李 彬， 李長(zhǎng)忠

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外周血及蛻膜組織中CD4加CD25加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系研究

李 彬1， 李長(zhǎng)忠2

（1.山東省禹城市人民醫(yī)院， 山東 禹城 251200 2.山東省立醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250021）

【摘 要】目的：探討外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系。方法：隨機(jī)選取自2012年6月到2015年6月，我院門診部與住院部的原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者62例（觀察組）和正常妊娠婦女62例（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。采用流式細(xì)胞四色熒光法測(cè)量?jī)山M研究對(duì)象外周血及蛻膜組織中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例。分析比較兩組研究對(duì)象外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例情況。結(jié)果：觀察組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于對(duì)照組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，且兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2. 669，P=0.015）；觀察組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于對(duì)照組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.986，P=0.001）。結(jié)論：外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例在早孕期顯著升高，參與了正常妊娠的維持，有可能是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的一個(gè)重要因素；外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例降低可能與URSA的發(fā)生有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】外周血； 蛻膜組織； CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例； 原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)

為了探討外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系，選取了我院門診部與住院部的原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者62例和正常妊娠婦女62例作為研究對(duì)象，具體研究結(jié)果如下：

1　資料與方法

1.1 一般資料：隨機(jī)選取自2012年6月至2015年6月，我院門診與住院的原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者62例（觀察組）和正常妊娠婦女62例（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。對(duì)照組患者62例，年齡22～38歲，平均年齡（24.8 ±4.9）歲；孕周3～18周，平均（8.5±2.9）周；觀察組患者62例，年齡20～38歲，平均年齡（24.9±4.7）歲；孕周3～19周，平均（8.3±2.8）周。對(duì)兩組患者的平均年齡、孕周進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比分析，兩組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），兩組患者具有可比性。具體情況見(jiàn)1。

表1　兩組患者一般資料對(duì)比（ˉx±s，n）

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有觀察組患者的診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科分會(huì)制定的關(guān)于原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］；②所有對(duì)照組患者均為同期在我院門診行終止妊娠的正常早孕產(chǎn)婦；③兩組患者均了解該研究?jī)?nèi)容，并自愿配合該研究?jī)?nèi)容中的所有檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①兩組患者均排除有染色體、內(nèi)分泌或者解剖結(jié)構(gòu)異常；②排除合并有感染、自身免疫性疾病史者。

1.3 方法：①分別采集兩組患者的外周血和蛻膜組織，并在無(wú)菌條件下制備蛻膜及外周血的單核細(xì)胞懸液。②將其放入離心機(jī)中，離心1500rpm×5min。③分別去除上清液，加入熒光標(biāo)記抗體（小鼠抗人CD4-PE -y5.5，小鼠抗人CD15-FITC）5uL混勻，裂解細(xì)胞后再加入FoxP3-PE。④置于室溫下，避光，孵化30min。⑤分別在樣品中加入PBS液1mL，然后放置于離心機(jī)中，離心1500rpm×5min。⑥離心后去除上清液，加入200ulPBS，采用流式細(xì)胞檢查儀進(jìn)行檢查。

1.4 觀察指標(biāo)：分別觀察比較兩組患者的外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1 兩組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例：比較兩組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，觀察組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例明顯低于對(duì)照組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于正常妊娠婦女。見(jiàn)表2。

表2　兩組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例比較（%，xˉ±s）

2.2 兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例：比較兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，觀察組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例明顯低于對(duì)照組患者蛻膜組織中 CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于正常妊娠婦女。見(jiàn)表3。

表3　兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例比較（%，xˉ±s）

3　討 論

妊娠的過(guò)程類似于同種異體移植的過(guò)程，因?yàn)樘核鶖y帶父親的一半的HLA抗原可以刺激孕婦產(chǎn)生免疫應(yīng)答，同時(shí)為了保證妊娠繼續(xù)，該刺激作用使孕婦的免疫抑制細(xì)胞數(shù)量也相應(yīng)增加，使胎兒能在母體的免疫應(yīng)答和免疫抑制動(dòng)態(tài)平衡中存活至分娩［2］。生殖免疫專家認(rèn)為，一旦這種免疫耐受與免疫應(yīng)答機(jī)制的動(dòng)態(tài)平衡被打破，正常妊娠將無(wú)法繼續(xù)，最終會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生［3］。近些年來(lái)越來(lái)越多的免疫學(xué)專家認(rèn)為，不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與免疫學(xué)密切相關(guān)。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一類具有重要免疫功能的T細(xì)胞亞群，具有免疫抑制功能，在母胎免疫耐受中發(fā)揮著重要的作用［4］。目前CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用機(jī)制尚未清楚，多數(shù)專家認(rèn)為其主要通過(guò)兩種機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用：①CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可以分泌多種免疫抑制因子（IL-10、TGF-β等），間接的發(fā)揮免疫抑制作用，保護(hù)胚胎的生長(zhǎng)；②CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過(guò)直接或間接接觸，參與人體自身免疫耐受的調(diào)節(jié)，同時(shí)其種植類似同種異體移植以及腫瘤免疫調(diào)節(jié)，維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。國(guó)外有研究報(bào)道［5］，通過(guò)增加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能和數(shù)量可以治療自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病等。

該研究通過(guò)檢測(cè)兩組患者外周血以及蛻膜組織的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例可知：觀察組患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例明顯低于對(duì)照組患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血中的D4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于正常妊娠孕婦，與國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者的報(bào)道一致；另外觀察組患者蛻膜組織CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例低于對(duì)照組患者蛻膜組織CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明正常妊娠孕婦的蛻膜組織中的D4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例高于原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者，這與國(guó)外專家學(xué)者的報(bào)道一致。而且正常妊娠者蛻膜組織中的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例高于外周血，說(shuō)明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在蛻膜組織中有更高的表達(dá)。

綜上所述，外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例在早孕期升高，參與了正常妊娠的維持，有可能是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的一個(gè)重要因素；外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例降低可能與原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］ 李成，張強(qiáng).復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)及臨床意義［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2009，30（11）：1340～1342.

［2］ 劉長(zhǎng)明.CD4+T輔助細(xì)胞中Treg及Th17在原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病中作用的探討［D］.安徽醫(yī)科大學(xué)，2012.

［3］ 馮曉玲，鮑薇薇，張素冰，等.CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)療前沿（上半月），2011，6（5）：27～28.

［4］ 王文娟.CD4+T細(xì)胞在原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的研究進(jìn)展［J］.國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2013，40（6）：525～529.

［5］ 章衛(wèi)國(guó)，張蔚卿，陳葆國(guó)，等.原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表達(dá)［J］.全科醫(yī)學(xué)臨床與教育，2011，9（4）：368～371.

【文章編號(hào)】1006-6233（2016）07-1065-03

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.07.04

【基金項(xiàng)目】山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目，（編號(hào)：ZR2013HM165）

Peripheral Blood and Decidua Tissue Proportion of CD4+CD25+Regulatory T Cells in Relations with Unexplained Recurrent Abortion

LI Bin， et al
（The People＇s Hospital of Yucheng City，Shandong Yucheng251200，China）

【Abstract】Objective：To explore the relationship between the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in the peripheral blood and decidua tissue and unexplained recurrent abortion.Methods：Randomly selected from June 2012 to June 2015 in our hospital outpatient and hospitalization of patients with unexplained recurrent abortion，62 cases（observation group）and 62 cases of normal pregnant women（control group）as the research objects.Using flow cytometry four-color fluorescence method to measure the CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue.Comparative analysis of two groups of peripheral blood and decidua tissue proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in case.Results：The CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue of observation group patients were significantly lower than control group in patients.The difference between the two groups was statistically significant（T=2. 669，p=0.015，p＜0.05）；The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in decidual tissue of observation group patients was significantly lower than that in the control group patients.There was obvious difference between the two groups，with a statistical significance（T=4.986，p=0.001，p＜0.05）.Conclusion：The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue has a significant rise in early pregnancy.It should involve in maintaining normal pregnancy.It is possible that local immune tolerance control of maternal-fetal interface formed an important factor；The lower of the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue may be associated with the occurrence of URSA.

【Key words】Peripheral blood； Decidual tissue； CD4+CD25+regulatory T cells； Unexplained recurrent miscarriage