郭 坤 肖生祥 耿松梅

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·論著·

Klf4在銀屑病和濕疹患者皮損中的表達(dá)

郭 坤 肖生祥 耿松梅

目的： 檢測(cè)Klf4在銀屑病及濕疹皮損中的表達(dá)。方法： 采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)Klf4在16例銀屑病患者皮損、16例濕疹皮損及16例正常皮膚中的表達(dá)。結(jié)果： 銀屑病皮損Klf4陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為（346.56±24.91）高于正常皮膚的（235.12±20.32），（P＜0.05），濕疹皮損為（75.94±15.61），低于正常皮膚（P＜0.05）。結(jié)論： 濕疹患者的Klf4表達(dá)下調(diào)而在銀屑病患者中上調(diào)，KIf4在不同疾病中可能發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。

Klf4； 銀屑病； 濕疹

銀屑病、濕疹均為慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，兩者都可表現(xiàn)為皮膚干燥、脫屑、含水量下降等臨床癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，發(fā)病機(jī)制也較為復(fù)雜，多認(rèn)為與遺傳、感染、免疫及環(huán)境等多種因素相關(guān)。兩者的組織病理也均表現(xiàn)出皮膚“磚墻結(jié)構(gòu)”的不穩(wěn)定，因此近些年來(lái)認(rèn)為銀屑病、濕疹亦是皮膚屏障異常性疾?。?］。Klf4作為鋅指轉(zhuǎn)錄因子，高表達(dá)于腸道上皮組織及表皮細(xì)胞，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡和正常穩(wěn)態(tài)等重要生命過(guò)程，在皮膚組織中主要參與表皮細(xì)胞的分化，對(duì)表皮屏障有著重要的意義［2，3］。

1　材料與方法

1.1一般資料 實(shí)驗(yàn)中所使用皮膚組織為我科門(mén)診石蠟包埋組織2013-2014年經(jīng)臨床及組織病理確診的未經(jīng)治療的尋常型銀屑病及濕疹患者各16例（男8例，女8例），年齡分別為（38.25±11.43）歲和（40.21±17.12）歲；16例整形美容科手術(shù)切除的正常皮膚標(biāo)本為對(duì)照，平均（24.31±5.13）歲。

1.2方法 用免疫組化（SP）法檢測(cè)Klf4蛋白在銀屑病、濕疹皮膚組織中的表達(dá)。根據(jù)試劑說(shuō)明進(jìn)行操作［兔抗人Klf4多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司，免疫組化SP檢測(cè)試劑盒（SP-9000）購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司］。

1.3結(jié)果判定 Klf4定位于細(xì)胞核內(nèi)，表達(dá)棕黃色或棕褐色顆粒。采用日本 Olympus光學(xué)顯微鏡對(duì)Klf4蛋白在銀屑病、濕疹中表達(dá)的染色結(jié)果分在100倍、200倍鏡下拍攝。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 16.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，將銀屑病、濕疹患者組織切片5個(gè)視野（100倍顯微鏡）中陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)總和取均值，然后對(duì)其進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

為了研究Klf4在銀屑病及濕疹中的表達(dá)情況，我們利用免疫組化法檢測(cè)兩種疾病皮損中Klf4的表達(dá)及分布情況。結(jié)果顯示：正常皮膚組織中Klf4主要表達(dá)于棘細(xì)胞層及顆粒層細(xì)胞的細(xì)胞核（圖1a，b），銀屑病及濕疹患者皮損中Klf4的表達(dá)位置與正常對(duì)照類似，但銀屑病患者皮損中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多（圖1c，d），濕疹患者皮損中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯減少（圖1e，f）（表1）。

Klf4在銀屑病皮損處的表達(dá)與正常皮膚組織中表達(dá)相比，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.87，P＜0.05）；Klf4的表達(dá)在濕疹患者皮損中與正常組織中相比陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-24.86，P＜0.05）。

表1　Klf4在不同皮損組織中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

圖1　Klf4在不同疾病中的表達(dá)

3　結(jié)論

Klf4是一種在腸道和上皮組織中廣泛表達(dá)的核轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡和正常穩(wěn)態(tài)等重要生命過(guò)程［4］。Klf4基因缺失小鼠皮膚的通透性明顯增高，導(dǎo)致新生小鼠脫水死亡，證明Klf4在皮膚屏障防御功能的構(gòu)建方面起著關(guān)鍵作用，異位高表達(dá)的Klf4可加速表皮細(xì)胞的終末分化和角質(zhì)層的生成，從而加速表皮滲透性屏障的形成，Klf4基因還能增強(qiáng)表皮的防御功能，并對(duì)多個(gè)表皮屏障功能分子的轉(zhuǎn)錄有促進(jìn)作用，Klf4對(duì)表皮分化復(fù)合物CE的成熟及皮膚屏障的完善是必不可少的［5］。

除此之外，Klf4在干細(xì)胞的形成和抑制胃癌、原發(fā)性肺癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。Klf4通過(guò)調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)而在細(xì)胞的周期調(diào)控、細(xì)胞的增生分化中擔(dān)任重要的角色，它可能與腫瘤發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系。Klf4可直接激活細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子p21的啟動(dòng)子，從而抑制細(xì)胞周期蛋白依賴激酶復(fù)合體，使細(xì)胞停滯在G1/S期，抑制細(xì)胞的過(guò)度增殖［6］。

銀屑病是一種以皮膚紅斑、鱗屑為主，嚴(yán)重影響患者外觀及心理的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，皮膚屏障功能測(cè)試儀檢測(cè)到銀屑病患者角質(zhì)層的含水量、皮脂含量及經(jīng)表皮水分流失均下降［7，8］，表明銀屑病患者的皮膚屏障功能受損。銀屑病的病理生理表現(xiàn)為表皮基底層角質(zhì)形成細(xì)胞增殖加速，有絲分裂周期及表皮更替時(shí)間明顯縮短，呈現(xiàn)出類似腫瘤的增生模式，因此銀屑病亦是一種表皮增殖異常性疾病。

濕疹是由多種因素引起的慢性炎癥性皮膚病，濕疹患者表皮細(xì)胞間水腫，導(dǎo)致細(xì)胞間隙增大，經(jīng)皮水分流失增多；大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，影響皮膚正常的新陳代謝，使得脂質(zhì)、天然保濕因子及抗炎因子表達(dá)異常，從而使皮膚變的干燥、脫屑［9］。

本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果顯示正常皮損中Klf4主要表達(dá)于棘細(xì)胞層及顆粒層的細(xì)胞核，銀屑病患者皮損中Klf4的表達(dá)主要集中于棘細(xì)胞細(xì)胞核，顆粒層細(xì)胞核也有少量表達(dá)，與正常皮損相比，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多。Tsoil及Madonna等研究發(fā)現(xiàn)Klf4是與銀屑病發(fā)病密切相關(guān)的15個(gè)易感位點(diǎn)之一，在銀屑病的發(fā)病中起著重要的作用［10，11］。Kim等［12］對(duì)銀屑病患者皮損中Klf4進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其表達(dá)較正常對(duì)照明顯升高，治療之后Klf4的表達(dá)明顯降低，Klf4與銀屑病病情發(fā)展相關(guān)，推測(cè)可能與細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。Chen等［13］認(rèn)為銀屑病皮損中升高的Klf4由IFN-γ and TNF-α（與銀屑病發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)的細(xì)胞因子）所誘導(dǎo)而產(chǎn)生，伴有增殖阻滯劑P21WAF1/Cip1的活化，誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞細(xì)胞周期的停滯，抑制異常角質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度增殖和分化［14，15］。

濕疹患者的免疫組化結(jié)果顯示Klf4主要表達(dá)于棘細(xì)胞層，呈散在分布，顆粒層亦有少量表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照明顯減少。Klf4表達(dá)降低會(huì)使?jié)裾罨颊呓?jīng)皮水分丟失增加，出現(xiàn)皮膚干燥、脫屑，并且使得皮膚中絲聚合蛋白原向Flg的轉(zhuǎn)化減少，從而影響角質(zhì)細(xì)胞間緊密連接，使CE蛋白和脂質(zhì)不能緊密的貼合在角質(zhì)層，影響表皮脂質(zhì)的分布，因此臨床上濕疹患者會(huì)出現(xiàn)表皮干燥、脫屑及瘙癢等皮膚屏障破壞的表現(xiàn)。

綜上所述，本文通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)了Klf4在銀屑病及濕疹患者皮損中的表達(dá)，我們推測(cè)Klf4作為多功能轉(zhuǎn)錄因子，不僅參與皮膚屏障的成熟和完善，在抑制細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中也起到重要的作用。在銀屑病發(fā)病中Klf4可能作為角化細(xì)胞增生抑制因子發(fā)揮作用，而在濕疹的發(fā)病中Klf4可能作為皮膚屏障相關(guān)因子參與其中。如能找到Klf4表達(dá)的上游基因，通過(guò)分子生物學(xué)的方法或是受體阻斷類藥物影響表皮中Klf4的表達(dá)將改善濕疹及銀屑病的臨床癥狀，并可通過(guò)對(duì)Klf4基因的檢測(cè)對(duì)銀屑病的發(fā)病進(jìn)行預(yù)測(cè)。

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（收稿：2016-01-04 修回：2016-01-25）

Expression of Klf4 in the lesions of the patients with psoriasis or eczema

GUO Kun，XIAO Shengxiang，GENG Songmei.
Second Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University，Xi'an 710004，China Corresponding author：GENG Songmei，E-mail：gsm312@yahoo.com

Objective：To detect the expression levels of Klf4 in the lesions of the patients with psoriasis or eczema.Methods：The expression levels of Klf4 in the lesions of psoriasis or eczema was detected by immunohistochemistry methods.Results：The average number of KIf4 positive cells in the psoriatic lesions was （346.56±24.91），which was higher than that in the normal skin（235.12±20.32），with a significant difference（P＜0.05）.The average number of KIf4 positive cells in the eczema lesions was（75.94±15.61），which was lower than that in normal skin（P＜0.05）.Conclusion：Klf4 was down-regulated in patients with eczema and was up-regulated in the patients with psoriasis.Klf4 may play a different role in the pathogenesis of different diseases.

Klf4；psoriasis；eczema

耿松梅，E-mail：gsm312@yahoo.com

國(guó)家自然科學(xué)基金資助（編號(hào)：81171490）

西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚病院，西安，710004