張　慧

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HPLC測定濕毒清顆粒中苦參堿的含量

張慧

遼寧省沈陽市第二中醫(yī)醫(yī)院藥劑科(沈陽 110101)

摘要：目的建立濕毒清顆粒中苦參堿的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜條件：流動相∶甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(38∶62)，用三乙胺調(diào)pH值為8.0；流速：1.0ml/min；檢測波長：210nm。結(jié)果苦參堿進(jìn)樣量在157.44～1416.96μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.9999，回收率在95.9%～100.8%之間，RSD為2.0%。結(jié)論該方法穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；濕毒清顆粒；苦參堿

濕毒清顆粒是在濕毒清膠囊[1]的基礎(chǔ)上，由地黃、當(dāng)歸、丹參、蟬蛻、苦參、白鮮皮、甘草、黃芩、土茯苓等九味中藥精制而成。方中含有苦參，其主要活性成分為生物堿類成分。生物堿成分中主要含有苦參堿，而且苦參堿的測定方法已較成熟，故對本制劑選擇苦參堿作為定量指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定。

1　儀器與試劑

儀器：日本島津LC-10ATVP型高效液相色譜儀；SPD-10AVPUV-VIS檢測器；

試劑：苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所 批號：110805-200306)；甲醇為色譜純；其它試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1檢測波長的確定取苦參堿對照品適量，對其在200～400nm進(jìn)行掃描。結(jié)果在205nm處有最大吸收，由于205nm比較靠近末端吸收，而且樣品在205nm處的響應(yīng)值過低，參照相關(guān)文獻(xiàn)[2,3]，最后確定波長為210nm。

2.2流動相的篩選參照相關(guān)文獻(xiàn)[4,5]，并進(jìn)行了改進(jìn)，確定為甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(38∶62)，用三乙胺調(diào)pH值為(8.0±0.1)為流動相，苦參堿峰與其他組分峰達(dá)到基線分離，所以流動相確定為甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(38∶62)，用三乙胺調(diào)pH值為8.0。

2.3色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(38∶62)，用三乙胺調(diào)pH值為8.0；流速：1.0ml/min；檢測波長為210nm。

2.4對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品19.68mg，置250ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含78.72μg的溶液。

2.5供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取約4.0 g，精密稱定，加氨水1ml使?jié)櫇?，再加氯?0ml，稱重，超聲提取30min(頻率80kHz，功率250W)，放冷，稱重，用氯仿補(bǔ)足減失的重量，濾過，濾液蒸干，用氯仿-甲醇(7∶3)少量溶解殘渣，上于中性氧化鋁柱上，(內(nèi)徑1cm，2 g，干法上柱)，用氯仿-甲醇(7∶3)20ml，洗脫，洗脫液蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容于50ml量瓶中，濾過，即得。

2.6苦參堿線性范圍考察精密量取對照品液2μl、6μl、10μl、14μl、18 μl，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為Y=389.65X-188.9 R=0.9999。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在157.44～1416.96μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。測定結(jié)果見表1。

表1　線性范圍考察結(jié)果

2.7精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果表明，精密度良好。見表2。

表2　精密度試驗(yàn)考察結(jié)果

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品液10μl，按0h、2h、4h、6h、8h時間間隔，分別測定樣品峰面積，結(jié)果表明，樣品在8小時內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定，符合要求。測定結(jié)果見表3。

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果

2.9重復(fù)性試驗(yàn)取本品4.0 g，精密稱定，共取5份，分別按供試品溶液制備方法操作、測定，結(jié)果表明，重復(fù)性結(jié)果符合要求。測定結(jié)果見表4。

表4　重復(fù)性試驗(yàn)考察結(jié)果

2.10回收率試驗(yàn)取本品2.0 g，精密稱定，共取5份，分別加入苦參堿對照品溶液(1.21mg/ml)1ml，按供試品溶液制備項下方法操作，測定色譜峰面積，計算，測定結(jié)果提示：本方法回收率在95.9%～100.8%之間，RSD為2.0%，本回收率實(shí)驗(yàn)符合規(guī)定。測定結(jié)果見表5。

表5　回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

3　討論

本品采用高效液相色譜法測定苦參堿的含量，方法穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)

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doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.08.019

文章編號：1003-8914(2016)-08-1094-02

收稿日期：(本文校對：王秀琴2015-08-03)

Determination of Matrine in Shiduqing Granules by HPLC

ZHANG Hui

(Department of Pharmacy, Shenyang Second Hospital of Traditional Chinese Medicine, Liaoning, Shenyang 110101, China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of matrine in Shiduqing granules. MethodUsing HPLC method, Chromatographic conditions: The mobile phase: methanol-0.02mol/L Sodium dihydrogen phosphate (38:62). Turning PH value was 8.0 with triethylamine. The flow rate was 1.0ml/min with the detection wavelength at 210nm. ResultThe injection volume of matrine was in the range of 157.44 ～ 1416.96 μg. The linear relationship was good, r=0.9999. The recovery was between 95.9～100.8%. RSD was 2.0%. ConclusionThe method was stable, and the result was accurate.

Key words：High performance liquid chromatography; Shiduqing granules; Matrine