封 燕，貢小輝，韋德群，劉英坤，趙 明，于小鳳，OPEYEMI Joshua Olatunji，焦心怡，歐陽臻，*（.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 03；.江蘇大學(xué)京江學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 03）

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金蟬花多糖的抗氧化活性及結(jié)構(gòu)分析

封 燕1，貢小輝2，韋德群1，劉英坤1，趙 明1，于小鳳1，OPEYEMI Joshua Olatunji1，焦心怡1，歐陽臻1，*
（1.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.江蘇大學(xué)京江學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013）

摘 要：本實(shí)驗(yàn)研究金蟬花多糖的抗氧化活性，并對其純化組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。采用熱水浸提、不同濃度乙醇分級沉淀的方法從金蟬花中提取多糖，分別獲得50%醇沉金蟬花多糖（50% polysaccharides from Cordyceps cicadas，CP50）和80%醇沉金蟬花多糖（CP80），并檢測兩者的體外抗氧化活性。結(jié)果表明：CP50較CP80表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除自由基的能力，且具有一定的還原能力和總抗氧化能力。CP50進(jìn)一步經(jīng)二乙氨乙基（diethylaminoethyl，DEAE）纖維素-52和Sephadex G-100凝膠柱分離純化，得到活性多糖CPA-1和CPB-1。經(jīng)紫外掃描光譜法和高效凝膠過濾色譜法鑒定CPA-1和CPB-1為均一多糖；單糖組成分析顯示兩個(gè)組分中均含有葡萄糖、甘露糖和半乳糖，其物質(zhì)的量比分別為：1∶0.48∶0.52和1∶0.14∶0.114。紅外光譜（infrared spectroscopy，IR）及剛果紅實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CPA-1和CPB-1具有典型的多糖紅外吸收，且含有三股螺旋分子結(jié)構(gòu)。

關(guān)鍵詞：金蟬花多糖；抗氧化活性；分離純化；結(jié)構(gòu)分析

引文格式：

封燕， 貢小輝， 韋德群， 等.金蟬花多糖的抗氧化活性及結(jié)構(gòu)分析［J］.食品科學(xué)， 2016， 37（13）: 19-24.DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201613004. http://www.spkx.net.cn

FENG Yan， GONG Xiaohui， WEI Dequn， et al.Antioxidant activity and preliminary structure analysis of polysaccharides from Cordyceps cicadas［J］.Food Science， 2016， 37（13）: 19-24.（in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613004. http://www.spkx.net.cn

金蟬花（Cordyceps cicadae）是麥角菌科真菌寄生于一些蟬若蟲后形成的干燥復(fù)合體，性寒味甘，具有疏風(fēng)散熱之功效，是一種藥食兩用真菌，亦是我國傳統(tǒng)名貴中藥材之一。早在宋代《證類本草》中就有蟬花治療小兒驚癲、夜啼心悸的記載。近代許多學(xué)者對蟬花的藥理活性進(jìn)行過廣泛研究。如陳以平教授等［1］率先使用蟬花代替冬蟲夏草進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其在保護(hù)腎功能、延緩慢性腎功能衰竭方面功效顯著，有望成為冬蟲夏草的代用品。宋捷民等［2］發(fā)現(xiàn)蟬花可顯著提高血清溶血素水平和巨噬細(xì)胞的吞噬活性，表明其具有促進(jìn)免疫功能的作用。另外，國內(nèi)外研究還發(fā)現(xiàn)蟬花具有抗腫瘤［3］、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝［4］、抗疲勞抗應(yīng)激［5］等生物活性。其活性成分主要包括多糖、核苷、甘露醇、麥角甾醇等［6］，現(xiàn)代藥理研究表明，多糖作為其主要有效成分之一，具有明顯的免疫調(diào)節(jié)［7］、改善腎功能［8］等作用，因此成為近年來研究和開發(fā)的熱點(diǎn)。但目前關(guān)于金蟬花多糖抗氧化活性及結(jié)構(gòu)分析方面報(bào)道甚少。本研究主要以金蟬花為原料，通過本課題組前期已優(yōu)化的提取條件［9］，提取得到不同體積分?jǐn)?shù)乙醇分級沉淀的金蟬花多糖，篩選出抗氧化活性較高的多糖成分，利用二乙氨乙基（diethylaminoethyl，DEAE）纖維素-52和Sephadex G-100等現(xiàn)代分離手段獲得高純度的金蟬花多糖組分，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步解析，為金蟬花多糖用于保健食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生金蟬花，采自江蘇省句容市天王鎮(zhèn)磨盤山，由江蘇大學(xué)藥學(xué)院歐陽臻教授鑒定。

1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、抗壞血酸（vitamin C，VC），單糖標(biāo)準(zhǔn)品（葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖） 美國Sigma公司；透析袋（截留分子質(zhì)量3 500 D） 瑞典Pharmacia公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2102 PCS 型紫外分光光度計(jì) 尤尼柯（上海）儀器有限公司；HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋 江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠；MP502B電子天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司；R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Büchi公司；Agilent4890D氣相色譜儀 美國惠普公司；Nicolet 470傅里葉紅外光譜儀 美國Nicolet公司。

1.3 方法

1.3.1 金蟬花多糖的提取

稱取干燥金蟬花粉末80 g，按照1∶10（m/V）的料液比加入蒸餾水，于88 ℃提取2 次，合并提取液，減壓濃縮至200 mL，采用Sevag法去除蛋白；活性炭脫色得金蟬花多糖水溶液，加入乙醇，使最終乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為50%和80%，靜置過夜，離心，冷凍干燥，分別得白色金蟬花多糖CP50（50% polysaccharides from Cordyceps cicadas）和CP80。

1.3.2 體外抗氧化活性檢測

1.3.2.1 供試品溶液的制備

分別稱取CP50和CP80各25 mg，用蒸餾水定容至25 mL，得1 mg/mL的供試品溶液，備用。稱取VC 25 mg，用蒸餾水定容至25 mL，得1 mg/mL的陽性對照溶液，備用。

1.3.2.2 DPPH自由基清除能力的測定

用無水乙醇將DPPH試劑配制成1×10－4mol/L的溶液。準(zhǔn)確吸取不同質(zhì)量濃度（100、200、400、600、700、800 μg/mL）金蟬花待測液、DPPH溶液各1 mL，混勻后暗處放置30 min，于517 nm波長處測定吸光度［10］。以無水乙醇做空白對照、VC作陽性對照，按下式計(jì)算DPPH自由基清除率。

式中：Ai為1 mL樣品溶液+1 mL DPPH試劑混合液的吸光度；Aj為1 mL樣品溶液+1 mL空白溶劑（無水乙醇）混合液的吸光度；A0為1 mL DPPH溶液+1 mL空白溶劑混合液的吸光度。

1.3.2.3 ·OH清除能力的測定

利用Fenton體系法測定多糖對·OH的清除能力［11-13］。往10 mL離心管中依次加入1 mL不同質(zhì)量濃度多糖溶液，1 mL 6 mmol/L的FeSO4溶液，1 mL 6 mmol/L的水楊酸-乙醇溶液和1 mL 6 mmol/L 的H2O2溶液，于37 ℃水浴1 h，然后在510 nm波長處測定吸光度（Ai）。按下式計(jì)算·OH清除率。

式中：Aj為蒸餾水代替多糖溶液作陰性對照的吸光度；A0為蒸餾水代替H2O2溶液作本底對照的吸光度。

1.3.2.4 還原力的測定

參照Kumaran等［14］的方法進(jìn)行：將1 mL不同質(zhì)量濃度的多糖溶液分別與2.5 mL pH 6.6的磷酸鹽緩沖液及2.5 mL 1 g/100 mL的鐵氰化鉀混合，混合物于50 ℃水浴20 min，然后加入2.5 mL 10 g/100 mL的三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）終止反應(yīng)，離心10 min，取上清液2.5 mL，依次加入2.5 mL無水乙醇和0.5 mL 0.1 g/100 mL的FeCl3溶液，混勻后于700 nm波長處測定吸光度，蒸餾水作空白對照，VC作陽性對照。

1.3.2.5 總抗氧化能力的測定

取不同質(zhì)量濃度的多糖溶液，依次加入3 mL混合液（精確稱取磷酸三鈉1.065 g、鉬酸銨0.494 g，用少量蒸餾水溶解后加濃硫酸3.28 mL，定容至100 mL容量瓶中），于95 ℃水浴90 min，695 nm波長處測定吸光度［15］，蒸餾水作空白對照，VC作陽性對照。

1.3.3 金蟬花多糖（CP50）的分離純化

1.3.3.1 DEAE-52纖維素層析柱純化

稱取CP500.15 g，溶解于5 mL蒸餾水，離心，上清液經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析，分別用去離子水、不同濃度的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速1 mL/min，分別收集洗脫液（每管10 mL）。隔管用苯酚-硫酸法跟蹤檢測，在490 nm波長處測定吸光度，以試管數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制洗脫曲線。合并各尖峰管洗脫液，減壓濃縮，蒸餾水透析2 d，冷凍干燥，得到多糖CP50的DEAE柱分離組分，分別為CPA、CPB。

1.3.3.2 Sephadex G-100凝膠柱純化

與熱帶西北太平洋與東南印度洋對流活動(dòng)異常正相關(guān)時(shí)不同,負(fù)相關(guān)時(shí)(圖5c、5d),850 hPa上的蘇門答臘島西南附近海域?yàn)轱@著風(fēng)場輻合區(qū),高層輻散,菲律賓群島以東海域850 hPa上存在輻散風(fēng)場,對流層上層則相反,構(gòu)成了一個(gè)東北—西南向的局地垂直環(huán)流圈。而熱帶西北太平洋處于下沉區(qū),對流弱,熱帶東南印度洋則相反,對流強(qiáng)。從流場分布也可看出,850 hPa上熱帶西北太平洋存在反氣旋性環(huán)流,而熱帶東南印度洋則存在氣旋性環(huán)流。這與圖3b中海溫異常相對應(yīng),且與Gill型響應(yīng)理論結(jié)果一致(Gill,1980)也與圖2中的降水異常相對應(yīng)。

將DEAE-52柱層析收集到的CPA和CPB用Sephadex G-100柱層析進(jìn)一步純化。上樣量為60 mg，上樣體積為5 mL，流速為1 mL/min，以去離子水和不同濃度的NaCl 溶液為洗脫劑洗脫，分別收集洗脫液，苯酚-硫酸法測定多糖含量。合并各尖峰管洗脫液，減壓濃縮，用蒸餾水透析2 d，冷凍干燥，分別得到其純化組分CPA-1、CPB-1。

1.3.4 CPA-1、CPB-1純度的鑒定

紫外光譜分析：將CPA-1和CPB-1分別配成1 mg/mL的水溶液，用紫外分光光度計(jì)在波長190～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。

HPLC檢測：CPA-1和CPB-1分別用0.003 mol/L醋酸鈉配成5 mg/mL溶液，0.45 μm濾膜過濾后進(jìn)樣。色譜條件：采用TSKgel G4000PW色譜柱，流動(dòng)相為0.003 mol/L醋酸鈉，流速為0.5 mL/min。

1.3.5 單糖組成成分分析

分別稱取10 mg CPA-1和CPB-1于安瓿瓶中，加5 mL 2 mol/L的硫酸溶液，酒精燈封口。100 ℃水解8 h，碳酸鋇中和，離心，取上清液，減壓蒸干。往多糖水解物、各單糖標(biāo)準(zhǔn)品中加入10 mg鹽酸羥胺和1 mL吡啶，90 ℃水浴反應(yīng)30 min，冷卻至室溫。加入1 mL乙酸酐，90 ℃水浴反應(yīng)30 min，冷卻至室溫，制備成糖腈乙酰酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜（gas chromatography，GC）分析［16］。色譜條件：HP-1彈性石英毛細(xì)管色譜柱（21 000 mm× 0.2 mm）；柱溫：起始溫度130 ℃，保留5 min，程序升溫4 ℃/min，終止溫度240 ℃，保持10 min；汽化室溫度250 ℃；氫火焰離子化檢測器溫度250 ℃。

1.3.6 CPA-1和CPB-1紅外光譜分析

1.3.7 剛果紅實(shí)驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為1 mg/mL的多糖溶液，80 μmol/L的剛果紅溶液。取1 mL樣品溶液加入1 mL剛果紅溶液，逐漸加入1 mol/L的NaOH，使溶液中NaOH終濃度由0 mol/L逐漸升高到0.5 mol/L，混勻，室溫下靜置15 min，進(jìn)行紫外光譜掃描，記錄剛果紅在不同濃度NaOH溶液中的最大吸收波長。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蟬花多糖的體外抗氧化活性

2.1.1 DPPH自由基的清除能力

如圖1所示，金蟬花多糖CP50和CP80均具有顯著的清除DPPH自由基的能力，且表現(xiàn)出良好的劑量依賴關(guān)系。在質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL時(shí)，金蟬花多糖對DPPH自由基的清除能力雖然低于VC，但隨著質(zhì)量濃度的升高其清除能力增強(qiáng)，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg/mL時(shí)，CP50和CP80的清除率分別達(dá)到79.16%、58.73%。金蟬花多糖對DPPH自由基的清除能力可能是多糖中的羥基具有供氫質(zhì)體能力的結(jié)果。可見金蟬花多糖具有明顯清除DPPH自由基的能力，且CP50相對于CP80清除DPPH自由基的能力較強(qiáng)。

2.1.2 ·OH的清除能力

由圖2可知，金蟬花多糖CP50和CP80清除·OH的能力隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，表現(xiàn)出良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。在相同質(zhì)量濃度下CP50對·OH的清除率高于CP80，在0.8 mg/mL時(shí)，CP50清除率為94.12%，而CP80的·OH清除率為57.9%。與VC相比，當(dāng)多糖質(zhì)量濃度在0.1～0.6 mg/mL之間時(shí)，CP50和CP80清除· OH的能力顯著低于VC，當(dāng)質(zhì)量濃度大于0.6 mg/mL時(shí)，CP50對· OH的清除率趨于平緩，清除效果與VC相當(dāng)。表明金蟬花多糖對·OH 有很好的清除能力，且CP50相對于CP80清除·OH能力較強(qiáng)。

2.1.3 總還原能力

在一定吸光度范圍內(nèi)，金蟬花多糖的總還原能力與其吸光度成正相關(guān)，吸光度越高，表示還原能力越強(qiáng)。由圖3可知，在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，金蟬花多糖和VC都具有顯著的還原能力，并且隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，CP50的還原力明顯低于VC，但是略高于CP80，說明金蟬花多糖有一定的還原能力，且CP50的還原能力略高于CP80。

2.1.4 總抗氧化能力

由圖4可知，在測定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，與VC相比，隨著金蟬花多糖的質(zhì)量濃度提高，總抗氧化能力明顯增強(qiáng)。在相同質(zhì)量濃度下，CP50較CP80的總抗氧化性能略強(qiáng)。

綜合以上4 種體外抗氧化指標(biāo)可知，金蟬花多糖有較好的清除DPPH自由基、·OH的能力和一定的還原能力以及總抗氧化能力，說明金蟬花多糖有良好的抗氧化活性，可以作為一種天然的抗氧化劑，值得開發(fā)和利用。

通過測定CP50和CP80的抗氧化活性，表明CP50相對CP80的抗氧化活性較高，具有廣闊的潛在利用價(jià)值，故本實(shí)驗(yàn)將對CP50進(jìn)一步分離純化，為金蟬花多糖的進(jìn)一步研究應(yīng)用提供重要的理論依據(jù)和指導(dǎo)。

2.2 金蟬花多糖CP50的純化結(jié)果

由圖5可知，金蟬花多糖CP50經(jīng)DEAE纖維素-52離子交換層析分離，以苯酚-硫酸法跟蹤檢測，主要得到2 個(gè)組分，分別為水洗脫部位（CPA）和0.1 mol/L NaCl洗脫部位（CPB）。再進(jìn)一步經(jīng)Sephadex G-100柱層析純化，結(jié)果如圖6所示。

2.3 CPA-1、CPB-1純度的鑒定

CPA-1和CPB-1的紫外掃描結(jié)果顯示，在核酸（260 nm）和蛋白質(zhì)（280 nm）的特征吸收峰處沒有紫外吸收，說明樣品中均不含有蛋白質(zhì)和核酸；經(jīng)高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）檢測為單一對稱峰，表明樣品為均一組分。

2.4 單糖組成成分分析

金蟬花多糖各組分的單糖組成結(jié)果如圖7所示，CPA-1主要含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖，各單糖的物質(zhì)的量比為0.48∶1∶0.52。CPB-1主要由葡萄糖以及少量的甘露糖和半乳糖組成，其物質(zhì)的量比為1∶0.14∶0.114。

2.5 CPA-1、CPB-1紅外光譜分析

由圖8可知，在3 400 cm－1附近的強(qiáng)吸收峰是糖分子中O—H的伸縮振動(dòng)［17］；2 930 cm－1處的峰是糖類C—H伸縮振動(dòng)；1 600 cm－1附近的吸收峰可能是COO—中的C=O鍵的不對稱伸縮振動(dòng)；1 400～1 200 cm－1之間的吸收峰是糖類C—H的變角振動(dòng)，以上幾組吸收峰可以判斷該物質(zhì)屬于糖類化合物［18］；1 300～1 000 cm－1處的吸收屬于吡喃環(huán)的伸縮振動(dòng)，因此可以推測CPA-1和CPB-1是吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)［19］。此外，CPB-1在1 000～800 cm－1區(qū)域內(nèi)有許多弱小吸收峰，說明CPB-1是以β-型糖苷鍵連接［20］。

2.6 剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

剛果紅是一種酸性染料，能與具有三股螺旋構(gòu)象的多糖形成絡(luò)合物，使剛果紅的最大吸收波長（λmax）發(fā)生紅移，而一定濃度的NaOH溶液可破壞三股螺旋結(jié)構(gòu)的氫鍵，表現(xiàn)為最大吸收波長的特征變化［21］。由圖9可知，CPA-1和CPB-1與剛果紅發(fā)生絡(luò)合作用，NaOH濃度在0～0.1 mol/L時(shí)，溶液的最大吸收波長有上升趨勢，但隨著NaOH濃度的增高，這2 種溶液的最大吸收波長又逐漸減小，因此可以推測CPA-1和CPB-1具有三股螺旋構(gòu)象。

3 結(jié) 論

抗氧化能力是衡量營養(yǎng)健康食品和植物生物活性成分的重要指標(biāo)。目前常用的合成抗氧化劑如丁基羥基茴香醚和2，6-二叔丁基對甲酚等，雖然清除自由基的效果很好，但長期服用有致毒或致癌的風(fēng)險(xiǎn)［21-22］。因此，從天然產(chǎn)物中尋找安全有效的抗氧化劑顯得越來越重要。本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法從金蟬花中提取不同濃度乙醇分級沉淀的多糖（CP50和CP80），并分別檢測其抗氧化活性。研究表明，CP50和CP80均具有較強(qiáng)的清除自由基的活性，且具有一定的還原能力和總抗氧化能力，說明金蟬花多糖具有良好的抗氧化活性，可以作為一種天然抗氧化劑。CP50表現(xiàn)出比CP80更加顯著的清除自由基的活性，且存在明顯的量效關(guān)系，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg/mL時(shí)，對DPPH自由基和·OH的清除率分別達(dá)到了79.16%、94.12%，顯著高于CP80，表明CP50的抗氧化能力強(qiáng)于CP80，更適合開發(fā)為抗氧化劑。許多研究表明［23-25］，多糖的生物活性與結(jié)構(gòu)存在著密切關(guān)系，因此合理準(zhǔn)確地分析活性多糖的結(jié)構(gòu)具有重要意義。本研究對抗氧化活性較高的金蟬花多糖CP50進(jìn)一步分離純化，得到2 個(gè)組分CPA-1和CPB-1，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步分析。經(jīng)紫外光譜法和高效凝膠色譜法鑒定得知兩者都是純度較高的多糖組分。單糖組成分析表明CPA-1和CPB-1均含有葡萄糖、甘露糖和半乳糖，其物質(zhì)的量比分別為：1∶0.48∶0.52、1∶0.14∶0.114；紅外光譜掃描結(jié)果顯示2 個(gè)組分具有多糖的典型特征吸收峰，并且都是吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)；剛果紅實(shí)驗(yàn)研究表明，CPA-1和CPB-1具有三股螺旋結(jié)構(gòu)。本研究可為進(jìn)一步探討金蟬花多糖活性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為金蟬花多糖功能產(chǎn)品的開發(fā)提供初步理論依據(jù)。

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DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613004

中圖分類號：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2016）13-0019-06

收稿日期；2015-08-24

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81072985；81373480；81573529）；江蘇省大學(xué)生實(shí)踐創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目（201513986001Y）；江蘇大學(xué)第13批大學(xué)生科研立項(xiàng)一般項(xiàng)目（13A154）；江蘇大學(xué)第14批大學(xué)生科研立項(xiàng)一般項(xiàng)目（14A134）

作者簡介：封燕（1991—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幓钚猿煞?。E-mail：fengyanxy@163.com

*通信作者：歐陽臻（1964—），女，教授，博士，研究方向?yàn)橹兴庂Y源活性成分及新藥開發(fā)。E-mail：zhenouyang@ujs.edu.cn

Antioxidant Activity and Preliminary Structure Analysis of Polysaccharides from Cordyceps cicadas

FENG Yan1， GONG Xiaohui2， WEI Dequn1， LIU Yingkun1， ZHAO Ming1， YU Xiaofeng1， OPEYEMI Joshua Olatunji1， JIAO Xinyi1， OUYANG Zhen1，*
（1.School of Pharmacy， Jiangsu University， Zhenjiang 212013， China；2.Jingjiang College， Jiangsu University， Zhenjiang 212013， China）

Abstract:In this study， the antioxidant activities and structural characteristics of polysaccharides from Cordyceps cicadae were determined.Two crude polysaccharide fractions （CP50and CP80） were extracted from Cordyceps cicadae with hot water and isolated by precipitation with different concentrations of ethanol.Their antioxidant activities were also analyzed.The results indicated that both CP50and CP80were effective in antioxidant activity.The radical scavenging activity of CP50was higher than that of CP80.CP50also showed higher reducing capacity and total antioxidant activity.CP50was then further purified by gel filtration on diethylaminoethyl （DEAE）-cellulose-52 and Sephadex G-100 columns， and two purified fractions were obtained， namely CPA-1 and CPB-1.Ultraviolet spectroscopy and high-performance liquid chromatography （HPLC） analysis revealed that CPA-1 and CPB-1 were homogeneous.Monosaccharide analysis revealed that both CPA-1 and CPB-1 were composed of Glc， Gal and Man with a molar ratio of 1:0.48:0.52 and 1:0.14:0.114， respectively.Moreover，both polysaccharide fractions had three helix structures.

Key words:Cordyceps cicadaes polysaccharides； antioxidant activity； separation and purification； structural analysis