王　琳，邢淑芳

?

川芎嗪治療重癥急性胰腺炎的實驗研究

王琳1*，邢淑芳2

1.唐山市豐南區(qū)醫(yī)院，河北 唐山 063300；2.武安市第一人民醫(yī)院，河北 武安 056300

[摘要]目的探討川芎嗪對大鼠重癥急性胰腺炎的治療作用及其機(jī)制。方法30只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組(胰腺炎組)和川芎嗪治療組(治療組),每組10只。以L-精氨酸注射法制作大鼠重癥急性胰腺炎模型，治療組大鼠在制模成功后給予川芎嗪治療，在實驗后24 h采集標(biāo)本，比較不同組大鼠胰腺組織HE染色結(jié)果，血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)、TNF-α水平及胰腺濕/干比率。結(jié)果胰腺炎組和治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平均顯著高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療組大鼠血清淀粉酶[(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L]、IL-6[(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L]和TNF-α[(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL]均低于胰腺炎組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組大鼠胰腺濕/干比率(9.8±0.7)低于胰腺炎組(12.5±0.8)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論川芎嗪可通過降低重癥急性胰腺炎大鼠的血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平發(fā)揮治療作用。

[關(guān)鍵詞]川芎嗪；重癥急性胰腺炎；淀粉酶；白介素-6；TNF-α

0　引言

急性胰腺炎是以胰腺水腫、出血壞死、炎性細(xì)胞浸潤為特征的胰腺炎性疾病，常伴有全身各系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)綜合征以及多器官功能衰竭[1]，病死率高達(dá)20%～30%[2]。因此，如何有效治療重癥急性胰腺炎，防止并發(fā)癥的發(fā)生是目前研究的重點(diǎn)。川芎嗪是一種含有多種成分的中藥，具有抗氧化、清除氧自由基、改善微循環(huán)的作用[3]，廣泛用于治療心腦血管疾病。近年研究顯示，川芎嗪可降低血清中TNF-α等多種炎癥因子[4]，其可能在重癥急性胰腺炎過程中發(fā)揮一定的保護(hù)作用，但相關(guān)研究尚較少。本研究通過在重癥急性胰腺炎大鼠中應(yīng)用川芎嗪進(jìn)行治療，探討川芎嗪對重癥急性胰腺炎的治療效果及其可能機(jī)制，為合理治療重癥急性胰腺炎提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料

1.1實驗動物健康純種雄性Sprague-Dawley大鼠[購自北京市實驗動物養(yǎng)殖中心，許可證號：SCXK(京)2010-0010]30只，年齡3～6個月，體重300～350 g，專門實驗室飼養(yǎng)員統(tǒng)一飼養(yǎng)，隔日換墊料，室溫溫度保持20～25 ℃。

1.2試劑L-精氨酸粉末由加拿大BBI公司生產(chǎn)，分析純級。川芎嗪注射液由無錫市第七制藥廠生產(chǎn)，批號：2014012606。TNF-α測定試劑盒購自上海微蒙生命科技有限公司。

2　方法與結(jié)果

2.1三組大鼠胰腺組織HE染色結(jié)果比較采用單純隨機(jī)分組方法，將實驗動物隨機(jī)分為假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎組(胰腺炎組)、川芎嗪治療組(治療組)，每組10只。假手術(shù)組大鼠打開腹腔、翻動胰腺組織后關(guān)腹，同期給予生理鹽水腹腔注射。其他兩組大鼠均采用L-精氨酸腹腔注射法進(jìn)行重癥急性胰腺炎模型制備，將L-精氨酸粉末20 g溶解于100 mL 0.9%的氯化鈉溶液中，攪拌，直至溫度達(dá)到30 ℃左右，以NaOH調(diào)整溶液pH值至7.0，配成20%的L-精氨酸溶液。大鼠于制模前12 h禁食水。將配制好的20% L-精氨酸溶液分2次腹腔內(nèi)注射(2 000 mg/kg)，每次間隔1 h。治療組大鼠在制備模型后5 min，將川芎嗪注射液(20 mg/kg)通過股靜脈給藥1次。

所有大鼠均于實驗24 h處死，處死大鼠經(jīng)上腹正中切口入腹，觀察胰腺大體變化，取一半體、尾部胰腺組織，石蠟包埋后連續(xù)切片，厚度約5 μm，以經(jīng)粘片劑處理過的載玻片撈片，晾干后置于60 ℃烤箱烘烤4 h后行HE染色，光鏡下觀察組織學(xué)改變。

結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠胰腺組織染色切片顯示，胰腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，紋理清晰，腺泡細(xì)胞排列整齊，未見炎癥細(xì)胞浸潤及細(xì)胞破壞。胰腺炎組大鼠大體可見胰腺腺體增大、肥厚，呈暗紫色，壞死灶散在分布，壞死較重；鏡下見脂肪壞死，腺泡破壞較多，血管影較少，部分被消化，大片狀出血，腺泡及小葉結(jié)構(gòu)模糊不清。川芎嗪治療組大鼠鏡下見組織結(jié)構(gòu)紊亂，紋理交錯，腺泡細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，少量炎癥細(xì)胞浸潤(圖1)。

圖1　不同組大鼠胰腺組織HE染色結(jié)果(×200)

2.2三組大鼠血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)和TNF-α水平測定所有大鼠于實驗24 h處死后，采集靜脈血，采用人工碘比色法測定血清淀粉酶，采用平衡法測定IL-6水平。TNF-α水平測定采用ELISA法。結(jié)果顯示，胰腺炎組和川芎嗪組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平顯著高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平低于胰腺炎組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　各組大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平測定

注：*與假手術(shù)組比較，P<0.05；#與胰腺炎組比較，P<0.05

2.3三組大鼠胰腺組織濕/干比率三組大鼠于24 h處死后,分別切取一半胰腺組織于電子天平上稱重,為濕質(zhì)量；再將切取的胰腺組織于80 ℃烘干24 h至質(zhì)量不變?yōu)橹?為干質(zhì)量,計算胰腺的濕/干比率。結(jié)果顯示，胰腺炎組(12.5±0.8)及治療組(9.8±0.7)大鼠胰腺濕/干比率，均高于假手術(shù)組(3.5±0.4),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療組大鼠胰腺濕/干比率低于胰腺炎組大鼠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3　討論

重癥急性胰腺炎可引起局部和全身性的炎癥反應(yīng)，最后導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，因此，如何預(yù)防和控制重癥急性胰腺炎的發(fā)生發(fā)展是目前研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)問題。由于重癥急性胰腺炎病因多樣，病情易發(fā)生變化，單純的西醫(yī)治療和手術(shù)治療已不能有效地控制及治療本病，中藥對本病的治療作用逐漸引起人們關(guān)注[5]。目前，臨床上用于治療該病的單味中藥主要有大黃、芒硝、丹參等[6-7]，關(guān)于川芎嗪對重癥急性胰腺炎的治療作用研究尚較少。

川芎嗪的主要成分是川芎嗪多糖和皂苷,具有抗炎、抗氧化、清除自由基、抑制白細(xì)胞急驟增加、抑制血小板及血栓形成等作用[8]。烏日娜等[9]對川芎嗪治療大鼠腦損傷的效果進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，川芎嗪可通過降低炎癥因子水平發(fā)揮腦保護(hù)作用，提示川芎嗪對炎癥性疾病可能有一定的治療作用，而重癥急性胰腺炎患者往往有明顯的全身炎癥反應(yīng)。因此，本研究采用川芎嗪對重癥急性胰腺炎進(jìn)行治療。

結(jié)果顯示，治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平均低于同期未治療組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。HE染色結(jié)果也顯示，治療組大鼠胰腺組織充血程度和炎癥細(xì)胞浸潤程度好于未治療組。此外，治療組大鼠胰腺濕干比率顯著低于胰腺炎組，進(jìn)一步證實川芎嗪治療可有效減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)，對胰腺發(fā)揮一定的保護(hù)作用。有研究發(fā)現(xiàn)，川芎嗪可明顯降低黏附分子的表達(dá)、降低微血管通透性、改善微循環(huán)障礙，進(jìn)而減輕細(xì)胞損傷[10]。川芎嗪還可通過降低NF-κB mRNA表達(dá)水平，阻斷胰腺炎過程中炎癥介質(zhì)的瀑布樣級聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而減少炎癥因子的產(chǎn)生[11]，這可在一定程度上解釋川芎嗪治療減少血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平的原因。血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平是重癥急性胰腺炎的重要診斷指標(biāo)和預(yù)后指標(biāo)，其升高水平與胰腺損傷程度及并發(fā)癥發(fā)生率有一定的相關(guān)性[12-13]。本研究證實這些指標(biāo)與重癥急性胰腺炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，降低這些指標(biāo)可能有助于減少重癥急性胰腺炎并發(fā)癥的發(fā)生。

綜上所述，川芎嗪可通過抑制大鼠重癥急性胰腺炎后血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平發(fā)揮治療作用，提示在疾病早期應(yīng)及時治療，以降低炎癥反應(yīng)，減少并發(fā)癥，進(jìn)而降低死亡率。

參考文獻(xiàn)：

[1]Malik AM.Acute pancreatitis.A more common and severe complication of gallstones in males[J].Int J Health Sci,2015,9(2):141-145.

[2]李力,黃玲,徐萍,等.重癥急性胰腺炎預(yù)后危險因素分析[J].中華胰腺病雜志,2015,15(3):150-153.

[3]劉立濤,張愛民,李廣波,等.丹參川芎嗪對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺微循環(huán)及血液流變學(xué)的影響[J].中華實驗外科雜志,2012,29(8):1615-1617.

[4]Tan F,Fu W,Cheng N,et al.Ligustrazine reduces blood-brain barrier permeability in a rat model of focal cerebral ischemia and reperfusion[J].Exp Ther Med,2015,9(5):1757-1762.

[5]胡丹華,靳楠楠,程永華,等.中藥聯(lián)合腸內(nèi)營養(yǎng)治療重癥急性胰腺炎的療效研究[J].中醫(yī)臨床研究,2015,(3):70-71.

[6]楊芳勇,王麗娜,岳小強(qiáng),等.中藥大黃在急性胰腺炎治療中的臨床應(yīng)用[J].中華胰腺病雜志,2015,15(3):212-214.

[7]肖都,張永根,劉怡,等.鼻腸管與胃管注入生大黃治療重癥急性胰腺炎的療效比較[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2014,(13):2102-2104.

[8]Tan F,Fu W,Cheng N,et al.Ligustrazine reduces blood-brain barrier permeability in a rat model of focal cerebral ischemia and reperfusion[J].Exp Ther Med,2015,9(5):1757-1762.

[9]烏日娜,趙海平,胡文秀.川芎嗪對重癥急性胰腺炎大鼠腦損傷保護(hù)作用的實驗研究[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2012,19(7):761-764.

[10]Wang Q,Tang Z,Zhang W.Brain microdialysate,CSF and plasma pharmacokinetics of ligustrazine hydrochloride in rats after intranasal and intravenous administration[J].Biopharm Drug Dispos,2013,34(7):417-422.

[11]關(guān)瑞云,王永玲,邱素清,等.川芎嗪對新生兒缺氧缺血性腦病一氧化氮和腫瘤壞死因子-α及腦型肌酸激酶同工酶的影響[J].中華實用診斷與治療雜志,2012,26(9):905-906.

[12]黃平,王波,杜治祥,等.空腹C肽、血尿淀粉酶檢測對膿毒癥繼發(fā)胰腺功能損傷的診斷價值[J].中國臨床研究,2015,28(5):659-660.

[13]鄭建鋒,劉龍飛,周賢.急性胰腺炎臨床評分研究進(jìn)展[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2014(4):657-659.

收稿日期：2015-11-03

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201607013

Experimental study of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis

WANG Lin1*，XING Shu-fang2

(1.Fengnan District Hospital,Tangshan 063300,China;2.First People′s Hospital of Wu′an City,Wu′an 056300,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect and the mechanism of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis (SAP) in rats.MethodsThirty SD rats were randomly divided into sham operation group (n=10),SAP group (n=10),and ligustrazine treatment group (n=10).L-aginine injection method was used to manufacture SAP model in rats.Ligustrazine was used to treat SAP for 24 h in rats.The pathological change of pancreatic tissue,serum amylase level,serum interleukin-6 level,TNF-α level and wet/dry ratio among different groups in rats were compared.ResultsSerum amylase level,serum interleukin-6 level and TNF-α level in rats of SAP group and ligustrazine treatment group were significantly higher than those of sham operation group (P<0.05).Serum amylase level [(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L],serum interleukin-6 level [(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L] and TNF-α level [(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL] of ligustrazine treatment group were lower than those of SAP group,there being significant differences(P<0.05).The wet/dry ratio of ligustrazine treatment group (9.8±0.7) was less than that in SAP group (12.5±0.8),there being significant difference.ConclusionLigustrazine is effective in treating severe acute pancreatitis in rats by decreasing the level of serum amylase,interleukin-6 and TNF-α.

Key words：Ligustrazine;Severe acute pancreatitis;Amylase;Interleukin-6;TNF-α