張 燕，張洪斌

(1.海南熱帶海洋學(xué)院熱帶生物與農(nóng)學(xué)院，海南三亞 572022；2.海南熱帶海洋學(xué)院熱帶生態(tài)環(huán)境保護(hù)學(xué)院，海南三亞 572022)

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假蒟不同部位5種次生代謝產(chǎn)物含量測(cè)定

張 燕1，張洪斌2

(1.海南熱帶海洋學(xué)院熱帶生物與農(nóng)學(xué)院，海南三亞 572022；2.海南熱帶海洋學(xué)院熱帶生態(tài)環(huán)境保護(hù)學(xué)院，海南三亞 572022)

[目的]建立假蒟不同部位總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚和總鞣質(zhì)含量的測(cè)定方法。[方法]通過NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法測(cè)定總黃酮含量；通過溴甲酚綠酸性染料比色法測(cè)定總生物堿含量；通過香草醛-冰醋酸酸性染料比色法測(cè)定總皂苷含量；通過Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定總酚含量；通過磷鉬鎢酸-干酪素比色法測(cè)定總鞣質(zhì)含量。[結(jié)果]蘆丁平均加樣回收率為98.11%，RSD=0.59%，假蒟葉、莖、根中總黃酮含量分別為1.18%、0.33%、0.25%；鹽酸小檗堿平均加樣回收率為99.62%，RSD=1.52%，假蒟葉、莖、根中總生物堿含量分別為0.19%、0.03%、0.01%；人參皂苷Re平均加樣回收率為99.21%，RSD=1.06%，假蒟葉、莖、根中總皂苷含量分別為4.33%、1.71%、4.13%；沒食子酸平均加樣回收率為97.95%，RSD=0.88%，假蒟葉、莖、根中總酚含量分別為2.42%、1.08%、0.68%；沒食子酸平均加樣回收率為97.92%，RSD=3.14%，假蒟葉、莖、根中總鞣質(zhì)含量分別為1.69%、1.21%、0.72%。[結(jié)論]這5種方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、重復(fù)性好，可以用作假蒟中總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚和總鞣質(zhì)含量的測(cè)定。

假蒟；不同部位；次生代謝產(chǎn)物；含量測(cè)定

假蒟(PipersarmentosumRoxb.)是胡椒科胡椒屬的植物[1]，為多年生匍匐草本禿凈灌木或亞灌木，分布于印度、中國、越南、馬來西亞、菲律賓、印度尼西亞、巴布亞新幾內(nèi)亞等國。在我國主要分布于南部省區(qū)(如兩廣、海南、福建、貴州、云南及西藏南部)，生長于海拔1 400 m的地區(qū)，喜生于村邊、路旁、村前屋后、深山溝谷、園林或樹林的半陰潮濕處[1]。假蒟具有多種功效，如行氣止痛、祛風(fēng)散寒、消腫等，可治療風(fēng)濕痹痛、瘧疾、脘腹脹滿、跌打損傷、泄瀉痢疾等[2-3]。假蒟還可食用，可做成假蒟牛肉餅、假蒟三角肉粽，味道鮮美。目前已有的報(bào)道對(duì)假蒟的研究主要集中在揮發(fā)性成分[4-5]、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[6]、生藥學(xué)鑒別[7]、藥理作用[8-10]等方面，鮮見對(duì)其次生代謝產(chǎn)物含量研究。筆者對(duì)假蒟不同部位的總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)5種次生代謝產(chǎn)物的含量進(jìn)行了測(cè)定，旨在為假蒟的藥用質(zhì)量控制及其進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1試材。假蒟采自海南省五指山市市郊，由熱帶生物與農(nóng)學(xué)院的陳道運(yùn)老師鑒定為假蒟PipersarmentosumRoxb.。將處于營養(yǎng)生長期的假蒟全草洗凈晾干，分為葉、根、莖幾部分，置于烘干箱60 ℃下烘干至恒重，粉碎并過40目篩，置于干燥器中備用。

1.1.2主要儀器。SSY-電熱恒溫水浴鍋(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；BP211D電子天平(德國Sartorius公司)；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)；UV-2100雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司)。

1.1.3試劑。蘆丁對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-200707)；鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713-200910)；沒食子酸對(duì)照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號(hào)110831-200302)；人參皂苷Re對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110754-200822)；乙醇、石油醚(60～90 ℃)、正丁醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、溴甲酚綠、氯仿、濃氨水、香草醛、甲醇、冰醋酸、高氯酸、鎢酸鈉、鉬酸鈉、磷酸、濃鹽酸、硫酸鋰、雙氧水、磷鉬鎢酸等試劑均為分析純，干酪素(化學(xué)純)，重蒸水。

1.2方法

1.2.1對(duì)照品溶液制備。

1.2.1.1總黃酮。準(zhǔn)確稱取10 mg蘆丁對(duì)照品，加適量30%乙醇，放在水浴中加熱溶解，待冷后用30%乙醇定容至50 mL，搖勻備用，配制成0.2 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2.1.2總生物堿。準(zhǔn)確稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品5.00 mg，置于25 mL棕色容量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成0.20 mg/mL的對(duì)照品溶液，冰箱貯存，備用。

1.2.1.3總皂苷。準(zhǔn)確稱取5.0 mg人參皂苷Re對(duì)照品，倒入10 mL棕色容量瓶內(nèi)，用甲醇溶解并定容至刻度，得到0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液，冰箱貯存，備用。

1.2.1.4總酚。準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的沒食子酸對(duì)照品25 mg，用蒸餾水溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中，得濃度為0.5 mg/mL對(duì)照品溶液。

1.2.1.5總鞣質(zhì)。準(zhǔn)確稱取25 mg沒食子酸對(duì)照品，倒入50 mL棕色量瓶內(nèi)，用水溶解并稀釋至刻度，得到0.5 mg/mL對(duì)照品溶液。再精密量取5 mL對(duì)照品溶液，滴入50 mL棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，配成0.05 mg/mL對(duì)照品溶液。

1.2.2供試品溶液制備。

1.2.2.1總黃酮。準(zhǔn)確稱取各0.6 g的假蒟葉、根、莖粉末，各加95%乙醇溶液在70 ℃恒溫水浴鍋中提取2.5、2.0 h，抽濾，分別將2次濾液合并減壓濃縮至浸膏，浸膏加60 ℃熱水?dāng)嚢枞芙?，水溶液用等量石油醚萃?次，石油醚層減壓濃縮，回收石油醚，水層部分再用等量正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液減壓濃縮至浸膏，分別用30%乙醇將浸膏溶解定容至100 mL棕色容量瓶中。

1.2.2.2總生物堿。準(zhǔn)確稱取各2.00 g的假蒟葉、根、莖粉末，倒入3個(gè)50 mL磨口錐形瓶中，各加入氯仿30 mL、濃氨水2 mL，振搖3 min，放置過夜(16 h以上)，抽濾，將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置2 h，分取氯仿層，水浴蒸干溶劑，殘?jiān)尤脒m量無水乙醇使之溶解，轉(zhuǎn)移并定容于10 mL容量瓶中，作為備用供試品溶液。

1.2.2.3總皂苷。準(zhǔn)確稱取各1.00 g的假蒟葉、根、莖粉末，置于3個(gè)已經(jīng)標(biāo)號(hào)的三角錐形瓶中，加入60%乙醇50 mL，浸泡10 h，轉(zhuǎn)移至索氏提取器中，于70 ℃下回流2次，每次3 h。收集2次濾液，并減壓濃縮得浸膏。加30 mL 60 ℃蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移置分液漏斗，加正丁醇萃取3次，每次30 mL，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇得浸膏，用甲醇溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中，作為待測(cè)液。

1.2.2.4總酚。分別準(zhǔn)確稱取假蒟的根、莖、葉粉末各2.0 g，置于100 mL帶塞錐形瓶中，加入60%乙醇溶液約30 mL，在80 ℃水浴1 h后，過濾，濾液減壓濃縮至近干，然后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中并用蒸餾水定容至刻度作為待測(cè)液。

1.2.2.5總鞣質(zhì)。準(zhǔn)確稱取各2 g的假蒟葉、根、莖粉末，倒入3個(gè)250 mL棕色量瓶內(nèi)，分別加150 mL蒸餾水，靜置過夜，在振蕩器上震蕩30 min，待冷，加水稀釋至刻度，混勻，靜置，過濾，倒掉50 mL初濾液，再精密量取20 mL續(xù)濾液，倒入100 mL棕色量瓶內(nèi)，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，作為備用供試品溶液。

1.2.3最大吸收波長確定。

1.2.3.1總黃酮。準(zhǔn)確量取3 mL蘆丁對(duì)照品溶液滴入10 mL 容量瓶內(nèi)，加2 mL 30%乙醇，再準(zhǔn)確滴入0.3 mL 5% NaNO2溶液，搖勻，靜置6 min，再滴入0.3 mL 10% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6 min，再滴入4 mL 1 mol/L NaOH溶液，加水0.4 mL，混勻，靜置15 min，以隨行試劑做空白對(duì)照，在300～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全程掃描，確定最大吸收波長。

1.2.3.2總生物堿。在分液漏斗中精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1 mL，加入pH 7.6的溴甲酚綠磷酸緩沖溶液2.0 mL，搖勻，加入10 mL氯仿萃取，振搖1 min后，靜置1 h，分取氯仿層，以隨行試劑做空白對(duì)照，在200～600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全程掃描，確定最大吸收波長。

1.2.3.3總皂苷。準(zhǔn)確吸取人參皂苷Re對(duì)照品溶液0.5 mL置于10 mL具塞試管中，順次加入剛配制的0.2 mL 5%香草醛冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸溶液，加塞，搖勻，放入60 ℃水浴加熱15 min，拿出，置冰水浴中冷卻3 min，加冰醋酸稀釋至刻度，搖勻，用隨行試劑做空白對(duì)照，在300～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全程掃描，確定最大吸收波長。

1.2.3.4總酚、總鞣質(zhì)。準(zhǔn)確吸取2 mL沒食子酸對(duì)照品溶液，滴入25 mL棕色容量瓶內(nèi)，加蒸餾水稀釋至10 mL，加入1 mL 福林試劑，搖勻后再加入2 mL 20%碳酸鈉溶液，75 ℃水浴10 min，冷卻并定容至25 mL，室溫放置30 min。用隨行試劑做空白對(duì)照，在490～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全程掃描，確定最大吸收波長。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

1.2.4.1總黃酮。準(zhǔn)確量取0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL 的0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液分別滴入已標(biāo)號(hào)的6只10 mL棕色容量瓶內(nèi)，各加30%乙醇使成5 mL。分別滴入0.3 mL 5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6 min，再滴入0.3 mL 10%Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6 min，再加4 mL 1 mol/L NaOH溶液，加0.4 mL蒸餾水，搖勻，靜置15 min，用隨行試劑做空白對(duì)照，在510 nm處測(cè)定吸光度。以標(biāo)樣濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.2總生物堿。精密吸取濃度為0.20 mg/mL鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置于分液漏斗中，加入pH 7.6 溴甲酚綠磷酸緩沖溶液2.0 mL，氯仿10 mL，密塞，劇烈振搖2 min，再靜置2 h，分取氯仿層，用隨行試劑做空白對(duì)照，在420 nm處測(cè)定吸光度。以標(biāo)樣濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.3總皂苷。精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL的0.5 mg/mL人參皂苷Re對(duì)照品溶液分別滴入10 mL棕色容量瓶內(nèi)，再分別滴入甲醇稀釋至刻度，搖勻，各準(zhǔn)確吸取1.0 mL 置于10 mL具塞試管中，順次加入剛配制的0.2 mL 5%香草醛冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸溶液，加塞，搖勻，放入60 ℃水浴加熱15 min，拿出，置冰水浴中冷卻3 min，加冰醋酸稀釋至刻度，搖勻，用隨行試劑做空白對(duì)照，于544 nm處測(cè)定各吸光度。以人參皂苷Re濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.4總酚。精密量取0.5 mg/mL沒食子酸對(duì)照品溶液0、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL分別置于25 mL棕色容量瓶中，用蒸餾水稀釋至10 mL，各加入1 mL福林試劑，搖勻后再加入2 mL 20%碳酸鈉溶液，75 ℃水浴10 min，冷卻并定容至25 mL，用隨行試劑做空白對(duì)照。30 min后，在765 nm處測(cè)定吸光度。用沒食子酸濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.5總鞣質(zhì)。準(zhǔn)確吸取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL的0.05 mg/mL沒食子酸對(duì)照品溶液分別滴入25 mL棕色量瓶內(nèi)，再分別滴入1 mL磷鉬鎢酸試液，各加12.0、11.5、11.0、10.0、9.0、8.0 mL的蒸餾水再加29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。用隨行試劑做空白對(duì)照。30 min后，在765 nm處測(cè)定吸光度。以沒食子酸濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5精密度試驗(yàn)。

1.2.5.1總黃酮。準(zhǔn)確吸取總黃酮供試品液2 mL于10 mL棕色容量瓶中，加3 mL 30%乙醇，操作按“1.2.4.1”進(jìn)行，重復(fù)測(cè)定5次。

1.2.5.2總生物堿精密度試驗(yàn)。精密吸取總生物堿供試品溶液2 mL，置于分液漏斗中，操作按“1.2.4.2”進(jìn)行，重復(fù)測(cè)定5次。

1.2.5.3總皂苷。精密吸取總皂苷供試品溶液10 mL于50 mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，再從中取1.0 mL，置于10 mL具塞試管中，操作按“1.2.4.3”進(jìn)行，重復(fù)測(cè)定5次。

1.2.5.4總酚。精密吸取總酚供試品液2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，操作按“1.2.4.4”進(jìn)行，重復(fù)測(cè)定5次。

1.2.5.5總鞣質(zhì)。按“1.2.4.5”進(jìn)行操作，準(zhǔn)確吸取2 mL總鞣質(zhì)供試品溶液滴入25 mL棕色容量瓶內(nèi)，滴入1 mL磷鉬鎢酸試液，加10 mL蒸餾水，再加29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。用隨行試劑做空白對(duì)照。30 min后，在765 nm處測(cè)定吸光度。重復(fù)測(cè)定5次。

1.2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)。

1.2.6.1總黃酮。精密吸取總黃酮同一供試品液5份各2 mL，分別置于10 mL棕色容量瓶中，加3 mL 30%乙醇，操作按“1.2.4.1”進(jìn)行，測(cè)定吸光度。

1.2.6.2總生物堿。精密吸取總生物堿同一供試品液5份各2 mL，分別置于分液漏斗中，操作按“1.2.4.2”進(jìn)行，測(cè)定吸光度。

1.2.6.3總皂苷。精密吸取已定容至50 mL的總皂苷同一供試品液5份各1 mL，置于10 mL具塞試管中，操作按“1.2.4.3”進(jìn)行，測(cè)定吸光度。

1.2.6.4總酚。精密吸取總酚同一供試品液5份各2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，操作按“1.2.4.4”進(jìn)行，測(cè)定吸光度。

1.2.6.5總鞣質(zhì)。精確吸取總鞣質(zhì)同一供試品溶液5份各2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，操作按“1.2.4.5”進(jìn)行，測(cè)定吸光度。

1.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)。

1.2.7.1總黃酮。精密吸取總黃酮供試品液2 mL于10 mL棕色容量瓶中，加3 mL 30%乙醇，操作按“1.2.4.1”進(jìn)行，在0、5、10、15、20、30、40 min測(cè)定吸光度。

1.2.7.2總生物堿。準(zhǔn)確量取總生物堿供試品液2.0 mL，置于分液漏斗中，操作按“1.2.4.2”進(jìn)行，在0、15、30、45、60 min 測(cè)定吸光度。

1.2.7.3總皂苷。精密吸取已定容至50 mL總皂苷供試品液1 mL，置于10 mL具塞試管中，操作按“1.2.4.3”進(jìn)行，在0、15、30、45、60 min測(cè)定吸光度。

1.2.7.4總酚。精密吸取總酚供試品溶液2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，操作按“1.2.4.4”進(jìn)行，在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h測(cè)定吸光度。

1.2.7.5總鞣質(zhì)。精密吸取總鞣質(zhì)供試品液2 mL，置于25 mL棕色容量瓶中，操作按“1.2.4.5”進(jìn)行，用顯色后的同一供試品溶液，在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h測(cè)定其吸光度。

1.2.8回收率試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取5份已知含量的同一樣品，各精確添加一定量的蘆丁對(duì)照品、鹽酸小檗堿對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、沒食子酸對(duì)照品、沒食子酸對(duì)照品，分別按照“1.2.2”制備供試品溶液方法來制備加樣回收供試品溶液，再分別按“1.2.4”方法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的含量及回收率。

1.2.9供試品溶液中總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的含量測(cè)定。精確吸取假蒟的葉、根、莖樣液各2 mL置于相應(yīng)標(biāo)號(hào)的容量瓶中，分別按照“1.2.4”方法測(cè)定樣液的吸光度值，根據(jù)回歸方程分別算出樣液中總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的含量，由此再計(jì)算出樣品中總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的含量。

2　結(jié)果與分析

2.1最大吸收波長通過測(cè)定，假蒟總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的最大吸收波長為510、420、544、765、765 nm，且空白對(duì)照沒有干擾。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)“1.2.4”方法，得到假蒟總黃酮的回歸方程為Y=16.478 9X-0.002 4(r=0.999 6)，表明蘆丁濃度在0.002～0.080 mg/mL與吸光度呈良好的線性關(guān)系；總生物堿的回歸方程為Y=40.751 2X-0.003 1(r=0.999 5)，表明鹽酸小檗堿濃度在0～0.04 mg/mL與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；總皂苷的回歸方程為Y=0.026 2X-0.010 9(r=0.999 1)，表明人參皂苷Re濃度在0～5.00 μg/mL與吸光度呈良好的線性關(guān)系；總酚的回歸方程為Y=0.548 0X+0.015 2(r=0.999 7)，表明沒食子酸濃度在0～0.060 mg/mL與吸光度有良好的線性關(guān)系；總鞣質(zhì)的回歸方程為Y=99.978 9X+0.012 1(r=0.999 5)，表明沒食子酸濃度在0～0.008 mg/mL與吸光度呈現(xiàn)良好的正比關(guān)系。

2.3精密度試驗(yàn)分別通過5次重復(fù)測(cè)定，假蒟總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的吸光度的RSD分別為0.17%、0.39%、2.38%、1.15%、1.32%，表明精密度良好。

2.4重現(xiàn)性試驗(yàn)分別測(cè)定5份樣品，假蒟總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚的吸光度的RSD分別為0.20%、0.56%、1.97%、0.46%；總鞣質(zhì)測(cè)定中，其中總酚吸光度的RSD=0.12%，不被吸附的多酚的RSD=0.14%。結(jié)果表明重現(xiàn)性較好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)通過測(cè)定，0～40 min內(nèi)，假蒟總黃酮吸光度的RSD為0.27%，表明總黃酮在40 min內(nèi)較穩(wěn)定；0～60 min內(nèi)，總生物堿吸光度的RSD為0.58%，表明總生物堿在60 min內(nèi)較穩(wěn)定；0～60 min內(nèi)，總皂苷吸光度的RSD為3.13%，表明總皂苷在60 min內(nèi)較穩(wěn)定；0～3 h內(nèi)，總酚吸光度的RSD為1.21%，表明總酚在3 h內(nèi)較穩(wěn)定；0～3.5 h內(nèi)，總鞣質(zhì)吸光度的RSD為2.81%，表明總鞣質(zhì)在3.5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6回收率試驗(yàn)從表1可知，總黃酮的加樣回收率為98.11%，RSD=0.59%；總生物堿的加樣回收率為99.62%，RSD=1.52%；總皂苷的加樣回收率為99.21%，RSD=1.06%；總酚的加樣回收率為97.95%，RSD=0.88%；總鞣質(zhì)的加樣回收率為97.92%，RSD=3.14%。

表1　5種次生代謝產(chǎn)物回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7供試品溶液測(cè)定從表2可知，假蒟葉、莖、根中總黃酮含量分別為1.18%、0.33%、0.25%；假蒟葉、莖、根中總生物堿含量分別為0.19%、0.03%、0.01%；假蒟葉、莖、根中總皂苷含量分別為4.33%、1.71%、4.13%；假蒟葉、莖、根中總酚含量分別為2.42%、1.08%、0.68%；假蒟葉、莖、根中總鞣質(zhì)含量分別為1.69%、1.21%、0.72%。

表2　假蒟不同部位5種次生代謝產(chǎn)物的含量

3　結(jié)論與討論

通過NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法，以蘆丁為對(duì)照品，在510 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定了假蒟不同部位總黃酮的含量，發(fā)現(xiàn)總黃酮含量在假蒟葉中最高(1.18%)，其次是莖(0.33%)，根中最低(0.25%)。

通過溴甲酚綠酸性染料比色法，以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，在420 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定了假蒟不同部位總生物堿的含量，發(fā)現(xiàn)總生物堿含量在假蒟葉中最高(0.19%)，其次是莖(0.03%)，根中最低(0.01%)。

通過香草醛-冰醋酸酸性染料比色法，以人參皂苷Re為對(duì)照品，在544 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定了假蒟不同部位總皂苷的含量，發(fā)現(xiàn)總皂苷含量在假蒟葉中最高(4.33%)，其次是根(4.13%)，莖中最低(1.71%)。

通過Folin-Ciocalteu比色法，以沒食子酸為對(duì)照品，在765 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定了假蒟不同部位總酚的含量，發(fā)現(xiàn)總酚含量在假蒟葉中最高(2.42%)，其次是莖(1.08%)，根中最低(0.68%)。

通過磷鉬鎢酸-干酪素比色法，以沒食子酸為對(duì)照品，在765 nm處用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定了假蒟不同部位總鞣質(zhì)的含量，發(fā)現(xiàn)總鞣質(zhì)含量在假蒟葉中最高(1.69%)，其次是莖(1.21%)，根中最低(0.72%)。

綜上所述，假蒟不同部位總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)含量具有顯著的差異性。試驗(yàn)結(jié)果表明，5種方法均具有精密度高、穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性好、操作簡便、效率高、測(cè)定結(jié)果可靠的優(yōu)點(diǎn)，適用于假蒟中總黃酮、總生物堿、總皂苷、總酚、總鞣質(zhì)的定量分析，可為假蒟藥用質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)，也為假蒟次生代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。

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Determination of Five Kinds of Secondary Metabolites in Different Parts ofPipersarmentosumRoxb.

ZHANG Yan1, ZHANG Hong-bin2

(1.College of Tropical Biology and Agronomy, Hainan Tropical Ocean University, Sanya, Haian 572022; 2.College of Tropical Eco-environment Protection, Hainan Tropical Ocean University, Sanya, Haian 572022)

[Objective] To establish the analytical methods for detecting the contents of total flavonoids, total alkaloids , total saponins, total phenolics and total tannins in different parts ofPipersarmentosumRoxb. [Method] The content of total flavonoids was measured by the NaNO2-Al(NO3)3-NaOH colorimetry. The content of total alkaloids was measured by the bromocresol green acid dyes colorimetric assay. The content of total spaonins was measured by the vanillin-acetic acid dyes colorimetric assay. The content of total phenolics was measured by the Folin-Ciocalteu assay. The content of total tannins was measured by the phospho molybdenum tungstic acid-casein colorimetry. [Result] The average recovery of rutin was 98.11% andRSDwas 0.59%, the contents of total flavonoids in roots, stems and leaves ofP.sarmentosumwere 0.25%, 0.33% and 1.18% respectively. The average recovery of berberine hydrochloride was 99.62% andRSDwas1.52%, the contents of total alkaloids in roots, stems and leaves ofP.sarmentosumwere 0.01%, 0.03% and 0.19% respectively. The average recovery of ginsenoside Re was 99.21% andRSDwas 1.06 %, the contents of total saponins in roots, stems and leaves ofP.sarmentosumwere 4.13%, 1.71% and 4.33% respectively. The average recovery of gallic acid was 97.95% andRSDwas 0.88 %, the contents of total phenol in roots, stems and leaves ofP.sarmentosumwere 0.68%, 1.08% and 2.42% respectively. The average recovery of gallic acid was 97.92% andRSDwas 3.14%, the contents of total tannins in leaves, stems and roots ofP.sarmentosumwere 0.72%, 1.21% and 1.69% respectively. [Conclusion] These five proposed methods are precise, accurate and reproducible, and they are suitable for the determination of total flavonoids, total alkaloids, total saponins, total phenolics and total tannins inP.sarmentosum.

PipersarmentosumRoxb.; Different parts; Secondary metabolites; Content determination

2013年海南熱帶海洋學(xué)院植物學(xué)課程群教學(xué)團(tuán)隊(duì)。

張燕(1968-)，女，甘肅西和人，教授，碩士，從事資源植物化學(xué)研究。

2016-05-13

S 567.23+9

A

0517-6611(2016)17-146-05