精密量取上述兩種濃度對照品溶液各5 mL，放入10 mL容量瓶中，即得。

3.3供試品溶液的制備及測定取10 mL濃百精簡合劑于100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻后用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續(xù)濾液，即得。取缺厚樸的陰性藥材，按濃百精簡合劑供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。結(jié)果表明陰性對照溶液無干擾。結(jié)果見圖3。

3.4線性關(guān)系考察精密吸取厚樸酚對照品溶液，制成濃度為15.255、20.34、25.425、30.51、35.595、50.85 μg/mL的溶液；同法取和厚樸酚對照品溶液，制成濃度為7.245、9.66、12.075、16.905、35.595、25.15 μg/mL的溶液。分別吸取上述溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，以進樣

圖3　濃百精簡合劑中厚樸的HLPC色譜圖

量(μg)對峰面積繪制標準曲線，計算得厚樸酚回歸方程y=1 206 x-4.785 7 (r=0.999 3)，和厚樸酚回歸方程y=1 746.9 x-3.714 3 (r=0.999 3)。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，厚樸酚在0.050 8～0.355 6 μg范圍內(nèi)，和厚樸酚在0.025 15～0.176 05 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.5精密度試驗精密吸取混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得厚樸酚RSD=0.663%(n=6)，和厚樸酚RSD=0.567%(n=6)，結(jié)果顯示儀器精密度良好。

3.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于配制好后0、2、4、8、12、24 h進樣，觀察供試品溶液穩(wěn)定性。經(jīng)計算得24 h內(nèi)厚樸酚RSD=0.61%；和厚樸酚RSD=0.96%。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，在制備后24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

3.7重復(fù)性試驗按“2.1.3”項中方法制備供試品溶液5份，分別進樣。求得厚樸酚含量0.271 4%，RSD=0.85%；和厚樸酚含量為0.096 6%，RSD=2.37%，表明本方法供試品溶液的重復(fù)性良好。

3.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的供試品溶液5份，加入厚樸酚與和厚樸酚對照品，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果厚樸酚的平均回收率為98.28%(RSD=1.25%，n=5)，和厚樸酚的平均回收率為98.62%(RSD=0.76%，n=5)。見表1。

表1　加樣回收率實驗結(jié)果(n=5)

3.9濃百精簡合劑中厚樸酚與和厚樸酚的含量取3批樣品，按“2.1.3”項下方法制成供試品溶液。取供試品溶液與對照品溶液各10 μL進樣，記錄峰面積，計算厚樸酚和和厚樸酚含量，結(jié)果見表2。

表2　含量測定實驗結(jié)果

4　結(jié)果與討論

4.1本文在考察了濃百精簡合劑藥效學(xué)及臨床觀察等研究并取得了良好的結(jié)果后，為了建立濃百精簡合劑的質(zhì)量標準，采用薄層色譜法成功鑒別了五味子、黃芩，供試品色譜中在與五味子醇甲、黃芩苷對照品色譜對應(yīng)位置上均顯同樣顏色斑點，陰性溶液無干擾。表明此方法可以用于濃百精簡合劑中五味子、黃芩的定性鑒別。

4.2厚樸是一味歷史悠久的中藥，厚樸酚與和厚樸酚是厚樸中最主要的2個活性組分。經(jīng)大量研究表明，厚樸酚能夠抑制炎癥反應(yīng)，緩解急性疼痛，并具有抗腫瘤作用及中樞鎮(zhèn)靜作用，同時能夠緩解幼年自發(fā)性高血壓[7-9]，同時還可能通過改善胰島素抵抗和保護胰島B細胞而控制血糖，延緩2型糖尿病的發(fā)展[10]；和厚樸酚也具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗痙攣、抗抑郁等多重作用[11-15]。為了完善濃百精簡合劑的質(zhì)量標準，筆者參考其他制劑或中藥材應(yīng)用的含量測定方法對其中的重要藥效成分厚樸酚與和厚樸酚進行了含量測定。筆者考察了多種溶劑系統(tǒng)，結(jié)果表明，流動相為甲醇-0.1%磷酸水(65∶35)時供試品溶液中厚樸酚及和厚樸酚與相鄰組分分離度良好，陰性溶液無干擾，和厚樸酚保留時間約為16.378 min，厚樸酚保留時間為28.519 min。在選定的色譜條件下，方法學(xué)考察均符合有關(guān)規(guī)定。

4.3此質(zhì)量標準同時對方中君藥和2味臣藥進行了定性、定量測定，控制了濃百精簡合劑的質(zhì)量，為本制劑的進一步使用推廣和研究奠定了基礎(chǔ)。為了更合理地使用濃百精簡合劑，對其進行了急、慢性毒性試驗，結(jié)果表明，其在使用劑量為臨床用量的160倍時，未見任何毒性反應(yīng)，為臨床的安全使用提供了保證。

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收稿日期：2015-08-05

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201603023

Study on the quality control of simple Nongbai mixture

JIANG Qing-hua,LIU Li,SUN Xiao,LI Yuan,ZHAO Tie

(Desect1ment of Pharmacy,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

【Abstract】ObjectiveTo improve the quality criteria of simple Nongbai mixture.MethodsTLC was used to make qualitative determination of Chinese magnoliavine fruit and scutellaria baicalensis in simple Nongbai mixture and RP-HPLC was used to determine the content of its main constituents of magnolol and honokiol.For the determination of magnolol and honokiol,the chromagraphic column was Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm); the mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid water (65∶35 v∶v); the flow rate was 1 mL/min; the peaks were monitored at 294 nm.ResultsChinese magnoliavine fruit and scutellaria baicalensis in simple Nongbai mixture could be identified by TLC.The contents of the calibration curve of magnolol showed good linerity (r=0.999 3) within the range of 0.050 8～0.355 6 μg; the calibration curve of honokiol showed good linearity (r=0.999 3) within the range of 0.025 15～0.176 05 μg.The average recovery of magnolol was 98.28% and the RSD was 1.25%.The average recovery of honokiol was 98.62% and the RSD was 0.76%.ConclusionThe present method is stable,accurate and highly repetitive,which can be used for the quality control of this preparation.

Key words：Simple Nongbai mixture; Quality control; TLC; Content