魏艷霞

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南　南陽(yáng)　473003)

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慢性應(yīng)激和組蛋白去乙酰化酶抑制劑丁酸鈉對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響及其作用機(jī)制

魏艷霞

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南南陽(yáng)473003)

目的觀察慢性應(yīng)激和組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響及其作用機(jī)制。方法將58只雄性SD大鼠隨機(jī)地分為對(duì)照+生理鹽水組、對(duì)照+丁酸鈉組、慢性應(yīng)激+生理鹽水組及慢性應(yīng)激+丁酸鈉組。慢性應(yīng)激組給予連續(xù)21 d制動(dòng)應(yīng)激，應(yīng)激結(jié)束后將每組大鼠隨機(jī)選出8只采用Y迷宮及Morris水迷宮檢測(cè)空間學(xué)習(xí)、記憶能力，余下大鼠采用 蛋白質(zhì)免疫印跡(WB)檢測(cè)海馬組蛋白H3、H4乙?；头磻?yīng)元件結(jié)合蛋白(p-CREB)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)的表達(dá)變化。結(jié)果慢性制動(dòng)應(yīng)激的大鼠較未應(yīng)激大鼠體重增長(zhǎng)緩慢(P<0.01)。在Y迷宮測(cè)試中，各組大鼠進(jìn)入各個(gè)臂次數(shù)百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)(P>0.05)；各組大鼠在三個(gè)臂的停留時(shí)間百分比的分析，組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而組內(nèi)分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)照+生理鹽水組、對(duì)照+丁酸鈉組和慢性應(yīng)激+丁酸鈉組在新異臂的停留時(shí)間遠(yuǎn)多于其他兩臂(P<0.05)；此外，單因素方差分析顯示慢性應(yīng)激+生理鹽水組在各個(gè)臂的總穿越次數(shù)較對(duì)照+生理鹽水組多明顯減少(P<0.05)。水迷宮定位導(dǎo)航試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)顯示，各組大鼠平均潛伏期組內(nèi)、組間均差異顯著；定位導(dǎo)航試驗(yàn)第2天，對(duì)照+丁酸鈉組平均潛伏期較對(duì)照+生理鹽水組有明顯增高(P<0.05)；而慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠在訓(xùn)練第3天的平均潛伏期顯著高于對(duì)照+生理鹽水組，同時(shí)慢性應(yīng)激+丁酸鈉組找尋找平臺(tái)的時(shí)間也明顯低于慢性應(yīng)激+生理鹽水組(P<0.05)。水迷宮空間探索試驗(yàn)中，大鼠在目標(biāo)象限游泳時(shí)間、距離百分比及穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)均無(wú)顯著差異(P>0.05)；而對(duì)大鼠在目標(biāo)象限及目標(biāo)相反象限的游泳時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，組內(nèi)有顯著差異(P<0.01)，而組間差異不明顯(P>0.05)；慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠在兩個(gè)區(qū)域的游泳時(shí)間無(wú)明顯差異，而其余三組大鼠在目標(biāo)象限的游泳時(shí)間均顯著高于其在目標(biāo)相反象限的時(shí)間(P<0.01)。WB結(jié)果提示慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠acH3蛋白含量的低于對(duì)照+生理鹽水組(P<0.05)，而acH4蛋白含量雖有降低趨勢(shì)，卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；慢性應(yīng)激+丁酸鈉組與慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠相比較，acH3、acH4蛋白水平均明顯增加(P<0.01)。慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠海馬p-CREB水平明顯低于對(duì)照+生理鹽水組(P<0.01)，其BDNF含量也同樣低于對(duì)照+生理鹽水組(P<0.05)；慢性應(yīng)激+丁酸鈉組與慢性應(yīng)激+生理鹽水組大鼠相比p-CREB、BDNF含量均有明顯增加(P<0.01、P<0.05)；對(duì)照+丁酸鈉組組大鼠相對(duì)于對(duì)照+生理鹽水組BDNF含量有所減少(P<0.05)，而p-CREB含量則無(wú)明顯變化。結(jié)論慢性應(yīng)激可減緩大鼠體重增長(zhǎng)，損害其空間學(xué)習(xí)和記憶水平，而丁酸鈉可以對(duì)應(yīng)激大鼠的學(xué)習(xí)記憶起保護(hù)作用，其可能是通過(guò)影響海馬組蛋白乙酰化及認(rèn)知相關(guān)蛋白表達(dá)而實(shí)現(xiàn)。

慢性應(yīng)激；丁酸鈉；空間學(xué)習(xí)記憶

多種神經(jīng)遞質(zhì)及認(rèn)知相關(guān)蛋白表達(dá)的改變參與了慢性應(yīng)激所致認(rèn)知損害進(jìn)程〔1～3〕。丁酸鈉作用于離體的大鼠腦片時(shí)可顯著增加慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠海馬區(qū)域的組蛋白乙?；?，尤其是H4 的乙?；捷^給予丁酸鈉的正常大鼠的腦片有顯著增加〔4〕。慢性應(yīng)激可能通過(guò)增強(qiáng)HDAC 的作用，引起大鼠海馬組蛋白乙?；较陆?，減低認(rèn)知相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)和功能受損，出現(xiàn)認(rèn)知功能損害〔5〕，因此，上調(diào)大鼠海馬組蛋白乙酰化水平對(duì)慢性應(yīng)激大鼠認(rèn)知功能損害的作用值得期待。本研究擬觀察其對(duì)大鼠海馬組蛋白乙酰化水平及認(rèn)知相關(guān)分子表達(dá)的變化。

1　材料和方法

1.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：本實(shí)驗(yàn)選用雄性SPF 級(jí)Spraque-Dawley 大鼠56 只，體重(200±20)g，由四川大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(JII19)。大鼠飼養(yǎng)于SPF環(huán)境，每籠4 只，室溫(22±2)℃，濕度50%～55%，晝夜節(jié)律12 h/12 h。大鼠可自由飲食飲水，在適應(yīng)環(huán)境1 w后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，每周稱重一次。

主要儀器和試劑：2K15高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司；752-P紫外分光光度計(jì)，上?，F(xiàn)科儀器有限公司；PL-203電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司；DYY-6C電泳儀，北京六一儀器廠；DYCZ-24D垂直電泳槽，北京六一儀器廠；DYCZ-40D電轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，北京六一儀器廠；WD-9405A脫色搖床，北京六一儀器廠；79-1磁力攪拌器，常州澳華儀器有限公司；BCD-186 冰箱，西門(mén)子；ECL Plus顯色試劑盒，安瑪西亞公司；PVDF 膜，Millipore 公司；聚丙烯酰胺，Sigma 公司；SDS，Sigma公司；Tris-base，Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)，Roche公司；蛋白marker(10～170 kD)，F(xiàn)ermentas 公司；β-actin，Santa 公司；Anti-acetyl Histone H4(Lys5/8/12/16)，Millipore 公司；Anti-acetyl Histone H3(Lys14)，Millipore 公司；Anti-phospho-CREB，Millipore 公司；Anti-BDNF，Millipore 公司；其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組隨機(jī)分為對(duì)照生理鹽水組、對(duì)照丁酸鈉組、應(yīng)激生理鹽水組及應(yīng)激丁酸鈉組，每組各14只，各組平均體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2.2給藥方案慢性應(yīng)激組大鼠均給予21 d連續(xù)制動(dòng)應(yīng)激，對(duì)照組均飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境，大鼠統(tǒng)一在實(shí)施應(yīng)激前半小時(shí)給8.4 ml/100 g 生理鹽水或丁酸鈉溶液腹腔注射。腹腔注射前用碘酒消毒注射區(qū)域皮膚，每天更換注射器。本實(shí)驗(yàn)生理鹽水均采用醫(yī)療注射用生理鹽水，丁酸鈉購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，避光保存，每日注射前新鮮配制，用生理鹽水配制成濃度為10%的溶液，搖勻后使用。

1.2.3慢性制動(dòng)應(yīng)激模型慢性應(yīng)激裝置參照文獻(xiàn)〔6〕自制。由薄鐵皮制成無(wú)蓋盒子，上有可自由開(kāi)合的金屬網(wǎng)蓋，盒內(nèi)平均分隔為四個(gè)長(zhǎng)方形格子(20 cm×7.5 cm×8 cm)，每格可放一只大鼠。放入大鼠后可根據(jù)動(dòng)物的大小加入合適的長(zhǎng)條形木板，以更好的限制大鼠的活動(dòng)。應(yīng)激組大鼠在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中采用該裝置給予連續(xù)21 d每天6 h(10：30～16：30)的慢性制動(dòng)應(yīng)激。應(yīng)激結(jié)束后徹底沖洗應(yīng)激裝置，晾干備用。

1.2.4Y迷宮測(cè)試關(guān)閉新異臂入口處的活動(dòng)門(mén)，將動(dòng)物由起始臂起始端放入迷宮，任其自由探索起始臂及臂15 min；結(jié)束4 h之后，打開(kāi)活動(dòng)門(mén)，將動(dòng)物由起始臂放入迷宮，任其自由探索三個(gè)臂5 min。實(shí)驗(yàn)在同樣的光線下進(jìn)行，避免晝夜節(jié)律對(duì)動(dòng)物活動(dòng)度的影響。在每次實(shí)驗(yàn)后采用酒精擦洗實(shí)驗(yàn)裝置以避免氣味對(duì)動(dòng)物的影響。動(dòng)物放入迷宮后，測(cè)試者迅速離開(kāi)，避免人為干擾。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程由迷宮正上方的攝像頭記錄，由專業(yè)軟件分析。

1.2.5Morris水迷宮測(cè)試每天將大鼠由4 個(gè)入水點(diǎn)分別放入水中一次，入水點(diǎn)的先后順序隨機(jī)產(chǎn)生。記錄找到平臺(tái)的時(shí)間，即逃避潛伏期作為大鼠學(xué)習(xí)水平的依據(jù)。大鼠每次尋找平臺(tái)的時(shí)間設(shè)定為60 s，時(shí)間結(jié)束后用木棍引導(dǎo)尚未找到平臺(tái)的大鼠到達(dá)平臺(tái)，未找到平臺(tái)的大鼠的潛伏期記錄為60 s。所有大鼠上平臺(tái)后停留20 s，使其通過(guò)觀察周圍環(huán)境記住平臺(tái)的位置，學(xué)習(xí)結(jié)束后放回籠中。本實(shí)驗(yàn)中定位導(dǎo)航試驗(yàn)共進(jìn)行5 d，所有訓(xùn)練在每天同一時(shí)間完成，在第7天進(jìn)行空間探索試驗(yàn)：撤掉水中的平臺(tái)，選擇SW 作為入水點(diǎn)，記錄大鼠在30 s內(nèi)的游泳軌跡，軟件可測(cè)算大鼠在四個(gè)象限游泳的速度、距離、時(shí)間等，也可記錄大鼠在之前平臺(tái)區(qū)域的穿越次數(shù)，以上數(shù)據(jù)均可表示大鼠對(duì)原來(lái)水下平臺(tái)的記憶能力。

1.2.6WB檢測(cè)在應(yīng)激結(jié)束后間隔一天，即實(shí)驗(yàn)第23 d進(jìn)行組織取材。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(350 mg/kg)，大鼠對(duì)疼痛刺激無(wú)反應(yīng)后迅速斷頭，用小止血鉗小心剝離顱骨，取出腦組織置于冰上，快速分離出大鼠雙側(cè)海馬組織，分別置于標(biāo)記好的凍存管后立即放入液氮中暫存，待所有組織取完后統(tǒng)一放入-80℃冰箱中保存，隨后進(jìn)行WB檢測(cè)。取100 mg/ml BSA，室溫融化后用生理鹽水稀釋至1 mg/ml；取離心管，分別加入相應(yīng)試劑，混勻后，室溫放置2 min，用分光光度計(jì)比色分析，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；將1 μl待測(cè)蛋白加入900 μl Bradford和99 μl生理鹽水，混勻后在595 nm處檢測(cè)吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本的蛋白濃度。

1.2.7SDS-PAGE電泳將兩塊清潔玻璃板對(duì)齊后放入夾中卡緊；加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。待膠充分凝固后可倒去膠上層水并用吸水紙將剩余水吸干；配5%的濃縮膠，加入TEMED后充分混合，將剩余空間灌滿，然后將梳子插入濃縮膠中，待膠凝固后垂直將梳子拔出。用去離子水沖洗后將加樣孔中液體用濾紙吸去；根據(jù)所測(cè)蛋白含量，計(jì)算含40 μg蛋白的溶液體積即為上樣量。取蛋白標(biāo)本至離心管中，加入適量蛋白上樣緩沖液。上樣前沸水浴5 min使蛋白變性；加入足量電泳液后開(kāi)始電泳。濃縮膠電壓為75 V；分離膠電壓為120 V，當(dāng)溴酚藍(lán)前沿電泳到分離膠底部時(shí)終止電泳，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

1.2.8免疫反應(yīng)將轉(zhuǎn)好的PVDF膜置于室溫下脫色搖床上的封閉液中，封閉1 h；用TBST 溶解的5%脫脂牛奶將一抗稀釋1 000倍，將PVDF膜蛋白朝下放于抗體液面，趕出氣泡，4℃過(guò)夜。用TBST在室溫下脫色，并在搖床上洗3次，每次5 min；將二抗用TBST稀釋3 000倍，室溫下孵育30 min后，用TBST在室溫脫色搖床上洗3次，每次5 min。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用GraphPad Prism 5.0 軟件行Two-way ANOVA、Bonferroni post-test和One-way ANOVA檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1體重變化各組大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中體重均平穩(wěn)增長(zhǎng)，應(yīng)激前各組體重?zé)o明顯差異(P>0.05)，而從應(yīng)激開(kāi)始后體重差異逐漸出現(xiàn)。接受慢性制動(dòng)應(yīng)激的大鼠(應(yīng)激生理鹽水組、應(yīng)激丁酸鈉組)較未應(yīng)激大鼠(對(duì)照生理鹽水組、對(duì)照丁酸鈉組)體重增長(zhǎng)緩慢。與對(duì)照生理鹽水組相比，應(yīng)激丁酸鈉組在第8天、第21天體重有明顯降低(P<0.01)；而應(yīng)激生理鹽水組在第8、15、21天與對(duì)照生理鹽水組相比體重明顯降低(P<0.01)。對(duì)照生理鹽水組大鼠與對(duì)照丁酸鈉組相比體重略有減低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2Y迷宮試驗(yàn)結(jié)果在應(yīng)激結(jié)束后1 d，各組大鼠中分別隨機(jī)選出8只進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，每組剩余6只取材用于生化指標(biāo)檢測(cè)。各組大鼠進(jìn)入新異臂的次數(shù)及停留時(shí)間百分比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組大鼠進(jìn)入各個(gè)臂次數(shù)百分比組間無(wú)顯著差異，而組內(nèi)分析發(fā)現(xiàn)四組大鼠進(jìn)入新異臂的次數(shù)均顯著高于其他兩臂(P<0.01)。而對(duì)于各組大鼠在三個(gè)臂的停留時(shí)間百分比的分析，組間分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，組內(nèi)分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)照生理鹽水組、對(duì)照丁酸鈉組及應(yīng)激丁酸鈉組在新異臂的停留時(shí)間遠(yuǎn)多于其他兩臂(P<0.01)，而應(yīng)激生理鹽水組在三個(gè)臂的停留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。單因素方差分析顯示應(yīng)激生理鹽水組〔(12.25±2.31)次〕在各個(gè)臂的總穿越次數(shù)較對(duì)照生理鹽水組〔(20.04±4.16)次〕多明顯減少(P<0.05)，應(yīng)激丁酸鈉組〔(14.36±1.87)次〕總穿越次數(shù)相對(duì)對(duì)照生理鹽水組和對(duì)照丁酸鈉組〔(18.41±2.79)次〕有所減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2、表3。

表1　大鼠體重變化(g,n=14)

與對(duì)照生理鹽水組比較：1)P<0.01

表2　Y迷宮試驗(yàn)停留時(shí)間結(jié)果

表3　Y迷宮試驗(yàn)停留時(shí)間、次數(shù)百分比結(jié)果

與其他兩臂比較：1)P<0.05

2.3Morris 水迷宮試驗(yàn)結(jié)果Two-way ANOVA 顯示各組大鼠平均潛伏期組內(nèi)(F3，140=2.98)、組間(F4，140=88.45)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Bonferroni posttest 顯示定位導(dǎo)航試驗(yàn)第2天，對(duì)照丁酸鈉平均潛伏期較對(duì)照生理鹽水組有明顯增高(P<0.05)；而應(yīng)激生理鹽水組大鼠在訓(xùn)練第3天的平均潛伏期顯著高于對(duì)照生理鹽水組(P<0.01)。見(jiàn)表4。One-way ANOVA 顯示，大鼠在目標(biāo)象限游泳時(shí)間百分比及穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

采用Two-wayANOVA 對(duì)各組大鼠在目標(biāo)象限及目標(biāo)相反象限的游泳時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組內(nèi)(F1，56=47.5，P<0.01)，而組間差異則不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F3，56=0.39，P>0.05)。應(yīng)激生理鹽水組大鼠在兩個(gè)區(qū)域的游泳時(shí)間無(wú)明顯差異，而其余三組大鼠在目標(biāo)象限的游泳時(shí)間均顯著高于其在目標(biāo)相反象限的時(shí)間(P<0.01)。見(jiàn)表6。

2.4海馬acH3 和acH4 蛋白含量應(yīng)激生理鹽水組大鼠acH3 蛋白含量的低于對(duì)照生理鹽水組(t=2.73，P<0.05)，而acH4 蛋白含量雖有降低趨勢(shì)但卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；應(yīng)激丁酸鈉組與應(yīng)激生理鹽水組大鼠相比較，acH3、acH4 蛋白水平均明顯增加(P<0.01)；對(duì)照丁酸鈉組大鼠則與對(duì)照組蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯差異。見(jiàn)表7。

表4　Morris 水迷宮試驗(yàn)潛伏期結(jié)果

與對(duì)照生理鹽水組比較：1)P<0.05,2)P<0.01

表5　Morris 水迷宮試驗(yàn)平臺(tái)穿越結(jié)果

表6　Morris 水迷宮游泳時(shí)間結(jié)果

與同組目標(biāo)相比較：1)P<0.01

表7　大鼠海馬acH3 和acH4 蛋白含量

與對(duì)照生理鹽水組比較：1)P<0.05；與對(duì)照丁酸鈉組比較：2)P<0.01

2.5海馬p-CREB、BDNF 含量應(yīng)激生理鹽水組大鼠海馬p-CREB 水平明顯低于對(duì)照生理鹽水組(P<0.01)，其BDNF 含量也低于對(duì)照生理鹽水組(P<0.05)；應(yīng)激丁酸鈉組與應(yīng)激生理鹽水組大鼠相比較p-CREB、BDNF 含量均有明顯增加(P<0.01、P<0.05)；對(duì)照丁酸鈉組大鼠相對(duì)于對(duì)照生理鹽水組BDNF 含量有所減少(P<0.05)，而p-CREB 含量則無(wú)明顯變化。見(jiàn)表8。

表8　大鼠海馬p-CREB、BDNF 含量

與對(duì)照生理鹽水組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與對(duì)照丁酸鈉組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3　討　論

本研究采用兩種迷宮來(lái)檢測(cè)各組大鼠的學(xué)習(xí)和記憶水平，結(jié)果顯示慢性應(yīng)激能夠在一定程度上損害大鼠的空間識(shí)別記憶及空間參考記憶。慢性應(yīng)激可對(duì)大鼠的空間識(shí)別記憶造成損傷，這與之前的研究結(jié)果一致〔7～10〕。此外，應(yīng)激強(qiáng)度的改變對(duì)空間識(shí)別能力亦有影響，在Y 迷宮試驗(yàn)中，本文說(shuō)明應(yīng)激后大鼠的活動(dòng)性降低，跟造模過(guò)程中對(duì)應(yīng)激大鼠的觀察一致。而對(duì)體重的分析同樣發(fā)現(xiàn)應(yīng)激造成了大鼠的抑郁樣行為，與眾多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致〔11〕。在水迷宮定位導(dǎo)航試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激在一定程度上損傷了大鼠的空間參考記憶。丁酸鈉屬于非選擇性HDAC抑制劑，可以抑制I 和IIa 型HDAC。本文的研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉可對(duì)大鼠空間記憶的損害起保護(hù)作用。同樣丁酸鈉對(duì)于大鼠的應(yīng)激后的抑郁樣行為也有輕微改善。正常大鼠腹腔給予丁酸鈉則不會(huì)對(duì)認(rèn)知造成影響或造成認(rèn)知功能的損害。免疫沉淀法研究發(fā)現(xiàn)，影響多種基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子附近組蛋白乙?；牟课辉贖3、H4，所以本文常檢測(cè)acH3、acH4 的表達(dá)來(lái)表示組織乙?；乃健?〕。本研究應(yīng)激對(duì)照說(shuō)明慢性應(yīng)激可降低大鼠海馬乙?；?，尤其是acH3的乙酰化水平，而丁酸鈉可以逆轉(zhuǎn)應(yīng)激大鼠這種乙?；慕档?，尤其是對(duì)于H4 的作用更為明顯；但丁酸鈉對(duì)正常大鼠海馬中兩種組蛋白的乙?；綗o(wú)顯著作用。最近一項(xiàng)關(guān)于HDAC 抑制的研究顯示〔11〕，丁酸鈉作用于離體的大鼠腦片，可顯著增加慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型大鼠海馬區(qū)域的組蛋白乙?；?，尤其是H4 的乙?；^給予丁酸鈉的正常大鼠的腦片有顯著增加，這與本文的研究結(jié)果向一致。對(duì)另一種III 型HDAC 抑制劑sirtinol 的研究發(fā)現(xiàn)〔12〕，sirtinol 對(duì)應(yīng)激后的大鼠腦片作用明顯，可顯著增加應(yīng)激大鼠海馬CA3 及DG 組蛋白乙酰化水平，而對(duì)于正常大鼠，其對(duì)海馬區(qū)域乙?；降脑黾訋缀鯖](méi)有作用，甚至輕度降低了H3 的磷酸化水平，再次證明丁酸鈉對(duì)病理狀態(tài)的大鼠與對(duì)正常大鼠的作用效果不同。

本研究說(shuō)明慢性束縛應(yīng)激顯著降低了海馬p-CREB 的含量，可能通過(guò)其對(duì)BDNF基因表達(dá)的調(diào)控，降低應(yīng)激大鼠海馬中該因子的含量，而丁酸鈉能夠逆轉(zhuǎn)這種蛋白的降低。結(jié)合組蛋白乙?；慕Y(jié)果推測(cè)，丁酸鈉可能是通過(guò)調(diào)整海馬的乙?；捤剑黾酉鄳?yīng)區(qū)域p-CREB 的含量，進(jìn)而影響B(tài)DNF 的表達(dá)；而丁酸鈉對(duì)正常大鼠BDNF的表達(dá)有不利影響，這與本文行為學(xué)中丁酸鈉降低正常大鼠的認(rèn)知功能的結(jié)果相一致，說(shuō)明丁酸鈉對(duì)認(rèn)知功能的作用與海馬中BDNF 的含量密切相關(guān)，再次證實(shí)BDNF 在動(dòng)物認(rèn)知功能中的重要作用，與既往的研究結(jié)果相吻合〔13〕。綜上研究結(jié)果可推測(cè)，組蛋白去乙?；付∷徕c對(duì)慢性制動(dòng)應(yīng)激大鼠的認(rèn)知功能具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過(guò)恢復(fù)慢性激大鼠海馬區(qū)域的組蛋白乙?；?，進(jìn)而上調(diào)認(rèn)知相關(guān)蛋白如p-CREB、BDNF 的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，其詳細(xì)機(jī)制需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。本文闡明丁酸鈉對(duì)慢性應(yīng)激大鼠認(rèn)知功能的作用機(jī)制，有望對(duì)預(yù)防及治療慢性應(yīng)激所致認(rèn)知損害提供新的理論依據(jù)及治療方法。

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〔2016-01-18修回〕

(編輯滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.018

魏艷霞(1975-)，女，碩士，主要從事骨科與神經(jīng)科康復(fù)研究。

R3

A

1005-9202(2016)14-3391-04；