蘇利強，吳麗珺，張 瑋

(1.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330004；2.河南教育學院，河南 鄭州 450014)

0 引言

正常人體免疫機能一般處于免疫穩(wěn)態(tài)，細胞免疫和體液免疫在機體免疫平衡中起重要作用，細胞免疫和體液免疫失衡可造成有機體免疫系統(tǒng)功能紊亂，導(dǎo)致免疫力下降、甚至疾病發(fā)生[1-2].針灸學技術(shù)作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學特有的臨床治療方法，對損傷治療和疲勞恢復(fù)具有獨特療效，足三里為三焦之氣所生處，為補益元氣、調(diào)和氣血，補虛強壯之要穴[3-4].針灸足三里可以“補益元氣、調(diào)和氣血”，可扶正、祛邪，調(diào)節(jié)臟腑功能，減緩疲勞發(fā)生，調(diào)節(jié)免疫平衡[5].機體細胞免疫和體液免疫通常處于平衡狀態(tài)，細胞免疫由Th1類細胞因子介導(dǎo)，IFN-γ對細胞免疫具有重要激活作用，體液免疫由Th2類細胞因子介導(dǎo)，IL-4對體液免疫中具有重要激活作用，IFN-γ和IL-4是免疫系統(tǒng)一對重要的相互調(diào)節(jié)因子，IFN-γ/IL-4保持一定的比值是有機體免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的保證，大負荷運動可導(dǎo)致IFN-γ/IL-4比例發(fā)生變化，使機細胞免疫機能相對下降，而體液免疫變化不明顯[6-7].在前期研究中，已證實了足三里穴位針刺在治療大強度運動所致Th1/Th2失衡過程中的顯著作用[8].近年來，陳日新等發(fā)現(xiàn)了一種新型的中醫(yī)療法——熱敏懸灸，全稱“腧穴熱敏化艾灸新療法”，簡稱“熱敏灸”，是把艾絨作為主要灸料，放置于腧穴或病變部位，然后點燃進行燒灼和熏熨的一種治療方法[9].該療法2006年10月28日經(jīng)國家技術(shù)鑒定評選為原始創(chuàng)新技術(shù)，2015年《熱敏灸技術(shù)的創(chuàng)立及推廣應(yīng)用》獲國家科技進步二等獎[10]，現(xiàn)代生物醫(yī)學認為灸療實質(zhì)是一種溫熱刺激的結(jié)果，通過刺激皮膚感受器，激發(fā)和調(diào)整神經(jīng)系統(tǒng)的機能，達到治病保健的目的，然而熱敏灸除了溫熱刺激外還有其藥性和紅外輻射的作用，當然還有一些現(xiàn)代科技無法解釋的作用[13].鑒于此，本研究探討了足三里施熱敏灸對機體免疫失衡的效果及機制.

1 材料與方法

1.1 研究對象

募集17名身體健康，沒有內(nèi)分泌疾病的男性受試者.簽署知情同意書，隨機分成2組.對照組8人，年齡為18.1±0.78；熱敏灸組9人，年齡為18.2±0.79.

1.2 實驗試劑盒及儀器

IFN-γ檢測試劑盒、IL-4檢測試劑盒、IL-12檢測試劑盒、IL-10檢測試劑盒、IL-12p40檢測試劑盒;跑臺、酶標儀、熱掃描成像系統(tǒng)Ver6.0 For Windows、熱敏灸艾條等.

1.3 研究方法

1.3.1 免疫失衡模型建立 于2013年7月14日—7月20日對受試者進行高強度的籃球集訓，每天訓練時間為15：00-17:30，主要內(nèi)容有技戰(zhàn)術(shù)訓練、實戰(zhàn)性分組比賽、體能訓練，時間分配各為1/3左右，具體內(nèi)容按照教練安排進行.最后一天完成正常集訓后再進行一次遞增負荷跑臺運動，以受試者不能再堅持預(yù)訂速度為結(jié)束標準，跑臺遞增運動負荷程序見表1，跑臺前準備活動4～5 min.

表1 遞增負荷運動程序設(shè)定Tab. 1 Incremental Exercise program settings

1.3.2 干預(yù)方法 熱敏灸組受試者選擇舒適、充分暴露病位的體位.在下肢膝關(guān)節(jié)外下側(cè)足三里附近查找熱敏化腧穴，用點燃的“純艾條”在受試者下肢膝關(guān)節(jié)外下側(cè)足三里附近的壓痛點、皮下硬節(jié)等反應(yīng)物部位為中心10 cm為半徑的范圍內(nèi)，距離皮膚2～3 cm左右施行溫和灸.當受試者感受到“艾熱”向皮膚深處灌注、向遠處傳導(dǎo)或向周圍擴散時，此點即為熱敏化腧穴.重復(fù)上述步驟，直至所有的熱敏化腧穴被探查出.熱敏灸的治療方法每次選取2個熱敏化腧穴上實施溫和灸，直至透熱現(xiàn)象消失為1次施灸劑量.每天訓練結(jié)束后對熱敏灸組施灸20 min.對照組采用下肢推拿7 min，腰背部推拿8 min，上肢推拿5 min，均為受試者相互按摩推拿.

1.3.3 血液采集 在7月13日～集訓前1 d(運動前)、7月20日～第7天訓練后2 h內(nèi)(運動后2 h)、第7 d訓練完成后休息3 d(7月23日，運動后3 d)取肘正中靜脈血4 mL，離心后取血漿，-20 ℃保存，待收集完樣本后測試.血清指標采用ELISA方法，按照說明書進行測試.

1.3.4 紅外熱成像 分別在集訓前1 d(運動前)、第7 d訓練后即刻、第7 d訓練后熱敏灸實施第5 min、第7 d訓練后熱敏灸實施第20 min進行紅外熱成像圖形采集，圖形采集后采用熱掃描成像系統(tǒng)Ver6.0 For Windows對足三里穴位劃定區(qū)域，計算該區(qū)域的平均溫度，即為該受試者相應(yīng)時相的足三里區(qū)域的溫度.

1.3.5 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，差異性比較采用重復(fù)測量方差分析進行檢驗，顯著性水平P<0.05.

2 結(jié)果

2.1 血清細胞因子含量變化情況

對照組運動后血清IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-12含量在運動后2 h有所下降，但在3 d后已經(jīng)恢復(fù)，IL-4的含量各時相變化不大，在訓練后血清IL-10含量較運動前有所提升，甚至在第3 d也沒有恢復(fù)到原水平，在訓練后血清IL-12p40含量較運動前有所提升，甚至在第3 d繼續(xù)保持較高水平，運動一周高強度的訓練可使機體免疫機能失衡.

熱敏灸組運動后血清IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-12含量在運動后2 h有所下降，在3 d后已經(jīng)恢復(fù).熱敏灸組和對照組比較，在運動后3 d IFN-γ/IL-4的比值顯著高于對照組，顯示熱敏灸可以阻止細胞免疫的下降，對修正IFN-γ的下降有一定的效果，可改善Th1/Th2的失衡，見表2.

表2 熱敏灸組和對照組細胞因子變化比較Tab. 2 Comparison of cytokine in Heat-sensitive moxibustion group and control

*與對照組比較P<0.05.

2.2 熱敏灸足三里前后該區(qū)域不同時相溫度變化

運動后既要對受試者進行熱敏灸干預(yù)，還要進行紅外成像分析，為保證紅外成像采集圖像的質(zhì)量，對6名受試者進行了相應(yīng)時相的紅外成像的采集，見圖1—圖4，結(jié)果見表3.

表3 熱敏灸前后足三里區(qū)域溫度變化比較Tab. 3 Compare of the temperature in Zusanli regionalbefore and after carrying out heat-sensitive moxibustion

*表示與訓練前比較P<0.01，▲表示與訓練后比較P<0.01.

圖1 運動前足三里區(qū)域熱成像圖

圖2 運動后即刻足三里區(qū)域熱成像圖

圖3 施熱敏灸5 min后足三里區(qū)域熱成像圖

圖4 施熱敏灸20 min后足三里區(qū)域熱成像圖

由表3可以看出，在訓練后足三里區(qū)域溫度有所下降，但下降的溫度較少，訓練前后比較沒有顯著性差異，當實施熱敏灸5 min后,顯示足三里區(qū)域溫度有較大幅度的提高，平均可以提高4 ℃以上，與訓練前和訓練后比較均有顯著性提高，對于比較穩(wěn)定的皮膚溫度來說有較大的幅度的提高，而在實施熱敏灸20 min后穩(wěn)定依然維持較高的水平與運動前和運動后比較有顯著性差異，顯示熱敏灸可以將熱以輻射的形式傳遞給皮膚、肌肉，從而使足三里區(qū)域的溫度升高，使實施熱敏灸后在足三里區(qū)域出現(xiàn)較大范圍的熱區(qū)域，如圖1—圖4所示白色區(qū)域，顯示熱敏灸提高了足三里區(qū)域的溫度，溫度的提升主要是來自灸的熱量輻射到足三里區(qū)域，這對于機體來說是一個熱的刺激.

3 討論

3.1 運動與免疫失衡

超量負荷運動可使機體IFN-γ介導(dǎo)的細胞免疫機能相對下降[14-16]，促使Th0向Th1細胞分化，進一步的研究發(fā)現(xiàn)IL-12促進Th1細胞的分化，增加IFN-γ產(chǎn)生，參與細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在防御細胞內(nèi)病原菌的感染、腫瘤免疫和自身免疫疾病中發(fā)揮著重要的作用，而IL-4促進Th2細胞的分化，產(chǎn)生IL-4、IL-5和IL-10等細胞因子，參與機體的體液免疫應(yīng)答，在防御細胞外病原菌、某些自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病中發(fā)揮著重要的作用.IL-12是由P40和P35這2個亞基組成的異二聚體的細胞因子-P70，IL-12p40在其中作為一受體拮抗劑而起作用，因此，P40基因啟動子的活性及其調(diào)節(jié)機制對于IL-12表達的調(diào)節(jié)更有重要意義.IL-12p40可通過與IL-12p70競爭高親和力的IL-12受體而拮抗具有生物活性的IL-12p70的效應(yīng)，從而扮演了一個IL-12受體拮抗劑的角色[17-19].

本研究采用高強度訓練使機體對該負荷產(chǎn)生了較大的刺激，疲勞出現(xiàn)，使機體對負荷沒有完全適應(yīng)，能量代謝、神經(jīng)機能、心肺機能、內(nèi)分泌等機能發(fā)生變化，而免疫機能也產(chǎn)生了較大的變化，受試者經(jīng)過一周高強度訓練使體細胞免疫的IFN-γ含量較運動前有一定的下降，而體液免疫的IL-4含量變化不明顯，使IFN-γ/IL-4比值較運動前在均值方面有所下降，使Th1/Th2失衡.本研究中7天的集訓可以使IL-12在不同時相發(fā)生變化，變化趨勢與細胞免疫因子IFN-γ一致，而IL-10變化趨勢IFN-γ相反.

3.2 熱敏灸對免疫失衡的作用效果

學者通過熱敏灸“大椎”穴對哮喘大鼠血清IL-4、IFN-γ、免疫球蛋白E含量的研究發(fā)現(xiàn)，熱敏灸可以降低模型大鼠血清IL-4、IgE含量，以及提高IFN-γ/IL-4比值，從而校正提高Th1/Th2失衡，改善哮喘細胞免疫學機制，減輕炎癥反應(yīng)，研究結(jié)果顯示熱敏灸的療效優(yōu)于普通懸灸的對照組[20].在抑郁癥大鼠模型的研究中，采用熱敏灸治療抑郁癥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱敏灸可以使血清E2水平降低、皮質(zhì)酮水平增高，作者認為熱敏灸可能通過調(diào)整體內(nèi)內(nèi)分泌激素水平而實現(xiàn)改善抑郁癥的效果[21].熱敏灸對失眠的研究中，學者采用失眠大鼠模型，觀察熱敏灸對血清促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮、甲狀腺素、生長激素和褪黑素水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清皮質(zhì)酮、甲狀腺素、生長激素和褪黑素含量均下降，而血清中促腎上腺皮質(zhì)激素含量有所升高.可見熱敏灸能緩解失眠大鼠癥狀，可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)激素水平有關(guān)[22].熱敏灸對白癜風的臨床療效研究中，發(fā)現(xiàn)熱敏灸治療局限性白癜風具有很好的療效，可能通過促進血液循環(huán)、調(diào)節(jié)細胞因子IL-2、IL-6、IL-10和TNF-α水平來實現(xiàn)改善免疫機能，從而治療局限性白癜風[23].本研究采用大負荷運動導(dǎo)致機體免疫機能變化，通過熱敏灸干預(yù)足三里，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熱敏灸組在運動后3天IFN-γ/IL-4比值顯著顯著高于對照組，顯示熱敏灸具有矯正過度運動導(dǎo)致的免疫失衡，從細胞因子數(shù)據(jù)可以看出，熱敏灸可以上調(diào)運動后的IFN-γ、IL-12p40的表達，降低IL-10的表達，從而改善機體細胞免疫機能.

3.3 熱敏灸對免疫失衡的作用機制

熱敏灸在實施過程中要不斷和患者或受試者交流，了解灸的位置、熱度是否合適，還要注意是否腧穴熱敏化等.在研究熱敏灸的機制的過程中對熱量的研究出現(xiàn)在紅外熱像儀的誕生，有學者對實施艾灸的穴位進行溫度的測試發(fā)現(xiàn)艾灸不僅可以使灸的部位溫度升高，還可以使其遠端相關(guān)部位出現(xiàn)熱效應(yīng)，在同樣的灸療法，同一部位實施艾灸，在施灸部位的溫度隨時間的變化而變化[24]，有些隨時間的延長溫度逐漸升高，有些是在短短的數(shù)分鐘就可以達到最大溫度，而隨時間的延長溫度不再增加，反而微微下降等，這些溫度隨時間的變化重復(fù)體現(xiàn)了個體差異和對施灸的敏感程度[25].熱敏灸可以使腧穴部位溫度升高，由于熱敏灸還會出現(xiàn)遠端溫熱現(xiàn)象，因此，對遠端的組織器官也有一定的作用,可以改善腧穴周圍及出現(xiàn)遠端溫熱的部位的血液循環(huán)，使氣血運行得以通暢，改善組織的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)，從而改善病灶[26].有學者認為艾灸對機體相關(guān)部位的這種升溫效應(yīng)是由其本身產(chǎn)生的紅外輻射與穴位共振共同作用所致，它們通過激發(fā)反饋調(diào)節(jié)機制，最終使異常機能得到恢復(fù).研究人員通過艾灸家兔“后三里”誘發(fā)胃經(jīng)的循經(jīng)高溫線，并對高溫線和經(jīng)線外組織分別進行組織中乙酰膽堿酯酶、乳酸脫氫酶含量的測定，結(jié)果循經(jīng)高溫線組織中乙酰膽堿酯酶和乳酸脫氫酶活性較經(jīng)線外強，說明艾灸對機體產(chǎn)生的溫熱效應(yīng)可能與腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)減少、能量代謝旺盛、乙酰膽堿增加所引起的血管擴張有關(guān)[27].

在改善血液循環(huán)方面的研究中，通過觀測艾灸后皮膚導(dǎo)電、血氧飽和度和心率，發(fā)現(xiàn)艾灸后較艾灸前上述指標均有顯著性改善，說明艾灸可改善機體血液循環(huán)，加快新陳代謝，使組織的氧利用率提高，加快物質(zhì)交換.此外，艾灸還可促進機體交感神經(jīng)的興奮性，降低血液黏稠度，加快血流速度，增加微循環(huán)灌注量等，因而認為艾灸時產(chǎn)生的升溫效應(yīng)可能與艾灸刺激機體交感神經(jīng)興奮、改善血液循環(huán)、增加組織局部新陳代謝有關(guān)[28].但目前為止，艾灸的紅外效應(yīng)研究還不是很多，所以今后還需要更多、更全面的相關(guān)研究來闡釋艾灸的紅外效應(yīng)機制.

結(jié)合相關(guān)文獻和本研究結(jié)果對熱敏灸提高機能的機制總結(jié)如圖5.

圖5 熱敏灸提高免疫機能的機制示意圖

在實施熱敏灸過程中一名受試者在實施到5 min時出現(xiàn)足三里區(qū)域輕微的刺痛感，持續(xù)時間約有5～8 min，顯示熱敏灸的敏感方式不僅是熱的刺激，還有其他形式的刺激，如穴位共振等現(xiàn)象，這些現(xiàn)象可以改善血液粘稠度，提高機體交感神經(jīng)興奮性、使腎上腺能神經(jīng)遞質(zhì)分泌減少、促進乙酰膽堿分泌使血管擴張、增加組織局部新陳代謝等，這些變化過程可以改善循環(huán)機能、促進免疫機能的代謝、從神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)來調(diào)節(jié)免疫機能，從而使機體免疫在大負荷運動后處于免疫穩(wěn)態(tài)的狀態(tài).本研究只是從熱敏灸提高了施灸部位的溫度，使受試者出現(xiàn)熱敏感的方向探討了熱敏灸改善免疫機能的機制，尚有許多深入的機制未能體現(xiàn)，我們在今后的研究中會在熱敏灸對神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)方面探討其機制.

4 結(jié)論

受試者經(jīng)過一周的大負荷集訓，對機體產(chǎn)生了較大的刺激，主要表現(xiàn)在受試者的細胞免疫機能相對下降，導(dǎo)致Th1/Th2失衡，經(jīng)過對足三里實施熱敏灸的干預(yù)，可以提高IFN-γ/IL-4，通過一定的途徑改善免疫失衡.結(jié)合以上數(shù)據(jù)可以認為，熱敏化足三里穴位可以通過溫熱刺激和紅外輻射等方式刺激穴位，實現(xiàn)改善免疫機能的效果，從細胞因子方面看，熱敏灸可能通過調(diào)節(jié)IL-12及其抑制劑IL-10與IL-12p40的分泌，促進Th1細胞的分化過程，從而糾正過度疲勞所致的Th1/Th2失衡狀態(tài).