王谷仙 王琦

（曲靖醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，云南 曲靖 655011）

單基因遺傳病分析

王谷仙 王琦

（曲靖醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，云南 曲靖 655011）

單基因遺傳病的治療措施主要有：宮內(nèi)治療、替代療法、藥物防治、手術(shù)療法和器官移植、代謝療法、飲食療法等；MLPA的應(yīng)用不依賴患者信息，可有效對(duì)DMD/BMD、SMA致病基因拷貝數(shù)進(jìn)行相對(duì)定量，檢出遺傳缺陷攜帶者和提高患者診斷率；HRM分析方法可對(duì)臨床β-地中海貧血突變進(jìn)行快速的分型和突變掃描檢測(cè)；同時(shí)開(kāi)展臨床試驗(yàn)可為最終安全、有效應(yīng)用于臨床患者奠定基礎(chǔ)。

單基因遺傳病；防控；治療措施

一、單基因遺傳病的防控與治療分析

單基因遺傳病是遺傳病中的主要類型，由一對(duì)等位基因或一對(duì)同源染色體上單個(gè)基因突變引起，主要分為常染色體顯性遺傳病、常染色體隱性遺傳病、X連鎖顯性遺傳病、X連鎖隱性遺傳病、Y連鎖遺傳病。單基因遺傳病的防控措施主要有:加強(qiáng)遺傳病知識(shí)的宣傳，遠(yuǎn)離外界環(huán)境誘變因素，開(kāi)展遺傳咨詢，婚姻指導(dǎo)，婚前檢查，產(chǎn)前診斷，遺傳病癥狀出現(xiàn)前的預(yù)防等。單基因遺傳病的治療措施主要有:宮內(nèi)治療、替代療法、藥物防治、手術(shù)療法和器官移植、代謝療法、飲食療法等。

二、MLPA技術(shù)在單基因遺傳病DMD/BMD、SMA基因診斷中的應(yīng)用

更多還原 ①M(fèi)LPA檢測(cè)到5位患者已知位點(diǎn)及其相鄰位點(diǎn)存在缺失突變。說(shuō)明MLPA檢測(cè)范圍廣，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。②18位DMD患者進(jìn)行了缺失熱區(qū)21個(gè)外顯子的檢測(cè)，診斷率為66.7%（12/18），應(yīng)用MLPA技術(shù)后，在3個(gè)未篩查到缺失突變的DMD家系中發(fā)現(xiàn)了重復(fù)突變，DMD患者診斷率提高到83.3%（15/18）。聯(lián)合應(yīng)用MLPA檢測(cè)、缺失熱區(qū)突變篩查和遺傳連鎖分析可為18個(gè)有患者參與診斷的DMD家系提供信息，診斷率達(dá)100%（18/18）。③連鎖分析需在有患者參與的前提下才能進(jìn)行攜帶者的篩查，而MLPA不依賴患者參與，即可對(duì)疑似攜帶者的致病基因行直接診斷。本研究應(yīng)用MLPA篩查到11位DMD女性攜帶者（其中5位來(lái)自無(wú)患者信息的家系），結(jié)果經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證無(wú)誤。攜帶者診斷率為50%（11/22）。④一例產(chǎn)前診斷胎兒SRY檢測(cè)為陰性，其未遺傳到母親的缺陷基因，排除攜帶者身份。⑤5個(gè)家系（家系6-10）經(jīng)遺傳連鎖分析提示，患者X致病染色體均遺傳自其母親。應(yīng)用MLPA發(fā)現(xiàn)這5個(gè)家系DMD患者母親基因型正常，推知患者的缺失突變系新發(fā)生突變，突變新發(fā)生率為35.7%（5/14）。僅依靠連鎖分析篩查攜帶者有可能發(fā)生誤診，故生育指導(dǎo)時(shí)，仍需對(duì)疑似攜帶者行直接基因診斷。SMA：①4位SMA患者M(jìn)LPA檢測(cè)結(jié)果：1號(hào)患者SMN1純合缺失；2號(hào)患者一拷貝SMN1缺失，另一拷貝轉(zhuǎn)變?yōu)镾MN2；3、4號(hào)患者基因型均表現(xiàn)為一拷貝SMN1裝變?yōu)镾MN2，另一拷貝僅7號(hào)外顯子轉(zhuǎn)變?yōu)镾MN2外顯子7。MLPA可判斷SMN1是發(fā)生了缺失還是轉(zhuǎn)換，檢測(cè)結(jié)果比PCR-酶切法更詳細(xì)。②PCR-酶切法不能篩查攜帶者，MLPA對(duì)12位SMA疑似攜帶者的SMN1/2基因拷貝數(shù)進(jìn)行了相對(duì)定量，確定了攜帶者身份，為其再生育提供了有利信息，攜帶者診斷率為100%（12/12）。③本課題發(fā)現(xiàn)了8種SMN基因型。結(jié)論MLPA是一種高效、靈敏、準(zhǔn)確、性價(jià)比較高的DMD/BMD、SMA分子診斷新方法。MLPA的應(yīng)用不依賴患者信息，可有效對(duì)DMD/BMD、SMA致病基因拷貝數(shù)進(jìn)行相對(duì)定量，檢出遺傳缺陷攜帶者和提高患者診斷率。

三、HRM分析檢測(cè)單基因遺傳病點(diǎn)突變及β-地中海貧血的臨床檢測(cè)

妊娠雖然可使HbA2的水平稍微升高，但是并未影響到HbA2對(duì)β-地中海貧血攜帶者的篩查作用，不論在孕婦還是非孕婦中，HbA2均有很好的篩查β-地中海貧血攜帶者的價(jià)值。第二章應(yīng)用HRM分析檢測(cè)β-地中海貧血基因點(diǎn)突變目的應(yīng)用上述建立的HRM分析方法對(duì)未知基因型的標(biāo)本進(jìn)行β-珠蛋白基因檢測(cè)，探討其臨床應(yīng)用的可行性。方法1.應(yīng)用上述第一部分優(yōu)化的條件方法對(duì)未知基因型的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。2.選取60個(gè)標(biāo)本，其中包含5個(gè)血液學(xué)和HbA2確認(rèn)的β-地中海貧血攜帶但是RDB方法沒(méi)發(fā)現(xiàn)異常的標(biāo)本，先進(jìn)行HRM分析檢測(cè)再進(jìn)行RDB或β-珠蛋白序列測(cè)序檢測(cè)進(jìn)行結(jié)果比較。3.進(jìn)行HRM分析檢測(cè)時(shí)加入中國(guó)最常見(jiàn)的β？地中海貧血雜合突變基因型標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照及正常野生型標(biāo)本作為陰性對(duì)照。結(jié)果P1+P2引物的反應(yīng)產(chǎn)物中，有一個(gè)標(biāo)本通過(guò)與RDB和測(cè)序檢測(cè)結(jié)果相比較發(fā)現(xiàn)為假陽(yáng)性。其它檢測(cè)出存在突變的標(biāo)本的曲線均與陽(yáng)性對(duì)照分型一致。5個(gè)外送的血液學(xué)提示β-地中海貧血攜帶的標(biāo)本中均在掃描時(shí)發(fā)現(xiàn)有異常曲線，經(jīng)測(cè)序檢測(cè)確認(rèn)為一個(gè)Hb G-Coushatta即HBB:c.68A〉C、一個(gè)Cd37 （TGG〉TAG）即HBB:c.113G〉A(chǔ)、一個(gè)Hb L’Aquila即HBB:c.319C〉G和兩個(gè)Hb New York即HBB:c.341T〉A(chǔ)雜合突變，其余結(jié)果與RDB方法或測(cè)序方法確定的基因型一致。結(jié)論HRM分析方法可對(duì)臨床β-地中海貧血突變進(jìn)行快速的分型和突變掃描檢測(cè)。

四、遺傳病的生物治療

隨著生命與醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展，近年來(lái)以靶向致病分子或其相關(guān)信號(hào)通路、靶分子的外源物質(zhì)補(bǔ)充、轉(zhuǎn)基因、RNA干擾、基因組編輯等生物學(xué)技術(shù)為代表的生物學(xué)治療措施開(kāi)始應(yīng)用于遺傳病的治療，并取得了一定的療效。但目前大多數(shù)遺傳病的生物學(xué)治療仍局限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，今后在繼續(xù)研發(fā)基于致病機(jī)制的新治療策略的同時(shí)，將關(guān)注如何開(kāi)展臨床試驗(yàn)，為最終安全、有效應(yīng)用于臨床患者奠定基礎(chǔ)。

［1］劉振興1，2，崔亞洲1，劉超1，2，欒靜1，周小艷1，韓金祥1.成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體基因野生型和 E731K突變型真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志.2014（05）

［2］李，袁，許燁燁，方慧琴，叢 *.Ⅳ型成骨發(fā)育不全家系的遺傳分析［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展.2015（03）

［3］鄒新博，梅栩彬，趙立民，劉文君.阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征合并馬凡氏綜合征1例［J］.山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào).2015（05）

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