武　懿　劉晶晶　李玲芝

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科，河北　保定　071000)

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右美托咪定聯(lián)合肢體遠(yuǎn)程缺血后處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

武懿劉晶晶1李玲芝

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科，河北保定071000)

目的探討右美托咪定(DEX)聯(lián)合肢體遠(yuǎn)程缺血后處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注(IRI)的保護(hù)作用。方法選取成年雄性SD大鼠60只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、DEX后處理組DEX組、遠(yuǎn)程缺血后處理組(遠(yuǎn)程缺血組)和聯(lián)合處理組(聯(lián)合組)各15只。通過(guò)采用線拴阻閉大腦中動(dòng)脈1.5 h，再灌注48 h的方法建立大鼠局灶性腦IRI模型，其中對(duì)照組大鼠給予缺血期分離左股動(dòng)脈，再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水處理；DEX組給予缺血期分離左股動(dòng)脈，再灌注前15 min腹腔注射10 ml 3 μg/kg的鹽酸DEX處理；遠(yuǎn)程缺血組給予缺血期鉗夾夾閉左股動(dòng)脈15 min后恢復(fù)血流10 min，循環(huán)3次，大腦中動(dòng)脈再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水處理；聯(lián)合組進(jìn)行DEX、遠(yuǎn)程缺血組的聯(lián)合處理。24 h后進(jìn)行大鼠腦神經(jīng)功能缺損評(píng)分(NDS)，48 h后以Image J軟件測(cè)量大鼠的腦梗死面積比例。結(jié)果DEX、遠(yuǎn)程缺血、聯(lián)合組的NDS評(píng)分及腦梗死面積比例均顯著低于對(duì)照組，且聯(lián)合組低于DEX、遠(yuǎn)程缺血組(P<0.05)；而DEX、遠(yuǎn)程缺血組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論DEX及肢體遠(yuǎn)程缺血后處理均可顯著改善大鼠的局灶性腦缺血再灌注損傷，二者聯(lián)合處理具有協(xié)同保護(hù)作用。

腦缺血再灌注損傷；右美托咪定；肢體遠(yuǎn)程缺血后處理

隨著溶栓術(shù)、心臟搭橋術(shù)等血管疏通術(shù)的廣泛應(yīng)用，缺血再灌注損傷(IRI)成為臨床醫(yī)師急需解決的重大難題。肢體遠(yuǎn)程缺血后處理法是一種腦損傷保護(hù)措施〔1〕。右美托咪定(DEX)是臨床常用的一種鎮(zhèn)靜類藥物。有研究發(fā)現(xiàn)〔2〕，其對(duì)大鼠腦IRI具有保護(hù)作用。但DEX聯(lián)合肢體遠(yuǎn)程缺血后處理法的臨床研究較少。本研究旨在通過(guò)建立大鼠中動(dòng)脈阻塞(MCAO)線栓模型觀察二者的聯(lián)合處理效果。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇60只清潔級(jí)成年雄性SD大鼠(由北京動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心 提供)，6～10周齡，體質(zhì)量240～300 g。于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，室溫(25.0±2.0)℃，自然光照。

1.2實(shí)驗(yàn)分組與大鼠模型制備根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、DEX后處理組(DEX組)、遠(yuǎn)程缺血后處理組(遠(yuǎn)程缺血組)和聯(lián)合處理組(聯(lián)合組)各15只。參照改良的Longa等〔3〕的線栓法建立大鼠大腦MCAO線栓模型：禁食12 h后，采用10%水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定，逐層解剖分離頸部腺體、肌肉組織，暴露右側(cè)頸動(dòng)脈，結(jié)扎翼鄂動(dòng)脈，由頸總動(dòng)脈分叉處推送合適型號(hào)的尼龍栓線至有抵觸感(深度約18 mm)。缺血1.5 h后拔出線栓進(jìn)行中動(dòng)脈血流再灌注。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持大鼠體溫(37.0～37.5)℃。

1.3處理方法對(duì)照組：模型制備時(shí)缺血1.5 h期間分離左股動(dòng)脈，血流再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水，再灌注48 h。DEX組：模型制備時(shí)缺血1.5 h期間分離左股動(dòng)脈，血流恢復(fù)前15 min腹腔注射10 ml劑量為3 μg/kg的鹽酸DEX(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司)，恢復(fù)血流再灌注48 h。遠(yuǎn)程缺血組：模型制備時(shí)缺血1.5 h期間分離左股動(dòng)脈，使用鉗夾夾閉15 min后放開(kāi)10 min，循環(huán)3次，大腦中動(dòng)脈恢復(fù)再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水，再灌注48 h。聯(lián)合組：采用DEX組和遠(yuǎn)程缺血組的聯(lián)合處理方法。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1神經(jīng)功能缺損評(píng)分(NDS)大鼠蘇醒后置于鼠籠內(nèi)，自由進(jìn)水飲食。腦缺血再灌注24 h進(jìn)行NDS評(píng)分，根據(jù)大鼠的活動(dòng)情況及意識(shí)表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)估，評(píng)分越高表示大鼠的神經(jīng)功能缺損狀況越嚴(yán)重。以無(wú)功能障礙計(jì)為0分，無(wú)法伸展左前肢為1分，向左側(cè)旋轉(zhuǎn)為2分，向左側(cè)傾倒為3分，無(wú)自主活動(dòng)伴意識(shí)喪失為4分，死亡為5分；

1.4.2腦梗死面積比例再灌注48 h后麻醉大鼠，斷頭處死，迅速取出大鼠腦組織置于-20℃冰箱中冰凍20 min。于冠狀面均勻制成5～6片厚度為2 mm的切片，分別經(jīng)2%氯化三苯四唑(TTC)染色20 min、甲醛緩沖液固定10 min。染色后粉紅色組織為正常腦組織，白色區(qū)域?yàn)槟X梗死區(qū)。24 h后以Image J軟件計(jì)算所有切片的腦梗死面積比例之和。腦梗死面積比例=梗死區(qū)面積/總面積×100%，用于反映腦梗死的嚴(yán)重程度。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS14.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、SNK-q檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

再灌注24 h后，四組大鼠NDS有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=19.201，P=0.000)，兩兩比較，DEX、遠(yuǎn)程缺血、聯(lián)合組的NDS均顯著優(yōu)于對(duì)照組，且聯(lián)合組優(yōu)于DEX、遠(yuǎn)程缺血組(P<0.05)。而DEX、遠(yuǎn)程缺血組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。再灌注48 h后，四組大鼠腦梗死面積比例總體有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=24.358，P=0.000)，兩兩比較，DEX、遠(yuǎn)程缺血、聯(lián)合組均顯著低于聯(lián)合組，且聯(lián)合組比例低于DEX、遠(yuǎn)程缺血組(P<0.05)。而DEX、遠(yuǎn)程缺血組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　四組大鼠NDS、腦梗死面積比例比較

與對(duì)照組比較:1)P<0.05；與聯(lián)合組比較:2)P<0.05

3　討　論

IRI病因與發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，涉及血流動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞分子、能量代謝障礙等諸多因素，且各因素互為因果、相互關(guān)聯(lián)，通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡或壞死。IRI是造成患者致殘及死亡的重要原因，由于大腦中動(dòng)脈是腦梗死患者的最常見(jiàn)發(fā)病部位。研究發(fā)現(xiàn)〔4〕，DEX及肢體遠(yuǎn)程缺血后處理可增加組織器官對(duì)IRI的耐受性，減輕IRI。

DEX是一種新型的腎上腺受體激動(dòng)劑，具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮、穩(wěn)定血流動(dòng)力學(xué)等作用，廣泛應(yīng)用于手術(shù)麻醉等過(guò)程中，其對(duì)機(jī)體多臟器亦具有保護(hù)作用。本研究提示DEX對(duì)腦IRI具有保護(hù)作用，與以往研究結(jié)果相符〔5〕。關(guān)于其作用機(jī)制，有研究認(rèn)為可能與其抑制細(xì)胞凋亡和交感神經(jīng)的興奮、減少腦內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和炎癥因子等作用有關(guān)，也有研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)海馬區(qū)神經(jīng)元具有保護(hù)作用〔6〕。

遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)(RPC)是指通過(guò)對(duì)遠(yuǎn)隔器官采用短暫的非致死性的缺血再灌注處理措施，可減輕缺血器官的IRI。于2005年由Kerendi等〔7〕首次提出，其發(fā)現(xiàn)采用阻斷腎動(dòng)脈5 min、再灌注1 min處理對(duì)大鼠缺血心肌具有保護(hù)作用，心肌梗死面積較對(duì)照組減少50%。目前該處理方法的保護(hù)作用已在缺血的腦〔8〕、腎臟〔9〕等器官中得到證實(shí)。四肢由于對(duì)缺血較耐受，因此肢體遠(yuǎn)程缺血后處理成為對(duì)缺血器官進(jìn)行保護(hù)的重要措施。本研究結(jié)果說(shuō)明肢體遠(yuǎn)程缺血后處理對(duì)腦IRI具有保護(hù)作用，與既往研究結(jié)果相符〔10〕。對(duì)其作用機(jī)制目前尚未完全闡明，而研究認(rèn)為其主要與抑制IRI過(guò)程中臟器的炎性反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)有關(guān)〔11〕。同時(shí)也有研究認(rèn)為其與傳入神經(jīng)通路和氧化-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路有關(guān)〔12〕。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DEX與肢體遠(yuǎn)程缺血后處理的聯(lián)合處理效果顯著優(yōu)于二者的單獨(dú)處理效果，說(shuō)明二者對(duì)大鼠局灶性腦IRI具有協(xié)同作用，與李剛等〔13〕的研究結(jié)果一致。這可能與二者共同作用于多個(gè)靶點(diǎn)或啟動(dòng)多種保護(hù)機(jī)制有關(guān)。但這僅為小樣本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，臨床應(yīng)用還有待大樣本實(shí)驗(yàn)及臨床研究的進(jìn)一步探索。

1常莉莎.遠(yuǎn)隔肢體缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠腦缺血TLR4介導(dǎo)的保護(hù)作用機(jī)制的研究〔D〕.天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2014.

2史曼，黃青青.右美托咪定的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011；27(7)：1022-4.

3Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕.Stroke，1989；20(1)：84-91.

4張曉峰.蛋白激酶C在電針預(yù)處理和遠(yuǎn)程缺血后處理誘導(dǎo)腦保護(hù)中的作用〔D〕.西安：第四軍醫(yī)大學(xué)，2010.

5林生.右美托咪定對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制〔D〕.濟(jì)南：山東大學(xué)，2013.

6Slosberg PS.The neuroprotective effect of dexmedetomidine in the hippocampus of rabbits after subarachnoid hemorrhage〔J〕.Surg Neruol，2009；72(6)：648.

7Kerendi F，Kin H，Halkos ME，etal.Remote postconditioning.Brief renal ischemia and reperfusion applied before coronary artery reperfusion reduces myocardial infarct size via endogenous activation of adenosine receptors〔J〕.Basic Res Cardiol，2005；100(5)：404-12.

8Wang Q，Zhang X，Ding Q，etal.Limb remote postconditioning alleviates cerebral reperfusion injury through reactive oxygen species-mediated inhibition of delta protein kinase C in rats〔J〕.Anesth Analg，2011；113(5)：1180-7.

9冷玉芳，姚愛(ài)軍.肢體缺血后處理和腎臟缺血后處理對(duì)大鼠腎臟缺血-再灌注損傷的影響〔J〕.臨床麻醉學(xué)雜志，2009；25(11)：974-7.

10劉強(qiáng).遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠局灶腦缺血-再灌注炎性損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究〔D〕.濟(jì)南：山東大學(xué)，2014.

11Shimizu M，Sexena P，Konstantinov IE，etal.Remote ischemic preconditioning decreases adhesion and selectively modifies functional responses of human neutrophils〔J〕.J Surg Res，2010；158(1)：155-61.

12Anrather J，Hallenbeck JM.Biological networks in ischemic tolerance-rethinking the approach to clininal conditioning 〔J〕.Transl Stroke Res，2013；4(1)：114-29.

13李剛，王袁，趙嬌妹，等.右美托咪定聯(lián)合遠(yuǎn)程缺血后處理增強(qiáng)腦保護(hù)效應(yīng)的研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2014；43(36)：4849-51.

〔2016-02-15修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.027

劉晶晶(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床麻醉及藥理學(xué)研究。

武懿(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床麻醉及藥理學(xué)研究。

R743

A

1005-9202(2016)14-3413-02；

1武警北京市總隊(duì)第二醫(yī)院麻醉科