王　璨，王曉鈺，于　曦，陶　羽，王　燕，包凱帆，季　律，洪　敏

(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，科技部國家規(guī)范化中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，江蘇省中藥藥效與安全性評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京　210023)

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卡泊三醇誘導(dǎo)小鼠特應(yīng)性皮炎模型的最適條件探索

王璨，王曉鈺，于曦，陶羽，王燕，包凱帆，季律，洪敏

(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，科技部國家規(guī)范化中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，江蘇省中藥藥效與安全性評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京210023)

目的探討卡泊三醇(MC903)致小鼠特應(yīng)性皮炎模型的建立方法。方法誘導(dǎo)劑量探索實(shí)驗(yàn)：從d 0起，于各劑量組BALB/c小鼠右耳分別涂布0.33、1、3 nmol MC903，連續(xù)誘導(dǎo)7 d。每天觀察小鼠耳腫脹程度并測量雙耳耳厚，分別于d 3、7取材分析。誘導(dǎo)時間探索實(shí)驗(yàn)：從d 0起，于BALB/c小鼠右耳涂布2 nmol·ear-1MC903，連續(xù)誘導(dǎo)至d 14。每天觀察小鼠耳腫脹程度并測量雙耳厚，分別于d 3、7、11、15獲取小鼠右耳組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。制備小鼠右耳耳組織勻漿，檢測勻漿中胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)、IL-33、IL-4、IFN-γ表達(dá)水平以及外淋巴結(jié)中DC細(xì)胞表面標(biāo)記分子CD40+、CD86+和ILC2細(xì)胞百分含量的變化。結(jié)果① 每耳1、3 nmol MC903誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹度從d 3開始顯著增加，TSLP、IL-4水平明顯增加，每耳3 nmol MC903劑量組IL-33水平于d 7明顯增加。② 每耳2 nmol MC903誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎小鼠從d 3起，小鼠右耳耳腫脹明顯，耳厚逐漸增加，并于d 14達(dá)到峰值；小鼠耳組織病理組織學(xué)檢查顯示，從d 7起，小鼠右耳耳組織紅腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，炎性細(xì)胞浸潤明顯，耳部炎性癥狀維持并逐漸加重至d 15；與正常小鼠相比，MC903使右耳組織勻漿中TSLP水平于d 3明顯升高，隨后逐漸下降，IL-4、IL-33水平于d 7明顯升高，隨后逐漸降低。外淋巴結(jié)中DC的表面標(biāo)記分子CD40+、CD86+和ILC2的含量在d 7和d 15均有上升。結(jié)論每耳2 nmol MC903誘導(dǎo)小鼠7 d可成功建立小鼠特應(yīng)性皮炎模型，TSLP較適檢測點(diǎn)為d 3，IL-4、IL-33較適檢測點(diǎn)為d 7。

卡泊三醇；小鼠特應(yīng)性皮炎；胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素；白細(xì)胞介素-33；白細(xì)胞介素-4；樹突狀細(xì)胞；Ⅱ型固有淋巴細(xì)胞

特應(yīng)性皮炎(AD)是一種慢性炎癥性皮膚病，伴隨著皮膚瘙癢，易復(fù)發(fā)，并且影響著各個年齡段的人群。AD患者有較高的患嚴(yán)重的過敏性疾病、精神疾病以及皮膚感染[1]幾率。治療AD的重點(diǎn)在于恢復(fù)和維持皮膚屏障功能、減輕炎癥，以及對過敏性疾病關(guān)鍵啟動因子和通路進(jìn)行抑制。研究AD的發(fā)病機(jī)制和防治措施是當(dāng)前皮膚病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。

建立理想的AD動物模型是研究AD的基礎(chǔ)，現(xiàn)在小鼠AD模型的主要制作方法有卵蛋白(OVA)誘導(dǎo)的皮膚主動過敏反應(yīng)[2]、二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)的小鼠耳部三相皮膚反應(yīng)[3]、異硫氰酸熒光素(FITC)等半抗原重復(fù)刺激誘導(dǎo)的皮膚反應(yīng)[4 ]以及通過轉(zhuǎn)基因和基因敲除產(chǎn)生的特應(yīng)性皮炎小鼠模型?？ú慈?MC903)是一種人工合成維生素D3的類似物，廣泛用于治療銀屑病[5]，并且能夠抑制白血病細(xì)胞的增殖分化[6]。近年來，有研究表明，局部應(yīng)用MC903能引起小鼠特應(yīng)性皮炎綜合征，同時MC903能夠通過上皮角質(zhì)形成細(xì)胞維生素D受體(VDR)引起胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)的高表達(dá)[4]。TSLP是一種上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞因子，在起始和促進(jìn)Tp細(xì)胞介導(dǎo)的過敏性炎癥中起關(guān)鍵作用[8]。因此，基于TSLP研究特應(yīng)性皮炎具有重要的意義。但模型建立的條件文獻(xiàn)報道差異較大，MC903的劑量及隨著時間模型中關(guān)鍵細(xì)胞因子及效應(yīng)細(xì)胞的變化趨勢不明確，因此，本研究通過探索MC903誘導(dǎo)的TSLP高表達(dá)的小鼠特應(yīng)性皮炎模型的最適條件，為研究過敏性疾病的發(fā)病機(jī)制以及治療措施提供幫助。

1　材料和方法

1.1儀器測厚規(guī)，日本Mitutoyo公司，型號：7301；電子天平，瑞典Mettler-Toledo公司，型號：PL203；酶標(biāo)儀，美國Bio-Tek公司，型號：SyneRgy 2；冷凍離心機(jī)，美國Beckman Coulter公司，型號：GS-15R；流式細(xì)胞儀，美國BD公司，型號：Accuri C6。

1.2實(shí)驗(yàn)動物BALB/c小鼠，♂，SPF級，體質(zhì)量18～22 g，SPF級，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號碼：SCXK(京)2012-0001。飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級環(huán)境中，環(huán)境溫度為22℃～25℃，濕度為50%～65%，實(shí)驗(yàn)前動物均進(jìn)行1周適應(yīng)性飼養(yǎng)。

1.3主要試劑卡泊三醇(MC903)，Tocris，批號：112965-21-6；小鼠TSLP ELISA試劑盒，eBioscience，批號：E09338-1631；小鼠IL-33 ELISA試劑盒，eBioscience，批號：E11107-1643；小鼠 IL-4 ELISA試劑盒，eBioscience，批號：E09338-1631；小鼠 IFN-γ ELISA試劑盒，eBioscience，批號：E09342-1631；PE-抗小鼠CD40抗體,eBioscience，批號：E028955；APC-抗小鼠CD86抗體，eBioscience，批號：E028452；FITC-抗小鼠Lineage cocktail抗體，BioLegend，批號：B174972；PE-抗小鼠CD25抗體eBioscience，批號：E01153-1633；APC-抗小鼠ST2/IL33R抗體，eBioscience批號：E19489-80；總蛋白定量試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號：20131212。

1.4動物分組及處理

1.4.1MC903誘導(dǎo)的小鼠特應(yīng)性皮炎劑量探索實(shí)驗(yàn)BALB/c小鼠按體質(zhì)量分層法隨機(jī)分成4組，每組12只：包括1個空白組，3個劑量組(0.33、1、3 nmol·ear-1)，MC903溶于體積分?jǐn)?shù)為0.95的乙醇涂布于每個小鼠右耳，左耳涂等劑量乙醇溶劑，每耳涂布體積為20 μL[9]。從d 0起每天連續(xù)處理至d 6。每天測量小鼠的耳厚(d 0給藥前測耳厚)，分別于d 3、d 7每組取6只小鼠的耳組織進(jìn)行勻漿制備。

1.4.2MC903誘導(dǎo)的小鼠特應(yīng)性皮炎時間探索實(shí)驗(yàn)BALB/c小鼠按體重分層法隨機(jī)分成6組，每組7只，包括：1個空白組、5個劑量組(分別誘導(dǎo)1、3、7、11、15 d)。2 nmol MC903溶于體積分?jǐn)?shù)為0.95的乙醇涂布于每個小鼠右耳，左耳涂等劑量乙醇溶劑，每耳涂布體積為20 μL[9]。每天測量小鼠的耳厚(d 0給藥前測耳厚)，分別于d 1、3、7、11、15取小鼠的耳組織和頸部淋巴結(jié)，分別進(jìn)行勻漿制備、病理組織學(xué)檢查及流式細(xì)胞儀分析。

1.5小鼠耳腫脹度檢測及耳組織病理學(xué)檢查每天測定小鼠兩耳厚度，計算耳腫脹度(右耳厚度-左耳厚度)，并于取材時測定小鼠兩耳重量差值(右耳重量-左耳重量)。取小鼠耳廓固定后，從耳根至耳尖切開，取半只耳廓，垂直于切面石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色，光鏡下在耳廓全長的中點(diǎn)左右各取同倍率視野拍照。

1.6耳勻漿的制備與細(xì)胞因子表達(dá)水平的檢測將小鼠用直徑8 mm的皮膚圓形打孔器摘取右耳耳片標(biāo)本，稱重，用PBS溶液研磨成2.5%的耳組織勻漿，靜置后，放置于4℃離心機(jī)進(jìn)行4 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速低溫離心15 min，獲得標(biāo)本上清液。采用ELISA技術(shù)檢測勻漿中細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ、TSLP、IL-33的表達(dá)水平，并用蛋白含量BCA法檢測樣本總蛋白水平后進(jìn)行蛋白矯正，炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平表示為μg·g-1Pro。

1.7流式檢測Ⅱ型固有淋巴細(xì)胞(ILC2s)及樹突狀細(xì)胞(DCs)表面標(biāo)記分子CD40+、CD86+在淋巴細(xì)胞內(nèi)的百分含量小鼠取材時分離頸部皮膚，收集頸部淋巴結(jié)，用機(jī)械研磨法在生理鹽水中制備單細(xì)胞懸液，經(jīng)200目濾布過濾后，調(diào)整細(xì)胞密度為每毫升12×107個 。ILC2s細(xì)胞的檢測：取上述制備得的細(xì)胞懸液100μL于離心管中，分別加入0.2 μg CD25抗體、0.2 μg IL-33R/ST2抗體、Lineage cocktail抗體(每管20 μL)避光孵育15 min,經(jīng)生理鹽水充分洗滌后(每次1 mL，共2次)，用500 μL生理鹽水重懸，流式細(xì)胞儀檢測。DCs表面標(biāo)記分子CD40+、CD86+的檢測：取100 μL細(xì)胞懸液，分別加入0.2 μg CD40抗體及0.2 μg CD86抗體，避光孵育15 min，經(jīng)生理鹽水充分洗滌后(每次1 mL，共2次)，用500 μL生理鹽水重懸，流式細(xì)胞儀檢測活化的DC細(xì)胞(CD40+CD86+)和ILC2細(xì)胞(Lin-CD25+ST2+)的百分含量。

2　結(jié)果

2.1MC903誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎劑量探索實(shí)驗(yàn)

2.1.1小鼠耳腫脹度檢測從d 0起，小鼠右耳分別涂布0.33、1、3 nmol MC903，連續(xù)誘導(dǎo)7 d。結(jié)果表明，與對照組比較，各模型組耳厚差隨MC903誘導(dǎo)劑量和天數(shù)的增加而增加(Fig 1A)，MC903誘導(dǎo)3 d后，3 nmol劑量組耳重有明顯增加(Fig 1B)，攻擊7 d后，1、3 nmol劑量組耳重均明顯增加(Fig 1C)。

2.1.2耳勻漿中細(xì)胞因子的表達(dá)從d 0起，小鼠右耳分別涂布每耳0.33、1、3 nmol MC903，每耳連續(xù)誘導(dǎo)7 d。ELISA法測定耳勻漿上清液中過敏性疾病關(guān)鍵啟動因子TSLP、IL-33及炎癥因子IL-4的表達(dá)。結(jié)果表明：d 3和d 7 1、3 nmol劑量組TSLP水平與空白組相比均升高，而d 3 3 nmol組表達(dá)最高,d 7 1 nmol組表達(dá)最高(Fig 2A)。MC903攻擊3 d后各劑量組IL-33表達(dá)水平與空白相比差異均無顯著性，攻擊7 d后3 nmol組與空白相比有明顯增加(Fig 2B)。3 nmol組耳組織勻漿中Ⅱ型炎癥因子IL-4在d 3、d 7的表達(dá)水平與空白組相比均增加(Fig 2C)。

上述結(jié)果表明，1 nmol和3 nmol劑量在d 7均能引起小鼠特應(yīng)性皮炎，但1 nmol時未能引起IL-4的明顯升高。3 nmol MC903·ear-1劑量在d 3時已經(jīng)引起小鼠耳重及耳厚差以及IL-4的明顯升高，但過早的誘導(dǎo)耳部炎癥反應(yīng)不利于我們觀察特應(yīng)性皮炎誘導(dǎo)初期關(guān)鍵啟動因子TSLP和IL-33的變化。因此，我們選擇介于二者之間的2 nmol MC903·ear-1劑量進(jìn)一步作給藥時間探索。

2.2MC903誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎給藥時間探索

2.2.1小鼠耳腫脹度檢測MC903以2 nmol·ear-1劑量誘導(dǎo)后，耳厚差隨給藥天數(shù)的增加而增加，并于d 14達(dá)到峰值，d 7、d 11、d 15耳重差與空白組相比均增加(Fig 3A、B)。

2.2.2耳組織HE染色病理學(xué)變化HE檢查表明空白組小鼠的耳組織輪廓清晰，未見炎癥細(xì)胞浸潤、水腫增厚和血管充血等病理改變現(xiàn)象，而MC903 2 nmol·ear-1誘導(dǎo)7 d和15 d的小鼠耳組織水腫明顯增厚，出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤，并且有明顯的血管擴(kuò)張現(xiàn)象(Fig 3C)。

Fig 1　Effects of different doses of MC903 on ear thickness difference and ear weight difference of mice after induced for

2.2.3耳勻漿中炎性細(xì)胞因子的表達(dá)從d 0起，以2 nmol·ear-1連續(xù)誘導(dǎo)至d 14。d 3、d 7 TSLP表達(dá)水平與空白組相比有明顯增加，并且在d 3達(dá)到最高(Fig 4A)。d 7、d 11、d 15 IL-33、IL-4表達(dá)水平與空白組相比明顯升高，并且于d 7達(dá)到最高(Fig 4B、C)。d 7 IFN-γ的表達(dá)水平與空白組相比有明顯升高(Fig 4D)。

Fig 2　Effect of different doses of MC903 on cytokine levels in ear homogenate of mice after induced for 3 days and 7 days

2.2.4流式檢測活化的DCs及ILC2s在淋巴細(xì)胞內(nèi)的百分含量采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測外淋巴結(jié)中DCs活化的共刺激分子CD40、CD86和ILC2s的百分含量。結(jié)果顯示，與空白組相比，小鼠淋巴結(jié)組織的CD40+CD86+和ILC2s含量在d 7和d 15均有升高，其中d 7的CD40+CD86+細(xì)胞和d 15的CD40+CD86+細(xì)胞及ILC2s含量與空白組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(Fig 5A、B)。

Fig 3　Effect of 2 nmol MC903 per ear on ear swelling and histopathology of ±s,n=7,magnification×200)

The sharp-outlined ear tissue of control group has no inflammatory cell infiltration and swelling. The ear tissue of mice induced by MC903 for 7 days and 15 days has apparently swelling and inflammatory cell infiltration, along with obvious hemangiectasis.**P<0.01vscontrol

3　討論

特應(yīng)性皮炎也稱為特應(yīng)性濕疹，往往伴隨著強(qiáng)烈的瘙癢和濕疹的病變，是常見的慢性疾病。多年來,它被認(rèn)為是過敏性疾病的最初反應(yīng),最終會導(dǎo)致哮喘和過敏性鼻炎[1]，因此,研究特應(yīng)性皮炎的發(fā)病機(jī)制，對預(yù)防和治療具有重要的意義。為了深入研究特應(yīng)性皮炎的發(fā)病機(jī)制，國內(nèi)外學(xué)者嘗試多種方法來建立特應(yīng)性皮炎動物模型。TSLP是一種上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞因子，在起始和促進(jìn)Tp細(xì)胞介導(dǎo)的過敏性炎癥中起關(guān)鍵作用[10]；IL-33屬于IL-1家族，通過受體ST2活化Tp細(xì)胞[11]。本研究基于TSLP和IL-33建立特應(yīng)性皮炎動物模型，期望能夠?yàn)檫^敏性疾病啟動階段的研究提供一種可靠的模型。

MC903是維生素D3的低鈣類似物，能激發(fā)小鼠上皮角質(zhì)細(xì)胞高表達(dá)TSLP， TSLP通過與DC上的TSLP受體結(jié)合，從而誘導(dǎo)DC活化，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Tp細(xì)胞分化[12],CD40和CD86是DC表面的共刺激分子，它們的表達(dá)高低與DC細(xì)胞的成熟度呈正相關(guān)。IL-33能夠促進(jìn)ILC2s細(xì)胞聚集和活化，升高Tp型的細(xì)胞因子的釋放[13]。能夠引起小鼠特應(yīng)性皮炎綜合征。目前文獻(xiàn)報道中關(guān)于MC903的誘導(dǎo)天數(shù)和劑量均有較大差異，因此建立穩(wěn)定的誘導(dǎo)劑量和天數(shù)的模型具有重要意義。本研究采用BALB/c小鼠，分別對MC903誘導(dǎo)天數(shù)和劑量進(jìn)行探索。在給藥劑量探索實(shí)驗(yàn)中，3 nmol MC903·ear-1劑量誘導(dǎo)7 d后TSLP、IL-33、IL-4均有明顯升高，1 nmol MC903·ear-1誘導(dǎo)7 d后TSLP、IL-4顯著升高，兩個劑量組耳腫脹度均明顯增加。綜合考慮特應(yīng)性皮炎啟動因子、炎癥因子以及耳腫脹度的變化，本研究選取2 nmol MC903·ear-1劑量的劑量進(jìn)一步做誘導(dǎo)天數(shù)探索實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明2 nmol MC903·ear-1誘導(dǎo)7 d后小鼠右耳耳腫脹明顯，耳組織紅腫，毛細(xì)血管擴(kuò)張，炎性細(xì)胞浸潤明顯。TSLP在d 3明顯升高，隨后逐漸降低； IL-33以及IL-4在d 7明顯升高，隨后逐漸降低。TSLP主要通過與DC上的TSLP受體結(jié)合從而誘導(dǎo)DC活化，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Tp細(xì)胞分化[12]。IL-33能夠促進(jìn)ILC2s細(xì)胞聚集和活化，ILC2s細(xì)胞是免疫應(yīng)答初期分泌Tp型的細(xì)胞因子的主要來源，最終升高Tp型的細(xì)胞因子的釋放[13]。因此DC和ILC2分別在TSLP和IL-33的作用下活化，繼而產(chǎn)生Tp型炎癥。我們的研究結(jié)果表明小鼠淋巴結(jié)組織的活化DCs和ILC2s含量在d 7和d 15均有升高，說明在此模型中不僅TSLP、IL-33升高，也表現(xiàn)出其相關(guān)效應(yīng)細(xì)胞的明顯變化。因此，在2 nmol MC903·ear-1誘導(dǎo)7 d能夠成功建立小鼠特應(yīng)性皮炎。TSLP較適檢測點(diǎn)為d 3，IL-33/IL-4較適檢測點(diǎn)為d 7。

Fig 4　Effect of 2 nmol MC903 per ear on cytokine in ear tissue homogenate of mice at different time ±s,n=7),**P<0.01 vs control

Fig 5　Effects of 2nmol MC903 per ear on DCs surface markers CD40+CD86+ and ILC2s contents in lymph

**P<0.01 vs control

綜上所述，運(yùn)用2 nmol MC903·ear-1誘導(dǎo)小鼠7 d后可以良好的模擬特應(yīng)性皮炎的癥狀以及病理變化，尤其是能反映TSLP和IL-33等細(xì)胞因子的變化趨勢。本模型操作簡單，造模成功率高，易于復(fù)制，可以成為研究特應(yīng)性皮炎的重要工具。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院、科技部國家規(guī)范化中藥藥理實(shí)驗(yàn)室、江蘇省中藥藥效與安全性評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。 在此感謝實(shí)驗(yàn)室為我提供的優(yōu)越實(shí)驗(yàn)條件與平臺，同時感謝導(dǎo)師和同學(xué)對我的指導(dǎo)和幫助！)

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On optimum conditons for establishment of calcipotriol-induced mouse atopic dermatitis model

WANG Can,WANG Xiao-yu,YU Xi,TAO Yu,WANG Yan,BAO Kai-fan,JI Lv,HONG Min

(SchoolofPharmacy,NanjingUniversityofChineseMedicine,NationalStandardLaboratoryofPharmacologyforChineseMaterialMedica,JiangsuKeyLaboratoryforPharmacologyandSafetyEvaluationofChineseMaterialMedica,Nanjing210023,China)

AimTo investigate the method of establishing the atopic dermatitis mice model induced by calcipotriol(MC903).MethodsInduction dose exploratory experiment: since d 0, 0.33,1,3 nmol MC903 was smeared on the right ear of BALB/c mice in each dose group respectively, for 7 consecutive days. The ear swelling degree of the mice was observed every day and the bilateral ears thicknesses were measured. The materials were drawn and analyzed in d 3 and d 7. Induction days exploratory experiment: 2 nmol MC903 was smeared on the right ear of BALB/c mice, for 14 consecutive days. The ear swelling degree of mice was observed every day and the bilateral ears thicknesses were measured. The histopathological examination of the right ear was conducted in 3 d, 7 d, 11 d and 15 d respectively. The tissue homogenate of the mice right ear was prepared. The expressions of thymic stromal lymphopoietin(TSLP),IL-33, IL-4 and IFN-γ in the homogenate, CD40+,CD86+,the DC surface markers and ILC2 contents in the peripheral lymph nodes were detected.Results① 1,3 nmol MC903 induced ear swelling in mice was significantly increased in d 3, the levels of TSLP and IL-4 were significantly increased. The level of IL-33 in 3 nmol dose group was increased significantly in d 7. ② The right ear swelling of 2 nmol MC903 induced atopic dermatitis mice was significant, the ear thickness was increased gradually and reached the peak in d 14. The histopathological examination of the mice ear tissue showed in d 7, the right ear tissue of the mice was swelling and red, the capillary vessels were dilated and the infiltration of inflammatory cells was obvious. The ear inflammatory symptoms maintained and gradually aggravated for 15 days. Compared with the normal mice, MC903 increased the TSLP level in the right ear tissue homogenate significantly in d 3 and then decreased gradually. The levels of IL-4 and IL-33 were increased significantly in d 7 and then decreased gradually. The levels of ILC2,CD40+,CD86+in the peripheral lymph nodes were increased in d 7 and d 15.ConclusionThe atopic dermatitis mice model can be successfully established using 2 nmol MC903 induced mice for 7 days. Appropriate testing point of TSLP is d 3. Appropriate testing point of IL-33 and IL-4 is d 7.

calcipotriol; atopic dermatitis; thymic stromal lymphopoietin;interleukin-4;dendritic cells;group 2 innate lymphoid cells

◇實(shí)驗(yàn)方法學(xué)◇

2016-02-01,

2016-03-05

國家自然科學(xué)基金資助項目(No 81473395,81373549,81073121)；江蘇省自然科學(xué)基金資助項目(No BK20141466)；江蘇省兒童呼吸疾病(中醫(yī)藥)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項目(No JKLPRD201405)；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目；江蘇省‘青藍(lán)工程’資助；江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計劃項目(No KYLX15_1007,KYLX_0973)

王璨(1991- )，男，碩士生，研究方向：中藥免疫藥理學(xué)，E-mail：wangcan1109@126.com;洪敏(1972-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥免疫藥理學(xué)，通訊作者，E-mail:hongmin72@126.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.07.027

A

1001-1978(2016)07-1027-06

R-332；R363-332；R392.12；R758.2

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-6-20 11:49網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160620.1149.054.html