馮世兵　王　宇　宋素貞　王洪波

(北京市和平里醫(yī)院消化內(nèi)科，北京　100013)

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癌胚抗原相關(guān)性細(xì)胞黏附分子5在胃良惡性病變中的表達(dá)

馮世兵王宇宋素貞1王洪波2

(北京市和平里醫(yī)院消化內(nèi)科，北京100013)

目的評(píng)價(jià)癌胚抗原相關(guān)性細(xì)胞黏附分子(CEACAM)5在胃良惡性病變中的表達(dá)方式。方法應(yīng)用連續(xù)切片免疫組化方法研究CEACAM5在各種良惡性病變中的表達(dá)。結(jié)果正常胃黏膜上皮中沒有CEACAM5表達(dá)；增生性息肉中，其主要在細(xì)胞膜部表達(dá)；腸上皮化生中，主要在細(xì)胞膜表達(dá)，個(gè)別病變在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)均有表達(dá)。上皮內(nèi)瘤變主要在細(xì)胞膜表達(dá)CEACAM5，但細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)混合表達(dá)增加，尤其在高級(jí)別瘤變中。高級(jí)別瘤變及腸上皮化生中CEACAM5表達(dá)差異顯著(P=0.027)，高、低級(jí)別瘤變中CEACAM5表達(dá)差異顯著(P=0.002)。組織學(xué)分級(jí)中，與中、低分化腺癌相比，分化好的腺癌主要在細(xì)胞膜表達(dá)CEACAM5，而中、低分化腺癌主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。腸型胃癌主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)CEACAM5，而彌漫型腺癌主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)；而且，腫瘤浸潤深度、分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的不同，CEACAM5表達(dá)差異顯著(P=0.012、0.002、0.015)。結(jié)論CEACAM5在胃良惡性病變中的表達(dá)部位不同。細(xì)胞膜表達(dá)是癌前病變的標(biāo)志，而細(xì)胞質(zhì)表達(dá)提示腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

癌胚抗原相關(guān)性細(xì)胞黏附分子5；胃腫瘤

癌胚抗原相關(guān)性細(xì)胞黏附分子(CEACAMs)屬于哺乳動(dòng)物免疫球蛋白超家族相關(guān)性糖蛋白，在細(xì)胞間識(shí)別過程中起關(guān)鍵作用。CEACAMs常通過同源性(CEACAM1，CEACAM5 和CEACAM6)和(或)異源性蛋白(CEACAM1-CEACAM5,CEACAM5-CEACAM6 和 CEACAM6-CEACAM8)相互作用來調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附〔1，2〕。CEACAM1是免疫球蛋白超家族成員之一，作為CEACAM5的結(jié)合伴侶，已被證實(shí)參與調(diào)節(jié)接觸依賴性腫瘤免疫反應(yīng)〔3〕。 研究提示 CEACAM1可能是一種腫瘤抑制蛋白，參與維持上皮細(xì)胞正?；蛐汀?〕。 既往研究證實(shí)，CEACAM1 在胃癌及口腔癌血管生成中起重要作用〔5〕。然而，其在胃癌及相關(guān)病變中表達(dá)模式明顯不同。

1　材料和方法

1.1資料本研究病人均來自山東大學(xué)第二院，包括152例2004～2009年普外科手術(shù)切除胃腺癌病人；94 例胃上皮內(nèi)瘤變(GIN)病人(56例低級(jí)別和 38例高級(jí)別)，均經(jīng)胃鏡檢查并活檢病理證實(shí)，部分屬2005～2008年胃鏡下黏膜下切除病例(EMR);腸上皮化生(IM)48例。30例增生性息肉病例以及20例胃黏膜正常者來自2005-2009年內(nèi)鏡檢查活檢正常病例。 臨床病理資料包括年齡、性別、腫瘤深度 extension、組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期均來自臨床記錄。所有病理診斷均由3名合格病理醫(yī)師根據(jù)WHO規(guī)定的消化系統(tǒng)病理和遺傳腫瘤學(xué)標(biāo)準(zhǔn)確立。本項(xiàng)研究獲山東大學(xué)第二醫(yī)院倫理和道德委員會(huì)審批通過。

1.2免疫組化(IHC)染色采用4 mm厚常規(guī)石蠟連續(xù)切片。 CEACAM5檢測應(yīng)用抗-CEACAM5抗體(PTG；10421-1-AP，稀釋1∶500)。切片脫蠟，將切片浸入3%過氧化氫甲醇溶液中10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，而后行抗原恢復(fù)步驟。切片浸入0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖溶液(pH6.0)，微波加熱 25 min。 0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液洗脫(PBS，pH7.4)，切片常溫下血清覆蓋，放入潮濕容器30 min。多余血清采用0.01 mol/L PBS漂洗，常溫下切片密閉潮濕容器一抗培育45 min。然后切片PBS漂洗，37℃密閉潮濕容器?；古嘤?0 min。PBS漂洗，加入鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物反應(yīng)物(StrepABComplex/HRP Duet，DAKO)。 切片室溫下培育 45 min，0.01 mol/L PBS沖洗，顯微鏡下3，3-二氨基聯(lián)苯胺溶液及四鹽酸精胺溶液覆蓋15 min。 然后浸入流水沖洗，蘇木紫復(fù)染1 min，水浴，浸入一系列濃度逐步提高的酒精及二甲苯溶液中脫色，然后蓋上玻片。設(shè)不加一抗的陰性對(duì)照，3名專業(yè)病理醫(yī)師獨(dú)立觀察CEACAM5染色情況。每一例爭議切片重新評(píng)估，達(dá)成共識(shí)。每一例免疫組化染色至少評(píng)估3 000個(gè)癌細(xì)胞。200倍放大鏡頭下觀察玻片，測定癌細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜染色情況。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.0軟件包，集中及離散趨勢測量方法，Mann-Whitney 實(shí)驗(yàn)材料分析。

2　結(jié)　果

20例正常胃黏膜上皮沒有 CEACAM5表達(dá)。30例增生性息肉，CEACAM5在增生延長的胃小凹臨近表面的膜頂部染色。 48例腸上皮化生(IM)中，有37例細(xì)胞膜部染色表達(dá) CEACAM5，11 例細(xì)胞質(zhì)及膜部混合染色。GIN 主要在細(xì)胞膜部表達(dá) CEACAM5，但混合染色開始增加。 56例低級(jí)別 GIN，有51例膜部表達(dá) CEACAM5，5例混合染色表達(dá)。 38例高級(jí)別 GIN，13例膜部表達(dá)，19例膜部及胞質(zhì)混合表達(dá)，6例胞質(zhì)表達(dá)。CEACAM5表達(dá)模式在增生性息肉、IM和GIN中差異顯著(P=0.000)。 IM與低級(jí)別GIN表達(dá)模式無顯著差別(P=0.355)，但是IM與高級(jí)別GIN有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.027)。 高、低級(jí)別GIN表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。高分化腺癌與GIN相比，CEACAM5表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0.070)，然而與低級(jí)別GIN相比卻差異顯著(P=0.006)。 胃癌 CEACAM5表達(dá)模式與腫瘤分期有關(guān)(P=0.010)，與 Laurén分型有關(guān)(P=0.001)。組織學(xué)分級(jí)中，高分化腺癌比中、低分化腺癌膜部表達(dá)更明顯，而胞質(zhì)中表達(dá)恰恰相反。與此類似，Laurén分型中，腸型胃癌膜部染色明顯，而彌漫型胃癌胞質(zhì)染色明顯。此外，CEACAM5表達(dá)模式與腫瘤進(jìn)展(P=0.012)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.015)及分期(P=0.002)有關(guān)。T2和T3～4期，更多的胞質(zhì)染色以及胞質(zhì)與膜染色提示CEACAM5是評(píng)估擴(kuò)散轉(zhuǎn)移的良好指標(biāo)。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比無轉(zhuǎn)移者胞質(zhì)CEACAM5染色更顯著，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中癌細(xì)胞可見胞質(zhì)染色。而且，Ⅲb～Ⅳ期和Ⅱ～Ⅲa期 比Ⅰa～Ⅰb期胞質(zhì)染色顯著。CEACAM5 表達(dá)在不同性別和年齡組中差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.068，P=0.075)，提示其與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，而與年齡、性別無關(guān)。見表1。

表1　CEACAM5表達(dá)與腺癌臨床、病理關(guān)系(n)

M：細(xì)胞膜；C：細(xì)胞質(zhì)

3　討　論

1965年，CEACAM5作為胃腸道癌胚抗原首次報(bào)道〔6〕,現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)其在大量癌癥中表達(dá)，包括胃腸道、呼吸道、婦科、泌尿系以及乳腺腫瘤等〔7,8〕。

本研究發(fā)現(xiàn) CEACAM5在胃腫瘤及非腫瘤病變中有不同的表達(dá)模式。正常胃上皮細(xì)胞不表達(dá) CEACAM5。CEACAM5在增生性息肉中表達(dá)模式不同于IM和GIN,提示其是良性增生性病變。IM 和低級(jí)別 GIN有相同表達(dá)模式，提示二者有相似某些癌前病變的性質(zhì)。中國人更應(yīng)警惕，因?yàn)閺V泛的幽門螺桿菌感染可導(dǎo)致IM，而且高級(jí)別 GIN 有更常見的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)染色。另外，應(yīng)當(dāng)重視高級(jí)別 GIN 啟動(dòng)了細(xì)胞質(zhì)表達(dá)CEACAM5，這一點(diǎn)類似高分化腺癌。據(jù)此推斷 GIN，尤其是高級(jí)別 GIN，獲得了更多的癌的特點(diǎn)。胃癌CEACAM5表達(dá)模式與組織學(xué)分類有關(guān)。進(jìn)展期胃癌細(xì)胞質(zhì)染色更多，而與組織學(xué)分類無關(guān)，T2和 T3期胃癌也顯示胞質(zhì)染色。此外，CEACAM5 表達(dá)與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與分期結(jié)果提示其是評(píng)估惡性進(jìn)展的良好指標(biāo)，胞質(zhì)染色提示預(yù)后不良。CEACAM5在胃腫瘤及非腫瘤病變中有不同的表達(dá)模式，膜染色是胃癌前病變的標(biāo)志物，這有助于鑒別良惡性。 GIN 表達(dá)CEACAM5主要表現(xiàn)為膜染色，但胞質(zhì)與胞膜混合染色增加，尤其是高級(jí)別GIN，胞質(zhì)染色開始發(fā)生。因此，病理上鑒別不典型嚴(yán)重IM與低級(jí)別GIN困難時(shí)，CEACAM5染色有助于正確診斷。這一點(diǎn)也有助于鑒別低級(jí)別與高級(jí)別 GIN。

1Gray-Owen SD,Blumberg RS.CEACAM1:contact-dependent control of immunity〔J〕.Immunology,2006;6:433-46.

2Stern N,Markel G,Arnon TI,etal.Carcinoembryonic antigen(CEA)inhibits NK killing via interaction with CEA-related cell adhesion molecule 1〔J〕.J Immunol,2005;174(11):6692-701.

3Fournes B,Sadekova S,Turbide C,etal.Beauchemin,the CEACAM1-L Ser503 residue is crucial for inhibition of colon cancer cell tumori-genicity〔J〕.Oncogene,2001;20:219-30.

4Wagener C,Ergun S.Angiogenic properties of the carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1〔J〕.Exp Cell Res,2000;261:19-24.

5Zhou CJ,Liu B,Zhu KX,etal.The different expression of carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1(CEACAM1)and possible roles in gastric carcinomas〔J〕.Pathol Res Pract,2009;205(7):483-9.

6Hamilton SR,Aaltonen LA,Eds.World Health Organization classification of tumours.Pathology and genetics of tumours of the digestive system〔M〕.IARC Press:Lyon,2000:30-7.

7Gold P,Goldenberg NA.The carcinoembryonic antigen(CEA):past,present,and future〔J〕.Mc Gill J Med,1997;3:46-66.

8Hammarstr?m S.The carcinoembryonic antigen(CEA)family:structures,suggested functions and expression in normal and malignant tissues〔J〕.Cancer Biol,1999;9:67-81.

〔2015-12-26修回〕

(編輯滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.048

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013-182)

王洪波(1974-)，男，醫(yī)學(xué)博士，副主任醫(yī)師，主要從事胃癌血管生成分子學(xué)機(jī)制研究。

馮世兵(1975-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤早期診斷及發(fā)病機(jī)制研究。

R573.9

A

1005-9202(2016)14-3456-03；

1山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院職業(yè)病科

2山東大學(xué)第二醫(yī)院消化內(nèi)科