余清　聶佳　吳寧　楊清平

(德陽市人民醫(yī)院病理科，四川 德陽　618000)

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148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學檢查診斷分析

余清聶佳吳寧楊清平

(德陽市人民醫(yī)院病理科，四川 德陽618000)

【摘要】目的探討體表淋巴結(jié)針吸細胞學檢查診斷的準確率。方法用7號穿刺針獲取148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學標本，制備細胞涂片及細胞塊并作出細胞學診斷，對148例中無法直接明確診斷的10例可疑惡性腫瘤(黑色素瘤、鱗狀細胞癌、小細胞癌、甲狀腺乳頭狀癌及非霍奇金淋巴瘤)加做免疫細胞化學(immunocytochemistry，ICC)標記后再做出細胞學診斷；148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學與活檢結(jié)果對照，分析針吸細胞學與活檢結(jié)果的符合率并總結(jié)細胞學特點。結(jié)果148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學與活檢結(jié)果符合率為95.95%，細胞塊鏡下特點與組織學相似；148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學中的10例可疑惡性腫瘤通過ICC標記后明確診斷。結(jié)論體表淋巴結(jié)針吸細胞學診斷準確率較高，細胞涂片結(jié)合細胞塊、ICC可對淋巴結(jié)惡性腫瘤作出較準確的定性及分類診斷。

【關(guān)鍵詞】針吸細胞學；體表淋巴結(jié)；細胞塊；免疫細胞化學

體表淋巴結(jié)腫大是臨床常見病癥，本文通過針吸細胞學(fine needle aspiration cytology，F(xiàn)NAC)這種安全、經(jīng)濟、微創(chuàng)、快速的病理學診斷技術(shù)對我院2014年1月～2015年8月148例針吸細胞學檢查結(jié)果進行分析，同時取活檢對照，探討體表淋巴結(jié)針吸細胞學診斷的準確率。

1材料和方法

1.1材料收集我院2014年1月～2015年8月淋巴結(jié)穿刺患者148例，均有活檢對照，其中男性91例，女性57例，男女比例1.61∶1,年齡1～91歲，平均年齡43.5歲，腫大淋巴結(jié)部位：頸側(cè)(包括胸鎖乳突肌處)102例、腋窩5例、鎖骨上26例、腹股溝區(qū)15例。

1.2方法

1.2.1細胞涂片及細胞塊制備使用10ml注射器(7號針頭)，患者取坐位或臥位，充分暴露腫物，局部碘伏消毒皮膚，左手固定腫塊并繃緊皮膚，右手持針刺入腫塊，保持注射器持續(xù)負壓約2～4ml抽吸2～3次(穿刺過程中可改變方向多點穿刺)，穿刺結(jié)束解除負壓迅速拔出針頭，壓迫止血5min。如果穿出物較少時將穿出物從針尖推出到載玻片上直接涂片，涂片完成后將載玻片立即用95%乙醇固定30min進行蘇木素-伊紅染色；如果涂片完成后穿刺針內(nèi)仍有較多細胞成分時將穿刺針放置約5min，待針筒內(nèi)剩余穿出物稍凝固后用4%中性甲醛涮洗出來進行固定、石蠟包埋(細胞塊制作)、切片、常規(guī)HE染色。

1.2.2免疫細胞化學對148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學中的10例無法直接明確診斷的可疑惡性腫瘤用4um厚的細胞塊石蠟切片加作ICC染色：一抗CK5/6、Melan-A、S-100、CD79a、CD20、Ki-67購自福州邁新生物技術(shù)公司，CK、CD56、Syn、CgA、TTT-1、HMB45、LCA購自北京中杉公司；二抗顯色系統(tǒng)購自丹麥Dako公司，采用EnVision二步法，具體操作步驟按照說明書進行，用已知陽性標本作對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.2.3免疫細胞化學結(jié)果判斷CK5/6、CK、Syn、CgA、Melan-A、HMB45、S-100以腫瘤細胞胞漿出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒為陽性(+)，CD56、LCA、CD79a以腫瘤細胞胞膜出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒為陽性(+)，TTT-1、Ki-67以腫瘤細胞核出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒為陽性(+)，CD20以腫瘤細胞胞膜/胞漿出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒為陽性(+)。結(jié)合顯微鏡下細胞特點、ICC結(jié)果及臨床資料綜合分析對148例體表淋巴結(jié)做出準確的針吸細胞學報告。

2結(jié)果

2.1細胞學檢查結(jié)果148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學中，炎性疾病89例，腫瘤59例。炎性疾病包括慢性淋巴結(jié)炎51例、化膿性淋巴結(jié)炎13例、壞死性淋巴結(jié)炎25例；腫瘤包括轉(zhuǎn)移癌51例、惡性黑色素瘤2例、淋巴瘤6例，其中51例轉(zhuǎn)移癌中角化性鱗狀細胞癌18例、腺癌12例、非角化性鱗狀細胞癌10例、甲狀腺乳頭狀癌2例、小細胞癌2例、不能明確類型的惡性腫瘤7例；6例淋巴瘤中非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma,NHL)5例、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)1例。

2.2細胞涂片、細胞塊形態(tài)及ICC結(jié)果，見表1，圖1～10。

表1　細胞涂片、細胞塊形態(tài)及ICC結(jié)果

圖1角化性鱗狀細胞癌 HE×200

Figure 1Keratinizing squamous cell carcinoma HE×200

圖2角化性鱗狀細胞癌CK5/6(+)×100

Figure 2CK5/6 was positive in keratinizing squamous cell carcinoma (×100)

圖3非角化性鱗狀細胞癌 HE×400

Figure 3Nonkeratinizing squamous cell carcinoma (HE×400)

圖4甲狀腺乳頭狀癌 HE×200

Figure 4Papillary carcinoma of the thyroid (HE×200)

圖5小細胞癌 HE×200

Figure 5Small cell carcinoma (HE×200)

圖6小細胞癌TTT-1(+)×200

Figure 6 TTT-1 was positive in Small cell carcinoma (×200)

圖7NHL HE×400

Figure 7NHL (HE×400)

圖8NHL HEv400

Figure 8NHL (HE×400)

圖9NHLCD20(+)×200

Figure 9CD20 was positive in NHL (×200)

圖10NHLCD79a(+)×200

Figure 10CD79a was positive in NHL (×200)

2.3針吸細胞學與組織學檢查對照結(jié)果148例體表淋巴結(jié)針吸細胞學檢查中，與組織學對照正確142例，正確率95.95%(142/148)。針吸細胞學及組織學檢查結(jié)果，見表2。

3討論

體表淋巴結(jié)腫大是臨床常見病，是多種疾病的共同表現(xiàn)。引起淋巴結(jié)腫大的病因很多，主要分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。FNAC檢查是常用的快捷、損傷小、經(jīng)濟、可靠的體表腫塊診斷技術(shù)，幾乎涉及全身所有的器官[1-2]。國內(nèi)文獻報道淋巴結(jié)疾病FNAC診斷總準確率為88.2%～94.4%[3-4]，國外報道總準確率為82%～96%[5-7]，我們總結(jié)的148例FNAC與活檢對照，準確率為95.95%，較國內(nèi)文獻報道略高。我們總結(jié)認為6例誤診的主要原因有以下三方面：①壞死嚴重未查見有效成分：1例鱗狀細胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移僅查見凝固性壞死；2例壞死性淋巴結(jié)炎壞死徹底并伴感染、未見上皮及肉芽腫成分。②漏穿或腫瘤細胞少未查見典型病變:1例壞死性淋巴結(jié)炎未穿刺到干酪樣壞死物質(zhì)；1例HL查見大量反應性淋巴細胞而忽視了極少量的R-S細胞。③腫瘤細胞異型性?。?例T細胞來源的NHL一致的小淋巴細胞被誤診為慢性淋巴結(jié)炎。

表2　148例針吸細胞學及組織學結(jié)果對照

FNAC通常依據(jù)單個細胞形態(tài)的異性性來診斷，缺乏組織學結(jié)構(gòu)，對于一些低分化腫瘤細胞的診斷很困難，我們在穿刺涂片后將針筒內(nèi)剩余標本進行4%中性甲醛固定制備細胞塊，操作簡單效果較好，余小蒙等[8]介紹的一種凝血酶與血清黏集法適用于穿出物較少的細胞塊制備。細胞塊切片背景清晰、細胞聚集、可連續(xù)切片與組織學形態(tài)相似并可在此基礎上做ICC。我們報道的病例中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性鱗狀細胞癌細胞塊中查見的癌巢結(jié)構(gòu)，與組織學形態(tài)十分相似，角化性鱗狀細胞癌中也查見了角化珠結(jié)構(gòu)。值得注意的是在未分化型非角化性鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的FNAC診斷中，細胞學涂片往往僅見少量散在的泡狀核及明顯核仁的腫瘤細胞，與Reed-Sternber細胞相似容易造成誤診或漏診，此時細胞塊的制備顯得尤為重要，不僅可以顯示出癌巢結(jié)構(gòu)必要時還可在其基礎上做CK等上皮性標記輔助診斷。細胞涂片結(jié)合細胞塊及ICC檢測可以明確疾病的類型，提高FNAC的診斷準確率，對部分有典型形態(tài)學特征的轉(zhuǎn)移癌還可以起到提示原發(fā)灶的作用，如淋巴結(jié)穿刺細胞塊中出現(xiàn)分枝乳頭狀結(jié)構(gòu)提示來源于甲狀腺乳頭狀癌的轉(zhuǎn)移，可做TTF-1、CK19、HBME-1、Galectin等ICC標記進一步印證；FNAC形態(tài)與腫大淋巴結(jié)的部位相結(jié)合也可提示原發(fā)灶，如癌巢結(jié)構(gòu)出現(xiàn)在胸鎖乳突肌下腫大淋巴結(jié)中可以提示腫瘤來源于鼻咽部的可能，Kollur SM等[9]也認為頸部腫大淋巴結(jié)FNAC檢查對確定轉(zhuǎn)移性鼻咽癌，包括早期診斷和分期非常有用。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腺癌FNAC診斷中Koss[10]指出一些細微結(jié)構(gòu)的線索可以提示其來源部位：胞漿內(nèi)有黏蛋白的大的印戒細胞常與胃腸道腫瘤有關(guān)，有長長的、柵欄狀的細胞核的柱狀腫瘤細胞出現(xiàn)在壞死碎屑中提示結(jié)腸原發(fā)的腫瘤。

以往單從FNAC形態(tài)學很難對淋巴瘤類型進行分類，我們在日常診斷工作中總結(jié)認為細胞涂片中B細胞來源的NHL顯示出大小一致的幼稚淋巴細胞，細胞染色質(zhì)細顆粒狀、核膜增厚、核仁明顯等鏡下特點較細胞塊鏡下顯著，根據(jù)細胞涂片的形態(tài)特點在細胞塊基礎上做CD79a、LCA、CD20等相關(guān)ICC標記可以對NHL來源于B或是T進行簡單的分型，但對進一步亞型的分類有困難。雖然目前對淋巴瘤診治領(lǐng)域內(nèi)FNAC的臨床用途以及是否有助于臨床治療方案決策等仍存爭議[11]，但因為FNAC吸出的細胞新鮮，非常適合各種分子病理檢測，現(xiàn)國內(nèi)外有較多相關(guān)方面的文獻報道[12-14]?；顧z標本通過甲醛固定可使結(jié)核桿菌死亡，F(xiàn)NAC無需甲醛固定，不僅減少開放活檢數(shù)量、減輕患者的損傷，也可以提高結(jié)核桿菌的陽性檢出率。Bruijnesteijn等[15]報道102例穿刺標本FQ-PCR檢測結(jié)核分枝桿菌的敏感性和特異性分別為71.6%和100%。我們科室對FNAC形態(tài)學支持結(jié)核16例患者行FQ-PCR檢測結(jié)核桿菌陽性率為62.5%，與文獻報道有差距，可能是由于我們統(tǒng)計的病例數(shù)較少或采用不同廠家試劑的緣故。

4結(jié)論

本文結(jié)果顯示，在行FNAC檢查時應盡可能的制備細胞塊，在彌補單靠細胞涂片診斷不足的同時還可以加做相關(guān)ICC及分子檢測，可以對一些淋巴結(jié)惡性腫瘤做出定性及分類的診斷并判斷其來源，提高FNAC診斷準確率，將為腫瘤患者的診斷、分型及治

療方案的制定發(fā)揮更大的作用。

【參考文獻】

[1]王念黎.細針吸取細胞學的進展[J].中華病理學雜志,2006,35(5):306-308.

[2]Bibbo M.Fine needle aspiration of salivary glands[J].Acta Cytol,2009,53(4):367-368.

[3]李銳,汪宇宏,李慶生,等.365例淋巴結(jié)病變細針吸取細胞學檢查診斷分析[J].重慶醫(yī)學,2005,34(9):1389-1390.

[4]孫海斌,鄭曉芙,張劍.頸部淋巴結(jié)針吸細胞學580例診斷分析[J].中華病理學雜志,2008,37(10):693-697.

[5]Ellison E,Lapuerta P,Martin SE.Supraclavicular masses:results of a series of 309 cases biopsied by fine needle aspiration[J].Head Neck,1999,21(3):239-246.

[6]Ramzy I,Rone R,Schultenover SJ,et al.Lymph node aspiration biopsy:diagnostic reliability and limitations:an analysis of 350 cases[J].Diagn Cytopathol,1985,1(1):29-45.

[7]Stewart CJ,Duncan JA,Farquharson M,et al.Fine needle aspiration cytology diagnosis of malignant lymphoma and reactive lymphoid hyperplasia[J].J Clin Pathol,1998,51(3):197-203.

[8]余小蒙,周小鴿,黃受方.針吸標本采集技術(shù)的發(fā)展及應用價值[J].診斷病例學雜志,2008 ,15(4):261-265.

[9]Kollur SM,EI Hag IA.Fine needle aspiration cytology of metastatic nasopharyngeal carcinoma in cervical lymph nodes:comparison with metastatic squamous-cell carcinoma,and Hodgkin’s and non- Hodgkin’s lymphoma[J].Diagn Cytopathol,2003,28:18-22.

[10] Leopold GK,Myron RM,Alberto GA,et al.王國平主譯.KOSS診斷細胞學及其組織病理學基礎[M].西安:世界圖書出版西安公司,2009:1275.

[11] Kuvezdic KG,Aurer I,Ries S,et al.FNA based diagnosis of head and neck nodal lymphoma[J].Coll Antropol,2010,34(1):7-12.

[12] 韋萍,周小鴿,余小蒙,等.IgH基因重排PCR分析在淋巴組織細針穿刺中的輔助診斷價值[J].診斷病理學雜志,2008,15(1):47-50.

[13] Demurtas A,Accinelli G,Pacchioni D,et al.Utility of flow cytometry immunophenotyping in fine-needle aspirate cytologic diagnosis of non-Hodgkin lymphoma:A series of 252 cases and review of the literature[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol,2010,18(4):311-322.

[14] 朱雄增,平波.細針穿刺細胞學檢查在淋巴瘤病理診斷中的意義[J].循證醫(yī)學,2010,10(5):261-264.

[15] Bruijnesteijn Van Coppenraet ES，lfindeboom JA，Prins Ji，et al．Real-time PCR assay using fine-needle aspirates and tissue biopsy specimens for rapid diagnosis of mycobacterial lymphadenitis in children[J].J Clin Microhi01,2004，42：2644-2650.

通訊作者：吳寧，主任醫(yī)師，Tel：08382418446

【中圖分類號】R730.49

【文獻標志碼】A

doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2016.07.030

(收稿日期：2015-11-16；編輯：陳舟貴)

Diagnostic accuracy of fine needle aspiration biopsy of surface lymph node：a study of 148 cases

YU qing,NIE jia,WU Ning,et al

(Department of Pathology,The People’s Hospital of Deyang,Deyang 618000,Scihuan,China)

【Abstract】ObjectiveTo study the diagnostic accuracy of fine needle aspiration biopsy of surface lymph nodes.Methods148 patients with surface lymph node obtained by 7 fine needle aspiration were collected to make cell smear and cell block.10 cases of suspicious for malignancy such as Lymph node metastatic melanoma,squamous cell carcinoma,small cell carcinoma,papillary thyroid carcinoma and non-hodgkin lymphoma were diagnosed by immunocytochemistry,which based on cell block.Then,the agreement rate of needle aspiration cytology with the histology diagnosis and cytological characteristics were observed.ResultsThe concordance rate between the cytologic and corresponding histologic diagnoses was 95.95%.10 cases of suspicious for malignancy were confirmed by immunocytochemistry.ConclusionsFine needle aspiration biopsy of surface lymph node carries a high diagnostic accuracy.For detailed subtyping of certain disease entities,cell block combined with Immunocytochemistry is required.

【Key words】Fine needle aspiration cytology; Surface lymph node; Cell block; Immunocytochemistry