姜其鈞，龔志剛，李志剛，丁世芳

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心血管內(nèi)科，武漢 430070)

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Akt-eNOS信號(hào)通路介導(dǎo)去甲腎上腺素調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員*

姜其鈞，龔志剛，李志剛，丁世芳△

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心血管內(nèi)科，武漢 430070)

目的探討去甲腎上腺素(NE)對(duì)小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)增殖能力、遷移能力及從骨髓動(dòng)員的影響，并分析其分子機(jī)制。 方法取8周大C57小鼠隨機(jī)分為3組，各5只，分別為：空白對(duì)照組(皮下注射生理鹽水，無(wú)手術(shù))，模型組(皮下注射生理鹽水，左下肢肢體缺血)，NE組(皮下注射NE 100 μmol/100 μL，左下肢肢體缺血)。采用小鼠左下肢股動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)制備肢體缺血模型，微滲泵持續(xù)泵入NE，流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠骨髓、外周血和脾臟中EPCs；培養(yǎng)人外周血EPCs，用NE刺激，檢測(cè)EPCs的增殖和遷移能力，以及Akt-eNOS信號(hào)通路的激活情況。結(jié)果NE能夠促進(jìn)肢體缺血小鼠骨髓EPCs的動(dòng)員，增加外周血和脾臟的EPCs，NE組與模型組比較，骨髓[(3.271±0.772)%vs.(1.320±0.256)%]、外周血[(0.261±0.041)%vs.(0.110±0.028)%]和脾臟[(4.671±0.345)%vs.(1.880±0.0.381)%]EPCs均增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。NE能促進(jìn)EPCs的增殖和遷移能力，且能夠呈濃度依賴性地激活EPCs內(nèi)的Akt-eNOS信號(hào)通路。結(jié)論NE通過(guò)Akt-eNOS促進(jìn)EPCs的遷移和增殖，以及在小鼠骨髓中的動(dòng)員。

內(nèi)皮祖細(xì)胞；去甲腎上腺素；增殖能力；遷移能力；動(dòng)員

骨髓中有豐富的神經(jīng)纖維分布，包括交感神經(jīng)末梢[1]。在燙傷、外傷或肢體缺血的情況下，體內(nèi)交感神經(jīng)的活動(dòng)程度會(huì)持續(xù)增強(qiáng)1～2周，并引起神經(jīng)遞質(zhì)的持續(xù)釋放[2]。研究表明，在上述情況下，骨髓中的內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)也被大量動(dòng)員到血液中，參與各種損傷處血管的新生或內(nèi)皮的修復(fù)[3]。而EPCs的釋放與骨髓中交感神經(jīng)活動(dòng)程度的關(guān)系目前仍不是特別清楚。交感神經(jīng)參與人體對(duì)寒冷的適應(yīng)，以及腫瘤發(fā)生等多個(gè)病理、生理過(guò)程[4]。骨髓中的交感神經(jīng)纖維能夠向神經(jīng)周圍分泌大量的神經(jīng)遞質(zhì)，如去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺等。其中NE能夠刺激人體棕色脂肪細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞釋放血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)等細(xì)胞因子[5]，這些細(xì)胞因子在人體血管生成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。既往的研究還發(fā)現(xiàn)，這些神經(jīng)遞質(zhì)能夠參與調(diào)節(jié)許多血液細(xì)胞的生成，如單核細(xì)胞、紅細(xì)胞及髓細(xì)胞的生成，促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)等細(xì)胞因子的釋放，調(diào)節(jié)部分祖細(xì)胞的動(dòng)員[6]。而本文的研究重點(diǎn)是探討交感神經(jīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)NE是否能夠參與調(diào)節(jié)EPCs的動(dòng)員，以及其分子機(jī)制。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物來(lái)源8周齡C57小鼠15只，均由湖北省疾病預(yù)防控制中心動(dòng)物房提供。

1.2儀器與試劑Histopaque-1083分離液和Histopaque 1077淋巴細(xì)胞分離液均購(gòu)自美國(guó)Amersham Biosciences公司；VEGF、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)均購(gòu)于英國(guó)Peprotech 公司；10%戊巴比妥、四甲基偶氮唑鹽(MTT)、0.25%胰酶、NE均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的抗小鼠CD34抗體、藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的抗小鼠Flk-1抗體和藻藍(lán)蛋白(APC)標(biāo)記的抗小鼠CD45抗體均購(gòu)自美國(guó)BD Biosciences公司；M199培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；鼠抗人磷酸化Akt IgG抗體、鼠抗人Akt IgG抗體、鼠抗人eNOS IgG抗體均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling technology公司；鼠抗人磷酸化eNOS IgG抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。24孔Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；MACSQuant流式分析儀購(gòu)自德國(guó)Bergisch Gladbach公司；1002型號(hào)Alzet微量注射泵購(gòu)自美國(guó)Alzet公司。

1.3方法

1.3.1分組和肢體缺血模型制備取8周大C57小鼠，隨機(jī)分為3組，各5只，分別為：空白對(duì)照組(皮下注射生理鹽水，無(wú)手術(shù))，模型組(皮下注射生理鹽水，左下肢肢體缺血)，NE注射手術(shù)組(NE組，皮下注射NE 100 μmol/100 μL，左下肢肢體缺血)，根據(jù)分組分別采取手術(shù)和藥物干預(yù)。肢體缺血模型小鼠均采用腹腔注射10%戊巴比妥麻醉，切開(kāi)左下肢前側(cè)皮膚，顯微鏡下分離和結(jié)扎左下股動(dòng)脈的近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)，剪斷股動(dòng)脈及其分支，消毒后縫合皮膚，于小鼠背側(cè)皮下植入裝有藥物的Alzet微量注射泵(含NE 100 μmol/100 μL或生理鹽水)，繼續(xù)于無(wú)特殊病原體(SPF)的環(huán)境飼養(yǎng)1周。

1.3.2外周血、骨髓和脾臟EPCs的流式分析將手術(shù)干預(yù)后的小鼠飼養(yǎng)1周后處死，采集外周血、脾臟和骨髓組織，使用Histopaque-1083分離液分離小鼠外周血、脾臟組織勻漿和骨髓細(xì)胞沖洗液中的單個(gè)核細(xì)胞，加入FITC標(biāo)記的抗小鼠CD34抗體，PE標(biāo)記的抗小鼠Flk-1抗體和APC標(biāo)記的抗小鼠CD45抗體，冰上孵育30 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍，4%甲醛固定，MACSQuant流式分析儀計(jì)數(shù)樣品中CD45-/CD34+/Flk-1+細(xì)胞數(shù)量。

1.3.3人EPCs的分離與培養(yǎng)采集健康志愿者的外周血，按1∶2的比例加入PBS稀釋，用移液器緩慢地將標(biāo)本移至Histopaque 1077淋巴細(xì)胞分離液上方，400×g離心30 min，取中間層單核細(xì)胞，PBS清洗2遍，加入含10%FBS、10 ng/mL VEGF、10 ng/mL bFGF的M199培養(yǎng)液，將標(biāo)本稀釋成5×106/mL，放入恒溫孵箱(37 ℃、5% CO2)中培養(yǎng)，4 d后洗掉未貼壁細(xì)胞，每3天換1次培養(yǎng)液，于第7天再進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.3.4人EPCs增殖能力評(píng)價(jià)采用MTT比色評(píng)價(jià)人EPCs的增殖能力。將人EPCs以每孔1×103個(gè)細(xì)胞的密度種于96孔板，加入NE或其他藥物干預(yù)72 h，加入MTT 37 ℃孵育4 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)反應(yīng)細(xì)胞數(shù)量450 nm波長(zhǎng)處的吸光度值(A450值)。

1.3.5人EPCs遷移能力檢測(cè)采用Transwell小室評(píng)價(jià)人EPCs的遷移能力。將人EPCs以每孔2×104個(gè)細(xì)胞的密度種植于24孔板Transwell小室的上室，下室加入含50 μg/L VEGF的培養(yǎng)液，以未加入藥物干預(yù)的細(xì)胞為對(duì)照組，1 h后將不同濃度NE加于上室，恒溫孵箱(37 ℃、5% CO2)孵育24 h，4%多聚甲醛固定細(xì)胞，棉簽擦去隔膜上側(cè)的細(xì)胞，浸入結(jié)晶紫染色3 min，清水洗去結(jié)晶紫，在高倍光學(xué)顯微鏡(×100)下計(jì)數(shù)隔膜下側(cè)6個(gè)隨機(jī)視野的人EPCs數(shù)量。

1.3.6蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)檢測(cè)在藥物干預(yù)后的人EPCs中加入蛋白提取裂解液，于4 ℃裂解細(xì)胞30 min，低溫離心機(jī)(4 ℃ 8 000×g)離心30 min，去除沉淀，加入上樣緩沖液，煮沸10 min，于12%十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠中電泳，轉(zhuǎn)入硝酸纖維素膜，5%無(wú)脂牛奶封閉1 h，分別加入鼠抗人磷酸化eNOS IgG抗體、鼠抗人eNOS IgG抗體、鼠抗人磷酸化Akt IgG抗體和鼠抗人Akt IgG抗體，4 ℃孵育12 h，用含吐溫-20的Tris緩沖生理鹽水(TBST)洗3次，羊抗鼠二抗室溫下孵育1 h，電化學(xué)發(fā)光液(ECM)顯影，采用Image-pro plus6.0軟件分析信號(hào)強(qiáng)度。

2　結(jié)　果

2.1各組小鼠骨髓、外周血及脾臟EPCs含量比較采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血、骨髓和脾臟中EPCs的表達(dá)，結(jié)果顯示：模型組與空白對(duì)照組比較，外周血[(0.110±0.028)%vs.(0.040±0.009)%]、骨髓[(1.320±0.256)%vs. (0.550±0.172)%]和脾臟[(1.880±0.038 1)%vs. (0.610±0.256%)]EPCs的數(shù)量均上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；NE組與模型組比較，外周血[(0.261±0.041)%vs. (0.110±0.028)%]、骨髓[(3.271±0.772)%vs. (1.320±0.256%)]和脾臟[(4.671±0.345%vs. (1.880±0.038 1%)]EPCs的數(shù)量也均上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明NE進(jìn)一步促進(jìn)EPCs動(dòng)員。見(jiàn)圖1。

*：P<0.01，與空白對(duì)照組比較；#：P<0.01，與模型組比較。

圖1骨髓、外周血和脾臟的EPCs流式細(xì)胞圖像及各組EPCs含量比較

2.2NE刺激EPCs的增殖和遷移于培養(yǎng)至第8天的人EPCs培養(yǎng)液中加入NE，使其濃度為10 μmol/L，3 d后MTT法檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量，結(jié)果顯示：NE組人EPCs細(xì)胞增殖率為對(duì)照組的(307.1±97.7)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)圖2A。取培養(yǎng)至第8天的人EPCs進(jìn)行遷移試驗(yàn)，在上室中加入NE，使其濃度為1 μmol/L，24 h后取出Transwell小室，鏡下計(jì)數(shù)隔膜下每個(gè)高倍視野(×100)的EPCs數(shù)量，結(jié)果顯示：NE組與對(duì)照組比較，每高倍視野EPCs計(jì)數(shù)明顯增加[(124±12)vs.(57±14)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)圖2B。結(jié)晶紫染色遷移入下室的EPCs圖像見(jiàn)圖3。

A：增殖能力；B：遷移能力；*：P<0.01，與空白對(duì)照組比較。

圖2對(duì)照組與NE組人EPCs的增殖與遷移能力比較

A：對(duì)照組；B：NE組。

圖3遷移入下室的EPCs圖像(結(jié)晶紫染色×100)

*：P<0.01，與對(duì)照組比較。

圖4不同濃度NE激活A(yù)kt比較

*：P<0.01，與對(duì)照組比較。

圖5不同濃度NE激活eNOS比較

2.3Akt-eNOS信號(hào)通路的激活Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示：NE能夠劑量依賴性地激活A(yù)kt-eNOS信號(hào)通路。在人EPCs的培養(yǎng)液中分別加入濃度0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L的NE，結(jié)果顯示：以上各NE濃度下EPCs的磷酸化Akt相對(duì)于對(duì)照組分別為(385.7±58.5)%、(756.6±123.9)%、(638.2±271.9)%和(493.3±41.4)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖4。磷酸化eNOS相對(duì)于對(duì)照組分別為(97.0±14.7)%、(119.7±11.8)%、(199.0±49.7)%和(131.3±30.2)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖5。

3　討　論

本研究結(jié)果顯示，NE能夠顯著地刺激EPCs的增殖、遷移能力，促進(jìn)肢體缺血小鼠骨髓中EPCs的動(dòng)員，增加外周血EPCs水平及EPCs在脾臟的沉積，且NE主要通過(guò)Akt-eNOS信號(hào)通路介導(dǎo)這種作用。

EPCs現(xiàn)已經(jīng)被用于創(chuàng)傷修復(fù)、缺血性疾病的治療和組織工程學(xué)領(lǐng)域[7]。有研究報(bào)道，接受人EPCs治療的小鼠下肢血流量明顯增加，缺血肢體成活率明顯提高[8]。用動(dòng)物缺血模型行自體骨髓EPCs體外擴(kuò)增回輸，發(fā)現(xiàn)缺血部位再灌注和側(cè)支循環(huán)增加。EPCs對(duì)缺血性心血管疾病有明顯的治療作用，以骨髓擴(kuò)增EPCs對(duì)心肌梗死患者做冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射，對(duì)比發(fā)現(xiàn)骨髓EPCs治療后心功能明顯改善[9]。

在生理?xiàng)l件下，外周循環(huán)中EPCs含量非常少，僅占全部單核細(xì)胞的0.03%～0.06%。骨髓是EPCs的主要來(lái)源地，在各種血管損傷、缺血、燒傷、創(chuàng)傷或者細(xì)胞因子刺激的作用下，EPCs可從骨髓中動(dòng)員進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，遷移到損傷內(nèi)皮處，修復(fù)損傷血管，或者新生出滋養(yǎng)血管。EPCs的動(dòng)員及功能受到如高血壓、吸煙、高血脂和高血糖等多種因素影響[10]。既往認(rèn)為，局部缺血是介導(dǎo)EPCs動(dòng)員的主要信號(hào)。而現(xiàn)在的研究發(fā)現(xiàn)，除此之外，許多生理激素如雌激素、促紅細(xì)胞生成素等也參與調(diào)節(jié)EPCs的動(dòng)員及其功能。最近的研究發(fā)現(xiàn)，骨髓中的自主神經(jīng)末梢在骨髓各種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著非常重要的作用。如D2受體被多巴胺激活后能起到抑制EPCs動(dòng)員的作用[11]。既往研究還發(fā)現(xiàn)，NE能夠顯著增加體外培養(yǎng)的骨髓造血細(xì)胞的增殖率和細(xì)胞內(nèi)RNA的合成[12]。而本研究發(fā)現(xiàn)，組織中生理濃度的NE(0.023～7.3 μmol/L)能夠明顯刺激EPCs的增殖和遷移能力。

NE在體內(nèi)的分泌呈周期性變化，是人體晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)最重要的物質(zhì)之一[13]。而最近的研究發(fā)現(xiàn)，EPCs在體內(nèi)分泌的周期性和高峰與交感神經(jīng)活動(dòng)的周期和高峰嚴(yán)格吻合[14]。這說(shuō)明NE調(diào)節(jié)EPCs的動(dòng)員可能是人體規(guī)律性的全身修復(fù)活動(dòng)的一部分。并且，在缺血、燒傷、創(chuàng)傷等許多疾病情況下，交感神經(jīng)同樣被顯著地激活。與此同時(shí)，EPCs的動(dòng)員也明顯增加。因此，無(wú)論在生理還是病理狀態(tài)下，NE均是EPCs動(dòng)員的重要調(diào)節(jié)因子。這可能也是創(chuàng)傷和缺血性疾病時(shí)，EPCs可迅速動(dòng)員的機(jī)制之一。

EPCs內(nèi)有多條活躍的信號(hào)傳遞通道。既往研究發(fā)現(xiàn)，NE能夠通過(guò)激活A(yù)kt信號(hào)分子和eNOS信號(hào)分子，促進(jìn)一氧化氮(NO)的產(chǎn)生，進(jìn)一步激活造血細(xì)胞的增殖和遷移能力[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，NE主要通過(guò)Akt-eNOS信號(hào)分子刺激人EPCs的增殖和遷移能力，并進(jìn)一步促進(jìn)肢體缺血小鼠EPCs的動(dòng)員。許多在棕色脂肪細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn)，NE主要通過(guò)α1和β3腎上腺受體激活細(xì)胞內(nèi)的Akt-eNOS信號(hào)通路。而NE是通過(guò)何種受體激活EPCs，還需要進(jìn)一步的研究確定。

綜上所述，本研究結(jié)果提示：NE能夠通過(guò)Akt-eNOS信號(hào)通路調(diào)節(jié)EPCs的增殖和遷移能力，以及EPCs在骨髓中的動(dòng)員，增加外周血EPCs的數(shù)量和在靶器官的沉積，為進(jìn)一步揭示神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)血管修復(fù)細(xì)胞的功能提供了理論依據(jù)。

[1]Katayama Y，Battista M，Kao WM，et al．Signals from the sympathetic nervous system regulate hematopoietic stem cell egress from bone marrow[J]．Cell，2006，124(2)：407-421.

[2]Penn A，Mohr A，Shah S，et al．Dose-response relationship between norepinephrine and erythropoiesis:evidence for a critical threshold[J]．J Surg Res，2010，163(2)：85-90．

[3]Tang Y，Vater C，Jacobi A，et al．Salidroside exerts angiogenic and cytoprotective effects on human bone marrow-derived endothelial progenitor cells via Akt/mTOR/p70S6K and MAPK signalling pathways[J]．Br J Pharmacol，2014，171(9)：2440-2456.

[4]Tilan J，Kitlinska J．Sympathetic Neurotransmitters and Tumor Angiogenesis-Link between Stress and Cancer Progression[J]．J Oncol，2010(2010)：539706.

[5]Udo H，Hamasu K，F(xiàn)uruse M，et al．VEGF-induced antidepressant effects involve modulation of norepinephrine and serotonin systems[J]．Behav Brain Res，2014，275(9)：107-113.

[6]Spiegel A，Shivtiel S，Kalinkovich A，et al．Catecholaminergic neurotransmitters regulate migration and repopulation of immature human CD34+cells through Wnt signaling[J]．Nat Immunol，2007，8(10)： 1123-1131.

[7]Herrmann M，Verrier S，Alini M．Strategies to Stimulate Mobilization and Homing of Endogenous Stem and Progenitor Cells for Bone TissueRepair[J]．Front Bioeng Biotechnol，2015(3)：79．

[8]Koiwaya H，Sasaki K，Ueno T，et al．Augmented neovascularization with magnetized endothelial progenitor cells in rats with hind-limb ischemia[J]．J Mol Cell Cardiol，2011，51(1)：33-40.

[9]Gaffey AC，Chen MH，Venkataraman CM，et al．Injectable shear-thinning hydrogels used to deliver endothelial progenitor cells,enhance cell engraftment,and improve ischemic myocardium[J]．J Thorac Cardiovasc Surg，2015，150(5)，1268-1277.

[10]Umemura T，Soga J，Hidaka T，et al．Aging and hypertension are independent risk factors for reduced number of circulating endothelial progenitor cells[J]．Am J Hypertens，2008，21(11)：1203-1209.

[11]Henrich D，Hahn P，Wahl M，et al．Serum derived from multiple trauma patients promotes the differentiation of endothelial progenitor cells in vitro:possible role of transforming growth factor-beta1 and vascular endothelial growth factor165[J]．Shock，2004，21(1)：13-16.

[12]Récalde A，Richart A，Guérin C，et al．Sympathetic nervous system regulates bone marrow-derived cell egress through endothelial nitric oxide synthase activation:role in postischemic tissue remodeling[J]．Arterioscler Thromb Vasc Biol，2012，32(3)：643-653.

[13]Di Stefano R，Barsotti M，F(xiàn)elice F，et al．Smoking and endothelial progenitor cells:a revision of literature[J]．Curr Pharm Des，2010，16(23)：2559-2566.

[14]Cheng J，Cui R，Chen C，et al．Oxidized low-density lipoprotein stimulates p53-dependent activation of proapoptotic Bax leading to apoptosis of differentiated endothelial progenitor cells[J]．Endocrinology，2007，148(5)：2085-2094.

[15]Chakroborty D，Sarkar C，Basu B，et al．Catecholamines regulate tumor angiogenesis[J]．Cancer Res，2009，69(9)：3727-3730.

Akt-eNOS signal pathway for mediating norepinephrine regulating mobilization of endothelial progenitor cells*

JiangQijun,GongZhigang，LiZhigang，DingShifang

(DepartmentofCardiology,WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryRegion,Wuhan,Hubei430070,China)

ObjectiveTo investigate the effect of norepinephrine (NE) on the proliferation and migration capacity of endothelial progenitor cells (EPCs),and bone marrow mobilization and to analyze its molecular mechanism.MethodsThe 8-week old C57 mice were taken and randomly divided into 3 groups,5 cases in each group:the blank control group(subcutaneous injection of normal saline without operaion),model group(subcutaneous injection of normal saline and ischemia in left lower extremity) and NE group(subcutaneous injection of NE 100 μmol/100 μL and ischemia in left lower extremity).The limb ischemia model was prepared by adopting the femoral arterial ligation in mouse left lower extremity,then NE was continuously pumped by the micro-osmotic pump.The EPCs contents from bone marrow,peripheral blood and spleen were assayed with the flow cytometric analyzer;human peripheral blood EPCs were cultured and stimulated by NE.The proliferation and migration capacity,and the activation situation of Akt and eNOS signal pathway were detected.ResultsNE could promote the mobilization of bone marrow EPCs in limb ischemia mice,increased the EPCs quantity of peripheral blood and spleen,comparing the NE group with the model group,the EPCs quantity was increased for bone marrow[(3.271±0.772)%vs.(1.320±0.256)%],peripheral circulation[(0.261±0.041)%vs.(0.110±0.028)%] and spleen[(4.671±0.345)%vs.(1.880±0.0.381)%],the differences were statistically significant(P<0.01).NE could promote the proliferation and migration capacity,moreover could activate the Akt-eNOS signal pathway in EPCs with a dose dependent manner.ConclusionNE could promote the proliferation and migration of EPCs and mouse bone marrow mobilization via the Akt-eNOS signal pathway.

endothelial progenitor cells；norepinephrine；proliferation capacity；migration capacity；mobilization

論著·基礎(chǔ)研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.19.004

湖北省自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(2014CFC1055)；湖北省自然科學(xué)基金重點(diǎn)資助項(xiàng)目(2014CAF066)。作者簡(jiǎn)介：姜其鈞(1982-)，主治醫(yī)師，博士，主要從事冠心病的診治研究?！?/p>

，E-mail:DingSFMD@gmail.com。

R329

A

1671-8348(2016)19-2602-04

2015-12-28

2016-02-26)