武勝濤　張　羽　李富慧　張保朝　時新艷

(南陽市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南　南陽　473009)

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視神經(jīng)脊髓炎患者血清及腦脊液中B淋巴細(xì)胞活化因子表達及臨床意義

武勝濤張羽1李富慧張保朝時新艷

(南陽市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南南陽473009)

目的探討視神經(jīng)脊髓炎(NMO)患者血清及腦脊液中B淋巴細(xì)胞活化因子(BAFF)的表達及臨床意義。方法選擇2014年1月至2015年6月在醫(yī)院就診的NMO患者45例為NMO組，選擇同期就診的多發(fā)性硬化(MS)患者43例為MS組，同期住院治療的非炎性神經(jīng)性疾病患者45例為對照組，對比三組血清及腦脊液中的BAFF表達，NMO組與MS組擴展殘疾狀況評分量表(EDSS)評分及水通道蛋白4(AQP4-Ab)陽性率，分析NMO組和MS組BAFF表達與EDSS評分及AQP4-Ab滴度的相關(guān)性。結(jié)果NMO組與MS組的腦脊液BAFF表達均顯著高于對照組，且NMO組顯著高于MS組(均P<0.05)。NMO組的EDSS評分及AQP4-Ab陽性率均顯著高于MS組(均P<0.05)。NMO組及MS組的EDSS評分與腦脊液BAFF均呈正相關(guān)(r=0.768，0.717；均P<0.01)。NMO組的腦脊液BAFF與AQP4-Ab滴度無明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論NMO患者腦脊液BAFF的表達升高，并與EDSS評分呈正相關(guān)，而血清BAFF較MS患者無明顯變化，因此，腦脊液BAFF的表達高低對NMO及MS具有較好的診斷和鑒別價值，臨床可采用血腦屏障有關(guān)BAFF拮抗劑對NMO患者進行治療。

視神經(jīng)脊髓炎；腦脊液；B淋巴細(xì)胞活化因子

視神經(jīng)脊髓炎(NMO)屬于自身免疫性疾病，發(fā)病率在整個脫髓鞘病變中占1%～22%〔1〕。NMO患者發(fā)病時通常存在視神經(jīng)及脊髓損傷等癥狀，部分患者還會合并腦干損害。臨床研究發(fā)現(xiàn)〔2〕，部分類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者的血清B淋巴細(xì)胞活化因子(BAFF)表達存在明顯上升的現(xiàn)象，但在膽汁性肝硬化等其他器官特異性免疫疾病中，患者的血清BAFF表達又無明顯異常。多發(fā)性硬化(MS)與NMO患者發(fā)病累及范圍較為相近，研究BAFF的表達與二者的關(guān)系有利于掌握NMO發(fā)病機制〔3〕。本文擬分析NMO與MS患者血清及腦脊液中BAFF的表達及臨床意義。

1　資料與方法

1.1資料選擇2014年1月至2015年6月在醫(yī)院就診的NMO患者45例為NMO組，均滿足Wingerchuk在2006年制定的NMO診斷標(biāo)準(zhǔn)〔4〕，且患者均處于急性復(fù)發(fā)期，復(fù)發(fā)類型是復(fù)發(fā)-緩解型；其中男12例，女33例；年齡21～62〔平均(35.24±2.59)〕歲；病程2～22年，平均(12.43±3.04)年；復(fù)發(fā)次數(shù)1～6次，平均(4.02±1.14)次。選擇同期就診的MS患者43例為MS組，男10例，女33例；年齡24～65〔平均(35.19±1.98)〕歲；病程3～21年，平均(12.55±2.17)年；平均復(fù)發(fā)次數(shù)(3.89±1.23)次。所有患者均符合2010年版的McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，且患者均處于急性復(fù)發(fā)期，復(fù)發(fā)類型是復(fù)發(fā)-緩解型。再選擇同期住院治療的非炎性神經(jīng)性疾病45例為對照組，男13例，女32例；年齡25～65〔平均(34.99±2.06)〕歲；包括運動神經(jīng)元病20例，偏頭痛18例，低顱壓綜合征7例。全部受試者在6個月內(nèi)未服用可影響機體免疫功能的相關(guān)藥物，且NMO組與MS組在急性復(fù)發(fā)期7 d內(nèi)。

1.2研究方法為所有受試者抽取其晨間空腹靜脈血8 ml，分置于2管內(nèi)，再置入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管內(nèi)。將1份靜脈血置于室溫下3 000 r/min離心15 min，得到上清后放置EP管內(nèi)存放-80℃的冰箱中待測。將另1份靜脈血樣本送檢測定水通道蛋白4(AQP4)抗體(AQP4-Ab)的滴度。在受試者對腰椎穿刺的知情同意書給予簽署后，抽取腦脊液4 ml，放置在EP管內(nèi)置于-80℃的冰箱中待測。對所有標(biāo)本給予統(tǒng)一檢測。采用RT-6000酶標(biāo)分析儀(深圳雷杜公司)及人BAFF/BLyS/TNFSF13B/ELISA試劑盒(美國R&D Systems公司)檢測血清與腦脊液中BAFF的表達水平，操作方法嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒的說明書步驟實施。選擇細(xì)胞間接性免疫熒光法測定血清AQP4-Ab的滴度〔4〕，陽性標(biāo)本滴度以1∶64界值進行判定，其中陽性最大值為1∶1 000。

1.3觀察指標(biāo)對比三組血清及腦脊液BAFF表達情況，采用擴展殘疾狀況評分量表(EDSS)評價NMO組與MS組視神經(jīng)情況，分值0～6分，分值越低，表示患者的視神經(jīng)情況越好〔6〕。比較NMO組與MS組的AQP4-Ab陽性率，分析NMO組和MS組BAFF表達與EDSS評分及AQP4-Ab滴度的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS20.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗、方差分析和Pearson相關(guān)分析。

2　結(jié)　果

2.1三組血清及腦脊液中BAFF的表達三組血清BAFF表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，腦脊液BAFF表達差異顯著(P<0.05)，NMO組與MS組的腦脊液BAFF表達顯著高于對照組，且NMO組顯著高于MS組(均P<0.05)。見表1。

2.2NMO組與MS組EDSS評分及AQP4-Ab陽性率對比NMO組的EDSS評分〔(4.13±2.08)分〕及AQP4-Ab陽性率〔35例(77.78%)〕均顯著高于MS組〔(2.65±1.52)分，0例；t=3.796，χ2=55.530，均P<0.05〕。

2.3NMO組與MS組腦脊液BAFF表達與EDSS評分及AQP4-Ab滴度的相關(guān)性NMO組及MS組的EDSS評分與腦脊液BAFF均呈正相關(guān)(r=0.768，0.717；均P<0.01)。而NMO組的腦脊液BAFF與AQP4-Ab滴度無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

表1　三組血清及腦脊液中BAFF表達對比±s)

與MS組相比:1)P<0.05；與對照組相比:2)P<0.05

3　討　論

臨床研究顯示〔7〕，BAFF表達異常能夠影響形成抗體B細(xì)胞的相關(guān)存活信號通路，進而誘發(fā)疾病的產(chǎn)生。換言之，BAFF在機體中的表達高低與自身免疫性疾病具有緊密聯(lián)系。BAFF表達對MS患者的病情產(chǎn)生及進展發(fā)揮著重要作用。有報道稱〔8〕，對于未治療的MS患者，其血清BAFF與健康體檢者并無明顯差異，但接受干擾素-β等藥物的治療后，MS患者血清BAFF表達顯著上升，表明BAFF可能經(jīng)過受體通路參與到MS發(fā)病過程。BAFF在NMO患者發(fā)病過程中的相關(guān)作用并未完全闡明，明確BAFF的表達是否能作為生物標(biāo)志物對NMO與MS進行鑒別，已成為臨床需攻克的課題之一。本研究結(jié)果與Pellkofer等〔9〕的報道結(jié)果一致，提示在常規(guī)檢查時，血清BAFF無法明顯地鑒別出NMO與MS等疾病。而腦脊液BAFF在NMO患者中的表達更高，能夠較為明顯地區(qū)分NMO與MS疾病。究其原因，可能與NMO患者機體炎性反應(yīng)和抗炎性反應(yīng)的過程較MS患者更加劇烈有關(guān)。NMO是星形膠質(zhì)細(xì)胞性疾病，患者的星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的損傷較髓鞘脫失明顯更嚴(yán)重，且星形膠質(zhì)細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞，其在被激活或者損傷之后可分泌出多類細(xì)胞因子，進而誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。NMO患者腦脊液BAFF表達上升，影響了B細(xì)胞的存活和分化，進而導(dǎo)致B細(xì)胞形成的AQP4-Ab上調(diào)，最終促發(fā)NMO疾病的病理和生理過程。提示腦脊液BAFF能夠被作為一種生物標(biāo)志物，并用于推測NMO及MS患者病情嚴(yán)重程度。原因可能是患者的腦脊液BAFF通過參與疾病的發(fā)病與進展機制中，進而對EDSS等評價疾病嚴(yán)重程度的評分作出相應(yīng)的反饋與呈現(xiàn)。有報道稱〔10〕，AQP4-Ab的滴度與NMO的發(fā)病有一定聯(lián)系，但本文未發(fā)現(xiàn)二者之間的相關(guān)性，原因可能與本次研究的樣本量較少或檢測方法的差異有關(guān)，也有可能是因為本研究中AQP4-Ab的滴度上升，且NMO患者病情進展程度不一，對檢測結(jié)果產(chǎn)生了一定影響。

1邱懷雨，張卯年，魏世輝，等.視神經(jīng)脊髓炎臨床特點分析〔J〕.眼科研究，2010；28(2)：175-7.

2Quan C，Yu H，Qiao J，etal.Impaired regulatory function and enhanced intrathecal activation of B cells in neuromyelitis optica：distinct from multiple sclerosis〔J〕.Mult Scler，2013；19(3)：289-98.

3張星虎.視神經(jīng)脊髓炎的免疫治進展〔J〕.中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報，2015；30(10)：20-2.

4邱偉，常艷宇，李蕊，等.AQP4基因多態(tài)性與NMO臨床表型的相關(guān)性分析及功能研究〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2015；95(7)：501-6.

5Nakashima I，Takahashi T，Cree BA，etal.Transient increases in anti-aquaporin-4 antibody titers following rituximab treatment in neuromyelitis optica，in association with elevated serum BAFF levels〔J〕.J Clin Neurosci，2011；18(7)：997-8.

6賈紅娟，葉靜，趙筱玲，等.視神經(jīng)脊髓炎首發(fā)高危脫髓鞘事件的臨床分析〔J〕.中華內(nèi)科雜志，2015；54(4)：322-5.

7方羚，邱偉.視神經(jīng)脊髓炎動物模型及研究進展〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2015；48(10)：916-8.

8Zhang H.B-cell activating factor in the cerebrospinal fluid of neuromyelitis optica and multiple sclerosis〔J〕.Mult Scler，2011；17(5)：639-40.

9Pellkofer HL，Krumbholz M，Berthele A，etal.Long-term follow-up of patients with neuromyelitis optica after repeated therapy with rituximab〔J〕.Neurology，2011；76(15)：1310-5.

10Wang KC，Lee CL，Chen SY，etal.Glatiramer acetate could be a hypothetical therapeutic agent for neuromyelitis optica〔J〕.Med Hypotheses，2011；76(6)：820-2.

〔2015-12-24修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.089

武勝濤(1982-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腦血管病與肌萎縮側(cè)索硬化研究。

R74

A

1005-9202(2016)14-3543-02；

1南陽市中心醫(yī)院感染辦