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糖肝康對TAA致糖尿病模型大鼠肝損傷肝臟TLR4表達的影響

錢衛(wèi)斌1,錢秋海2

(1.日本鳥取大學(xué)醫(yī)學(xué)部，日本 鳥取683-8503; 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東 濟南250011)

Effect of Tanggankang on immunohistochemical expression of TLR4 in acute damaged liver rat model

QIAN Wei-bin1,QIAN Qiu-hai2

(1.DeptofMedicine,TottoriUniversity,Tottori683-8503,Japan; 2.DeptofEndocrinology,theAffiliatedHospitalofShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250011,China)

中國圖書分類號：E-332；R282.71；R322.47；R392.11；R575.022； R587.1

關(guān)鍵詞:糖肝康；TLR4；免疫組化；動物實驗；糖尿??；急性肝損傷

Key words:Tanggankang; TLR4; immunohistochemistry;animal experiment; diabetes; acute damaged liver

糖尿病可累及肝臟缺血缺氧，ALT、AST活性增加，膽紅素代謝紊亂，重者可致肝壞死[1-2]；肝損傷又使血糖難控制，二者惡性循環(huán)，致糖脂代謝紊亂。有實驗證明，肝纖維化等慢性肝病時，TLR4可經(jīng)NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路致肝損傷。本實驗采用STZ+TAA造成DM急性肝損傷大鼠模型，觀察糖肝康對模型大鼠肝臟TLR4免疫組化表達的影響。

1材料

1.1動物及分組健康♂ Wistar大鼠200只，體質(zhì)量(200±20) g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。取Wistar大鼠190只，用2%鏈脲佐菌素制成糖尿病模型。選取150只成模大鼠進入實驗，隨機分3大組(n=50)：TAA 100、200、300 mg·kg-1組；每種造模方式隨機分5小組(n=10)：模型動物+生理鹽水組、模型動物+護肝寧組、模型動物+糖肝康小、中、大劑量組。另取10只正常大鼠作為正常動物+生理鹽水組。

1.2藥物及試劑糖肝康顆粒：山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科加工，實驗時將顆粒水煎煮開后制成糖肝康煎劑；護肝寧：貴州信邦制藥股份有限公司，批號20120303041。鏈脲佐菌素(STZ)：Sigma公司產(chǎn)品，批號020106；硫代乙酰胺(TAA)：上海展云化工有限公司，批號1106017；一抗Anti-TLR4，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號bs-1375R；SP-9000 HistostainTM-Plus kits免疫組化染色試劑盒，批號20090921，濃縮型DAB試劑盒，批號20091021，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3儀器LXJ-Ⅱ型離心沉淀機，上海第二分析儀器廠生產(chǎn)；LEICA ASP600全自動生物脫水機，LEICA公司生產(chǎn)；OLYMPUS CX51顯微鏡；LEICA ASP2135病理切片機；醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，型號HPIAS1000，同濟醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司產(chǎn)品。

2 方法

2.1給藥模型動物+生理鹽水組和正常動物+生理鹽水組給予生理鹽水ig；模型動物+護肝寧組給予護肝寧混懸液0.04 g·mL-1ig；模型動物+糖肝康小、中、大劑量組分別給予1、2、4 g·mL-1的糖肝康ig。各組給藥容積均為10 mL·kg-1。

2.2造模連續(xù)給藥12周后，TAA 100、200、300 mg·kg-1組分別給予TAA 100、200、300 mg·kg-1腹腔注射，制成糖尿病急性肝損傷模型。

2.3免疫組化檢測TLR424 h內(nèi)用戊巴比妥鈉60 mg·kg-1腹腔注射，取血，待測血糖、肝功能。開腹取出肝臟，嚴(yán)格根據(jù)免疫組化試劑盒操作，檢測肝臟TLR4的表達。

3結(jié)果

3.1糖肝康對TAA急性肝損傷模型大鼠血糖、肝功能的影響造模后，模型動物+生理鹽水組大鼠的血糖、ALT、AST水平異常升高，與正常動物+生理鹽水組相比(P<0.01)。治療后，模型動物+糖肝康小、中、大劑量組和模型動物+護肝寧組與模型動物+生理鹽水組相比，血糖、ALT、AST水平降低(P<0.05或P<0.01)。模型動物+糖肝康大劑量組與模型動物+護肝寧組比較，血糖、ALT、AST水平降低(P<0.05)。模型動物+糖肝康中劑量組與模型動物+護肝寧組比較，ALT水平降低(P<0.05)。

3.2糖肝康對TAA急性肝損傷模型大鼠肝臟TLR4免疫組化表達的影響正常動物+生理鹽水組大鼠肝臟KC、血管內(nèi)皮細胞、膽管上皮細胞及一些肝細胞有微弱TLR4表達。造模后，模型動物+生理鹽水組大鼠肝組織TLR4表達明顯增加，TLR4染色位于胞質(zhì)，主要見于竇周，以沿間隔分布的梭形間質(zhì)細胞表達為主，部分肝細胞、肝竇內(nèi)皮細胞和膽管上皮細胞的膜上TLR4的表達也有所增強。治療后，與模型動物+生理鹽水組比較，模型動物+糖肝康中、大劑量組竇周梭行間質(zhì)細胞表達減少，模型動物+護肝寧組和模型動物+糖肝康小劑量組TLR4陽性顆粒表達也減少，模型動物+糖肝康用藥組與模型動物+護肝寧組比較，無明顯差異。

4討論

糖尿病肝損傷與氧化應(yīng)激、炎癥因子等因素密切相關(guān)。TLR4信號通路激活后，能啟動多種炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和合成[3]。已證明，TLR4通過MyD88依賴性信號通路和MyD88非依賴性信號通路激活NF-κB[4-5]，NF-κB參與免疫調(diào)控介導(dǎo)炎癥和多種生理病理過程的基因轉(zhuǎn)錄[6]，導(dǎo)致炎性因子大量表達，參與機體組織、器官的損害。結(jié)果顯示,模型動物+生理鹽水組大鼠血糖、肝功能及肝臟TLR4的表達較正常動物+生理鹽水組大鼠明顯異常，而糖肝康可改善TLR4在肝臟的表達，對血糖、肝功能的效果優(yōu)于模型動物+護肝寧組。此外，本研究通過研究糖肝康對不同TAA劑量所致糖尿病急性肝損傷的治療，效果無差別；且糖肝康與護肝寧相比，差異也無顯著性。但糖肝康可明顯改善血糖、肝功能，也可降低肝臟TLR4的表達，進而起到保護肝臟的作用。

參考文獻

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文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)02-0295-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.030

作者簡介：錢衛(wèi)斌(1984-)，男，博士生，E-mail：doctorqwb@126.com;錢秋海(1955-)，男，博士，教授，主任醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)治療內(nèi)分泌代謝性疾病，通訊作者，Tel：0531-68617953，E-mail：qianqiuhai@126.com

基金項目：山東省自然科學(xué)基金面上項目(No ZR2012HM093)；山東省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究項目(No 2011-038)

收稿日期:2015-11-14,修回日期:2015-12-15

網(wǎng)絡(luò)出版時間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.060.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-1-25 15:57