張麗敏　李鴻燕　高　燕　李　敬　陳　驊

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，河北　保定　071000)

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雷公藤多苷對糖尿病腎病大鼠腎損傷的保護(hù)作用及可能機制

張麗敏李鴻燕1高燕李敬陳驊

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，河北保定071000)

目的探討雷公藤多苷對糖尿病(DM)腎病(DN)大鼠腎損傷的保護(hù)作用及其可能機制。方法將50只健康雄性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為對照組(10只)和DM模型組(40只)，采用鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的方法建立大鼠DM模型，將DM模型成功的大鼠按隨機數(shù)字分為模型組、西藥組、雷公藤多苷低、高劑量組，每組10只。西藥組給予50 mg/kg厄貝沙坦灌胃，雷公藤多苷低劑量組、高劑量組均給予雷公藤多苷8 mg/kg、16 mg/kg灌胃。對照組和模型組均給予生理鹽水灌胃，各組均連續(xù)灌胃8 w。觀察大鼠血糖(BG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白(Pro)水平及腎臟指數(shù)(RI)、腎小球面積(MGA)、腎小球體積(MGV)。結(jié)果模型組的BG和HbA1c水平均顯著高于對照組(P<0.01)；西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組BG和HbA1c水平與模型組對比均無明顯差異(P>0.05)。與對照組對比，模型組的SCr、BUN 和 Pro水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組對比，西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組均明顯降低(P<0.01)。與對照組對比，模型組的RI、MGA、MGV均顯著性升高(P<0.01)；與模型組對比，西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組均明顯降低(P<0.01)。對照組大鼠腎組織形態(tài)正常；模型組異常，腎小球管壁薄腫脹，呈現(xiàn)無規(guī)則，管腔大小不均勻，血管萎縮，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組的以上病理變化明顯改善，尤其雷公藤多苷高劑量組改善程度更大。結(jié)論雷公藤多苷能改善DN大鼠SCr、BUN、Pro水平，對DN大鼠腎損傷有一定的保護(hù)作用。

糖尿病腎??；雷公藤多苷；腎功能

糖尿病(DM)腎病(DN)屬于DM患者最常見的微血管并發(fā)癥，病因和發(fā)病機制尚不完全清楚〔1〕。DN的臨床病理主要體現(xiàn)在腎臟的損傷，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、微量蛋白尿的合成與降解失衡上〔2〕。雷公藤多苷具有抗感染、抑制免疫等作用，臨床用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征等疾病治療〔3〕。有研究報道〔4〕，雷公藤多苷具有明顯降低DN患者蛋白尿，提高患者免疫功能，緩解DN患者癥狀的功效。本文旨在探討雷公藤多苷對DN大鼠腎損傷的保護(hù)作用及其可能作用機制。

1　資料與方法

1.1動物、藥物、主要試劑與儀器50只健康雄性SD大鼠，體重(200±20)g，級別 SPF，購于蚌埠醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，許可證號SYXK(皖2012-002)。雷公藤多苷(片劑，規(guī)格：10 mg×50 s，國藥準(zhǔn)字Z31020415，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司)；厄貝沙坦(片劑，規(guī)格：0.15 g×7 s，國藥準(zhǔn)字H20053912，修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)。實驗藥物均以生理鹽水配制溶液。鏈脲佐菌素(STZ，由美國Sigma 公司提供，批號：040M1367)；美國Humalyzer 2000型自動生化分析儀；穩(wěn)擇易TM血糖儀及血糖試紙(強生中國醫(yī)療器材有限公司)。

1.2方法

1.2.1DM模型的建立〔5〕實驗前，對大鼠進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，按隨機數(shù)字分為對照組(10只)和DM模型組(40只)。禁食12 h，DM模型組單次腹腔內(nèi)注射55 mg/kg STZ(溶于0.1 mol/L檸檬酸緩沖液)，72 h后，取大鼠尾靜脈血液，通過血糖儀測定血糖水平，并用尿糖試紙測大鼠隨意尿糖，血糖濃度≥16.7 mmol/L，且尿糖定性結(jié)果顯示，則表明DM模型成功。對照組給藥腹腔注射等體積的檸檬酸緩沖液。

1.2.2分組及給藥處理將造模成功的大鼠按隨機數(shù)字分為模型組、雷公藤多苷低劑量組(每天8 mg/kg)、雷公藤多苷高劑量組(每天16 mg/kg)、西藥組(厄貝沙坦，每天50 mg/kg)各10只，藥物均按灌胃方式，對照組和模型組均灌胃同等體積的生理鹽水。在實驗觀察過程中，給予大鼠自由飲水、進(jìn)食，但不給予降糖藥物。

1.2.3觀察指標(biāo)連續(xù)灌胃8 w后，收集代謝籠24 h 尿液，并對大鼠眶下靜脈取血，采用全自動生化分析儀測定血生化水平：血糖(BG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白(Pro)。待采血后，處死大鼠，取兩腎，稱重。采用病理組織學(xué)，右側(cè)腎臟組織行蘇木素-伊紅(HE)染色，高倍鏡(×400)觀察，每個標(biāo)本隨機選擇6個腎小球，顯微攝影系統(tǒng)攝取圖像，采用Image J 圖像分析軟件測量腎小球面積，6個腎小球面積平均值為此標(biāo)本平均腎小球面積(MGA)，平均腎小球體積(MGV)=1.25×MGA×3/2〔6〕。并將腎重(mg)與體重(g)比值作為腎臟指數(shù)(RI)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、LSD檢驗、χ2檢驗。

2　結(jié)　果

2.1各組BG、HbA1c水平比較與對照組對比，DM模型組BG和HbA1c水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組、西藥組對比，西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組均無明顯差異(P>0.05)，見表1。

2.2各組SCr、BUN及Pro水平比較與對照組對比，DM模型組SCr、BUN和Pro水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組對比，西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組均明顯降低(P<0.01)；與西藥組對比，雷公藤多苷低、高劑量組均明顯降低(P<0.01或P<0.05)。見表2。

2.3各組RI、MGA、MGV比較與對照組對比，DM模型組RI、MGA、MGV均顯著升高(P<0.01)；與模型組對比，西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組均明顯降低(P<0.01)；與西藥組對比，雷公藤多苷高劑量組均明顯降低(P<0.01或P<0.05)。見表3。

2.4各組大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)情況見圖1。對照組大鼠腎組織形態(tài)正常，腎小球管壁薄厚均一，管腔大小正常，無明顯的病理變化；模型組大鼠腎組織形態(tài)異常，腎小球管壁薄腫脹，呈現(xiàn)無規(guī)則，管腔大小不均勻，血管萎縮，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。西藥組和雷公藤多苷低、高劑量組的以上病理變化明顯改善，尤其雷公藤多苷高劑量組改善程度更大。

表1　各組大鼠BG和HbA1c水平比較

與對照組比較：1)P<0.01

表2　各組大鼠SCr、BUN及Pro水平比較

與對照組對比：1)P<0.01；與模型組對比：2)P<0.01；與西藥組對比：3)P<0.05，4)P<0.01；下表同

表3　各組大鼠RI、MGA、MGV比較

圖1　各組大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)(HE，×400)

3　討　論

早期DN病理變化主要為腎小球肥大、基底膜增厚，ECM蛋白積聚致系膜區(qū)擴(kuò)張，導(dǎo)致彌漫性或結(jié)節(jié)性腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化，一旦出現(xiàn)持續(xù)大量蛋白尿，病情往往不可逆轉(zhuǎn)，直至終末期腎衰竭〔7〕。因此，DN的診斷和治療宜早不宜晚，應(yīng)該在腎臟病變處在代償期時予以干預(yù)，延緩其進(jìn)展到失代償期。雷公藤多苷是雷公藤的有效活性成分，對于免疫相關(guān)性腎炎、原發(fā)性腎小球腎炎的治療有一定的作用〔8，9〕。有研究報道〔10〕，雷公藤多苷能通過降低尿蛋白的排泄，保護(hù)腎小管，抑制腎間質(zhì)纖維化，改善腎功能。本實驗結(jié)果提示雷公藤多苷對DM大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用有限，并不會隨著劑量的增加，BG和HbA1c水平發(fā)生明顯變化。另外提示DN大鼠的腎功能得到改善，雷公藤多苷對DM大鼠的腎臟具有一定的保護(hù)作用，這可能與雷公藤多苷的作用相關(guān)，雷公藤多苷能改善腎小球微血管功能，降低腎小球高濾過率，減少蛋白尿的排泄，從而保護(hù)腎功能，改善腎損傷。同時，雷公藤多苷對DM大鼠的RI、MGA、MGV均有降低的作用，可改善腎功能，可抑制腎小球腎炎系膜纖維增生，能收縮腎血管可促進(jìn)微循環(huán)。從腎組織病理形態(tài)分析，通過雷公藤多苷干預(yù)治療后，大鼠腎組織形態(tài)改善，且改善程度隨著雷公藤多苷的劑量越來越明顯。

1陳衛(wèi)東，張繼強，張燕，等.雷公藤多苷對糖尿病腎病大鼠腎基質(zhì)金屬蛋白酶-9和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1表達(dá)的影響〔J〕.中國臨床藥理學(xué)雜志，2015；31(12)：1157-61.

2張燕，常保超，陳衛(wèi)東，等.雷公藤多苷對糖尿病腎病大鼠腎組織轉(zhuǎn)化生長因子β1、骨形成蛋白7及Gremlin表達(dá)的影響〔J〕.腎臟病與透析腎移植雜志，2012；21(3)：237-43.

3池婕，林兵，劉志宏，等.雷公藤制劑指紋圖譜及譜效關(guān)系研究〔J〕.中國中藥雜志，2015；40(8)：1479-83.

4Li CL，He J，Li ZG，etal.Effects of multi-glycosides of tripterygium wilfordiion in the treatment of Sj?gren′s syndrome in the non-obese diabetic mouse model〔J〕.Chin J Dent Res，2015；18(2)：95-101.

5柯簫韻，柯俊樹.纈沙坦聯(lián)合雷公藤多苷對2型糖尿病腎病微量蛋白尿的影響〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2012；23(8)：2060-1.

6Ota T，Takamura T，Ando H，etal.Preventive effect of cerivastatin on diabetic nephropathy through suppression of glomerular macrophage recruitment in a rat model〔J〕.Diabetologia，2003；46(6)：843-51.

7李敏州，高彥彬，馬鳴飛，等.糖尿病腎病發(fā)病機制研究進(jìn)展〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2012；18(22)：344-9.

8Wang J，Miao M，Zhang Y，etal.Quercetin ameliorates liver injury induced with Tripterygium glycosides by reducing oxidative stress and inflammation〔J〕.Can J Physiol Pharmacol，2015；93(6)：427-33.

9張麗春.雷公藤多苷對慢性腎炎的作用機制研究〔J〕.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012；28(6)：594-6.

10彭健韞，蘭樂健，張小如，等.小劑量他克莫司聯(lián)合雷公藤多苷治療特發(fā)性膜性腎病的臨床研究〔J〕.中國臨床藥理學(xué)雜志，2015；31(11)：905-8.

〔2016-02-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.017

李鴻燕(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事糖尿病腎病研究。

張麗敏(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事糖尿病腎病研究。

R692

A

1005-9202(2016)14-3389-03；

1河北大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科