溫肖會，邱 杰，呂殿紅，翟少倫，魏文康

(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所，廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510640)

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廣州市部分區(qū)域貓泛白細(xì)胞減少癥流行現(xiàn)狀調(diào)查

溫肖會，邱 杰，呂殿紅，翟少倫，魏文康*

(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所，廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510640)

[目的] 了解貓泛白細(xì)胞減少癥病毒在廣州家貓和流浪貓中的流行情況，分析FPV威脅廣州家貓和流浪貓的潛在風(fēng)險。[方法] 采用貓泛白細(xì)胞減少癥免疫膠體金快速檢測試紙條和PCR檢測方法對廣州5家動物醫(yī)院采集的3 004份貓樣品進(jìn)行檢測與分析。[結(jié)果] 貓泛白細(xì)胞減少癥免疫膠體金快速檢測試紙條檢出10份疑似貓泛白細(xì)胞減少癥陽性樣品，采用貓泛白細(xì)胞減少癥PCR檢測方法檢出13份貓泛白細(xì)胞減少癥陽性樣品。13份陽性樣品來源于96份具有臨床癥狀且未免疫樣品，49份家貓樣品中有6份呈陽性，47份流浪貓樣品中有7份呈陽性，陽性率分別為12.2%(6/49)和14.9%(7/47)，發(fā)病季節(jié)以9～10月多發(fā)，發(fā)病年齡集中在0～6月齡。[結(jié)論]與外界接觸和未免疫疫苗可能是導(dǎo)致貓感染FPV的重要原因。因此，家貓加強(qiáng)疫苗接種，減少與未知免疫背景的貓只接觸，減少家貓感染FPV的潛在風(fēng)險。

貓泛白細(xì)胞減少癥；廣州市；PCR；流行現(xiàn)狀

貓泛白細(xì)胞減少癥(Felinepanleukopenia，F(xiàn)P)又稱貓傳染性腸炎(Felineinfectiousenteritis)或貓瘟熱(Felinedistemper)，是由貓細(xì)小病毒引起的一種高度接觸性急性傳染病，以突發(fā)雙相型高熱、嘔吐、腹瀉、脫水、明顯的白細(xì)胞減少及出血性腸炎為特征，是貓最重要的傳染病[1]。貓泛白細(xì)胞減少癥病毒(Felinepanleukopeniavirus,FPV)在自然條件下可以感染貓，也可以感染狐貍、豹、獅子和浣熊等珍稀野生動物，給家貓、野貓和野生動物保護(hù)造成巨大的威脅[2]。貓泛白細(xì)胞減少癥病毒傳播性強(qiáng)，既可通過糞便、嘔吐物、鼻涕、唾液、尿液排出病毒污染食具、籠子、墊物和周圍環(huán)境，又可以通過跳蚤和吸血昆蟲等媒介傳播，妊娠母貓可垂直傳播給胎兒。FPV致病性極強(qiáng)，會導(dǎo)致妊娠母貓?zhí)夯紊踔亮鳟a(chǎn)，死亡率高且無任何前驅(qū)癥狀[1]。我國部分省、市曾發(fā)生疑似貓泛白細(xì)胞減少癥的疾病，國內(nèi)外學(xué)者已從患病的貓中分離到多株毒株，并進(jìn)行了深入研究[3-7]。目前，關(guān)于廣州家貓和流浪貓貓泛白細(xì)胞減少癥流行情況的報(bào)道較少。筆者采用貓瘟熱免疫膠體金快速檢測試紙條和PCR檢測方法對廣州5家動物醫(yī)院采集的樣品進(jìn)行檢測，進(jìn)一步了解該病毒在廣州家貓和流浪貓中的流行情況和潛在危害風(fēng)險，旨在為廣州家貓和流浪貓貓泛白細(xì)胞減少癥的綜合防控提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1調(diào)查對象。2013年5月至2014年4月在廣州市天河區(qū)、越秀區(qū)、荔灣區(qū)、白云區(qū)、海珠區(qū)等5家連鎖動物醫(yī)院收治的門診病例中采集3 004份貓樣品，包括泄殖腔棉拭子、糞便、全血、病死貓的腸道等樣品。其中，2 600份貓樣品來源于家貓，404份來源于流浪貓，具有發(fā)燒、嘔吐、拉稀等臨床癥狀的樣品96份。同時，對3 004份貓樣品的年齡、免疫狀況和采樣時間等進(jìn)行了記錄，樣品具體信息見表1～3。

1.1.2主要試劑和工具酶。FPV膠體金快速檢測試紙條(批號G140910301)購自上?？祆`生物科技有限公司；TaqDNA聚合酶、dNTP、DL2000Marker等均購自大連寶生物工程有限公司；病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒、2×TaqPCRMasterMix，均購自北京天根生化科技有限公司。

1.1.3主要儀器。S1000 梯度PCR儀，為美國伯樂公司產(chǎn)品；1600凝膠成像系統(tǒng)和EPS-300電泳儀，均為上海天能科技有限公司產(chǎn)品；DU730核酸分析儀，為美國貝克曼公司產(chǎn)品；AC204電子天平，為瑞士梅特勒-托力多儀器有限公司產(chǎn)品；DK-8D三孔電熱恒溫水槽，為上海齊欣科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；移液器，購自德國Eppendorf公司；PIC017離心機(jī)，為德國賀利氏公司產(chǎn)品。

表1　廣州市各區(qū)樣品采集情況

表2　不同月份采集的樣品數(shù)量

表3　不同年齡的樣品數(shù)量

1.2方法

1.2.1FPV免疫膠體金快速檢測試紙條檢測。運(yùn)用FPV膠體金快速檢測試紙條對3 004份貓樣品進(jìn)行初步篩查。具體篩查方法如下：打開FPV試紙板的包裝，取出放于平坦的桌面上，用滴管吸取少量混勻的病料反應(yīng)緩沖液，向試紙板的樣品孔中緩慢滴入3～4滴，5～10min后判斷結(jié)果。根據(jù)檢測線和對照線的結(jié)果判斷結(jié)果。陽性：當(dāng)檢測線(T)位置與對照線(C)的位置同時出現(xiàn)紅色線時，表示已經(jīng)感染FPV。陰性：當(dāng)對照線(C)的位置出現(xiàn)紅色線，而檢測線(T)位置未出現(xiàn)紅線，表示樣品無FPV。當(dāng)對照線(C)的位置不出現(xiàn)紅色線，無論檢測線(T)位置是否出現(xiàn)紅線，表示樣品無效。

1.2.2FPV的PCR檢測。運(yùn)用已建立的FPV的PCR快速檢測方法對3 004份貓樣品進(jìn)行了檢測[8]。PCR擴(kuò)增體系如下：在PCR反應(yīng)管中分別加入滅菌ddH2O7μL、2×TaqPCRMasterMix10μL、上下游引物(20pmol/μL)各0.5μL、模板 2μL，共20μLPCR擴(kuò)增體系。PCR反應(yīng)條件如下：95 ℃預(yù)變性 5min；95 ℃ 變性30s，50 ℃延伸30s，72 ℃延伸30s，共30個循環(huán)；最后 72 ℃延伸 7min，4 ℃下保存。

2　結(jié)果與分析

2.1貓樣品FPV金標(biāo)檢測試紙條和PCR檢測結(jié)果從5家動物醫(yī)院共檢測出10份疑似FPV陽性樣品，使用建立的FPVPCR檢測方法不僅從10份疑似FPV陽性樣品中檢測出FPV核酸陽性樣品，而且從2 994份FPV金標(biāo)檢測試紙條檢測陰性的樣品中檢測出3份FPV核酸陽性樣品，經(jīng)測序分析13份FPVPCR檢測陽性樣品均為FPV(圖1)。結(jié)果表明，F(xiàn)PV的PCR檢測方法不僅準(zhǔn)確，而且更為靈敏。

2.2樣品的來源、采集時間和年齡對FPV流行的影響

2.2.1陽性樣品的來源分析。13份FPV陽性樣品在地區(qū)分布上，以海珠區(qū)和越秀區(qū)FPV陽性數(shù)量最多，分別為5份；其次，白云區(qū)2份陽性樣品，荔灣區(qū)1份陽性樣品，天河區(qū)未檢測到FPV陽性樣品。13份FPV陽性樣品均來源于96份具有臨床癥狀未免疫樣品，49份家貓樣品中有6份陽性樣品，47份流浪貓樣品中有7份陽性樣品，陽性率分別為12.2%(6/49)和14.9%(7/47)從1 790份免疫過貓四聯(lián)疫苗的樣品中沒有檢出FPV，2 908份無臨床癥狀樣品中沒有檢出FPV。結(jié)果表明，無臨床癥狀的貓樣品沒有攜帶FPV；當(dāng)前使用的貓瘟熱疫苗具有保護(hù)貓避免感染FPV的作用；13份FPV陽性樣品，無論是流浪貓還是放養(yǎng)的家貓，共同點(diǎn)是曾與外界接觸。因此，與外界接觸和未免疫貓四聯(lián)疫苗可能是導(dǎo)致貓感染FPV的重要原因。此外，各區(qū)域的發(fā)病率有明顯差異，可能是由于每個動物醫(yī)院提供的樣品數(shù)量差異較大所致。

注：M.DNA Marker DL 2000；1～16分別為1-16號樣品；17.陰性對照；18.陽性對照。Note: M.DNA Marker DL 2000; 1-16.swimming lanes of 1-16 samples. 17.Negative control; 18.Positive control. 圖1　被檢樣品的電泳圖譜Fig. 1　The electrophoretogram of test samples

2.2.2陽性樣品的采集時間分析。13份FPV陽性樣品中以9月和10月樣品數(shù)量居多，分別為3份，占陽性樣品數(shù)的46.0%(6/13)，11月和1月各有2份陽性樣品，8月、12月、2月各有1份樣品，其他月份未檢測到FPV陽性樣品。這表明FPV的感染及發(fā)病與季節(jié)有一定的關(guān)系，秋冬季是廣州市FPV感染的多發(fā)季節(jié)。

2.2.3陽性樣品的年齡分析。13份FPV陽性樣品中，以0～3月和3～6月齡陽性樣品數(shù)量居多，分別為6份和4份，占陽性樣品數(shù)的76.9%(10/13)；6～12月齡樣品中有2份FPV陽性樣品，1～3歲樣品中有1份FPV陽性樣品，4歲以上樣品未檢測到FPV。這表明廣州市1歲以下的貓?zhí)貏e是6月齡以下的幼貓最容易感染FPV。

3　結(jié)論與討論

筆者從3 004份樣品中檢測出13份FPV陽性樣品，其中6月齡以下的貓樣品10份，占陽性樣品數(shù)的76.9%(10/13)，6～12月齡樣品中有2份FPV陽性樣品，1～3歲樣品中有1份FPV陽性樣品，4歲以上樣品未檢測到FPV。這與高得儀[9]和亢文華等[10]報(bào)道的1歲以下的幼貓發(fā)病率較高，發(fā)病率隨著年齡的增長有所降低的結(jié)果相一致。此次調(diào)查的發(fā)病率很低，為0.43%(13/3004)，可能有以下原因：①最近10年，廣州的小動物診療行業(yè)發(fā)展迅速，僅廣州市內(nèi)的動物醫(yī)院就超過300家，動物醫(yī)院醫(yī)生也注重加強(qiáng)寵物疫病免疫預(yù)防為主的宣傳，大部分的寵物在幼齡期就已注射疫苗，提高了自身的免疫力，使幼貓得到了很好的免疫保護(hù)。②廣州高層建筑居多，家養(yǎng)貓一般都在自家的室內(nèi)活動，流動性不大，減少了與帶毒的病貓或FPV污染的環(huán)境接觸，切斷了FPV傳播的途徑。與外界接觸、未免疫FPV疫苗是導(dǎo)致貓感染FPV的重要原因。因此，應(yīng)該加強(qiáng)免疫接種，提高免疫力，盡量減少與帶毒病貓或FPV污染的環(huán)境接觸，是FPV綜合防控的重要措施。

貓泛白細(xì)胞減少癥通常發(fā)生于秋冬季，尤其母貓繁育季節(jié)多發(fā)，呈散發(fā)或地方流行。長途運(yùn)輸、飼養(yǎng)條件劇變以及來源不同和不明的貓混合飼養(yǎng)，也會導(dǎo)致該病的急性暴發(fā)[11-12]。此次調(diào)查結(jié)果表明13份FPV陽性樣品中以9月和10月FPV陽性數(shù)量居多，占陽性樣品數(shù)的46.0%，11月、1月各有2份陽性樣品，8月、12月、1月各有1份樣品，其他月份均未檢測到FPV陽性樣品。究其原因，可能是因?yàn)樘鞖廪D(zhuǎn)涼，病毒較易繁殖生長，同時貓尤其是幼貓更易因?yàn)樘鞖庾儧龆l(fā)生應(yīng)激，從而導(dǎo)致免疫力降低，使病毒容易侵入易感動物體內(nèi)，導(dǎo)致感染FPV的貓數(shù)量上升。此外，貓一般是在春秋季發(fā)情，因?yàn)榻慌浒l(fā)生交叉感染，或者幼貓絕對數(shù)上升，客觀上也是導(dǎo)致秋季出現(xiàn)幼貓病例增多的原因。

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EpidemiologicalSurveyofFelinePanleukopeniaVirusinPartialRegionofGuangzhouCity

WENXiao-hui,QIUJie,LUDian-hong,WEIWen-kang*etal

(GuangdongKeyLaboratoryofAnimalDiseases,GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryPublicHealth,InstituteofAnimalHealth,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou,Guangdong510640)

[Objective]TounderstandtheprevalenceoffelinepanleukopeniavirusandanalyzethepotentialriskoffelinepanleukopeniavirusinGuangzhoudomesticandwildcats. [Method] 3004catsamplesof5animalhospitalsweredetectedandanalyzedbytwomethodsofFPVimmunecolloidalgoldteststripandPCR. [Result] 10positivesamplesweredetectedbythemethodofimmunecolloidalgoldteststripfrom3004catsamples,but13positivesamplesweredetectedbythemethodofPCRfrom3004catsamples.13positivesampleswerefrom96unimmunizedsampleswithclinicalsymptomsincluding6positivesamplesfrom49domesticcatsand7positivesamplesfrom47wildcats.Thepositiveratesrespectivelywere12.2% (6/49)and14.9% (7/47).Themorbidityagesandseasonsofthesesampleswereconcentratedin0-6monthsoldand9-10monthsold.[Conclusion]TheimportantreasonsofcatsinfectedwithFPVmaybecontactwiththeoutsideworldandnovaccination.Therefore,therearetwomeasurestoreducethepotentialriskofdomesticcatsinfectedwithFPVincludingvaccinationandreducecontactwithunknownimmunebackgroundcats.

Felinepanleukopeniavirus;GuangzhouCity;PCR;Epidemicsituation

廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2015A040404034)；廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2013B050800022)；廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2013B040300009)；廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2014B040404061)；廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目(2012B090600048)；科技部星火計(jì)劃項(xiàng)目(2015GA780049)。作者簡介溫肖會(1982- )，女，河南安陽人，助理研究員，碩士，從事動物傳染病分子生物學(xué)研究。*通訊作者，研究員，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動物疫病診斷和防控。

2016-04-30

S855.3

A

0517-6611(2016)17-120-03