王　龍

(衢州市畜牧獸醫(yī)局，浙江衢州 324200)

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不同稀釋液保存公豬精液的效果試驗(yàn)

王龍

(衢州市畜牧獸醫(yī)局，浙江衢州 324200)

摘要：養(yǎng)豬生產(chǎn)中推廣應(yīng)用人工授精技術(shù)，可明顯提高種豬受胎率，加速豬種改良進(jìn)程和降低疫病風(fēng)險(xiǎn)。本試驗(yàn)采用常用的Modena、BTS液及自配液Ⅰ、自配液Ⅱ等四種稀釋液保存公豬精液的效果試驗(yàn)。結(jié)果表明：自配液Ⅰ保存精液，精子存活時(shí)間達(dá)147 h，其次為BTS液，精子保存時(shí)間達(dá)136 h，且自配液Ⅰ的配種受胎率顯著優(yōu)于Modena和自配液Ⅱ(P<0.05)。

關(guān)鍵詞：稀釋液；保存時(shí)間；公豬精液

豬人工授精技術(shù)目前已在養(yǎng)豬生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用，是豬種改良的有效途徑之一，不僅可明顯提高種豬的受胎率，而且可明顯降低疫病風(fēng)險(xiǎn)和提高養(yǎng)豬生產(chǎn)效益。但是，由于精液保存時(shí)間與稀釋液的品質(zhì)有著明顯關(guān)系。為了實(shí)現(xiàn)液態(tài)精液的長(zhǎng)期保存，達(dá)到跨縣(市)統(tǒng)一供精的目的，擴(kuò)大人工授精技術(shù)的推廣應(yīng)用，筆者對(duì)四種不同稀釋液的保存效果進(jìn)行試驗(yàn)，以便篩選出最佳的稀釋液配方，延長(zhǎng)精液保存時(shí)間，特進(jìn)行本試驗(yàn)。

1材料與方法

1.1藥品及試劑葡萄糖(分析純)、二水檸檬酸三鈉、碳酸氫鈉、EDTA、氯化鈉、氯化鉀、青鏈霉素、雙蒸水等。

1.2精液采集手握法采集5頭繁殖歷史清楚，已達(dá)體成熟，健康無病公豬的精液。4層紗布過濾除去膠體，檢查活率，密度，在37℃環(huán)境下0.5 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室備用。

1.3精液稀釋

1.3.1稀釋液稀釋液為市場(chǎng)常用的Modena[1]和BTS[2]液及本局實(shí)驗(yàn)室自配液Ⅰ和自配液Ⅱ(詳見表1)。

1.3.2稀釋程序?qū)⑾♂屢褐糜谒″佒屑訜嶂?4℃。將采集的公豬精液經(jīng)活力、密度檢查后，分別以1∶1稀釋，室溫下放置2～3 h，用紗布包裹， 置冰箱中備用。

表1　四種不同稀釋液的配方組成

1.4精液品質(zhì)檢查

1.4.1精子活率測(cè)定精液1滴置于載玻片，顯微鏡觀察，采用10級(jí)評(píng)分法評(píng)定。

1.4.2精子畸形率測(cè)定采用凡那他氏鍍銀法染色。精液1滴抹片，自然風(fēng)干，滴胡氏液固定1 min，水洗10 s后將染色液滴于載玻片上，緩慢加熱氣化，水洗30 s。加0.25%硝酸銀2～3滴，滴氨水1滴，左右搖晃，產(chǎn)生渾濁黃褐色，酒精燈加熱，產(chǎn)生白霧狀為止。水洗，干后鏡檢。

1.4.3精子頂體完整率檢測(cè)采用考馬斯亮藍(lán)染色液(R250)50 mg溶于100 mL蒸餾水，煮沸溶解，0.45 μm濾膜過濾。加入高氯酸3.5 mL，配成CBB高氯酸染色液染色。染色前，將染色液置于37℃水浴鍋中預(yù)熱10 min，將精液涂片置于CBB高氯酸染色液中浸染5～7 min；水洗，干后鏡檢。

1.4.4精子質(zhì)膜完整性檢查采用低滲腫脹法檢查。取精液50 μL，置于37℃低滲果糖液1 mL中,混勻。30 min后,取1滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上,顯微鏡下觀察5個(gè)視野，至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子,計(jì)算彎尾精子百分率。

1.4.5精子存活時(shí)間檢測(cè)取精液1 mL置于載玻片，顯微鏡下觀察5個(gè)視野，每隔1 h檢測(cè)一次活率，當(dāng)活率下降一半時(shí)，每隔0.5 h檢查一次，直至活率降為0.4為止。

1.5數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析，每組重復(fù)5次，比較解凍后精子存活率、畸形率、質(zhì)膜完整率、頂體完整率。采用SPSS 13.0軟件one-way ANOVA 進(jìn)行方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同稀釋液對(duì)精子存活時(shí)間的影響試驗(yàn)結(jié)果詳見表2。

表2　不同稀釋液對(duì)精子存活時(shí)間的影響試驗(yàn)結(jié)果

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫字母不同者表示差異顯著(P<0.05)；大寫字母不同者表示差異極顯著(P<0.01)；數(shù)據(jù)無肩標(biāo)或肩標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P≥0.05)，下同。

由表2可見，四種不同稀釋液，精子存活時(shí)間以BTS液和自配液Ⅰ最長(zhǎng)，存活時(shí)間分別為136 h和147 h，與Modena及自配液Ⅱ相比，差異顯著(P<0.05)；自配液Ⅱ保存精子時(shí)間最短，效果最差。

2.2不同稀釋液對(duì)精子形態(tài)的影響試驗(yàn)結(jié)果詳見表3。

表3　不同稀釋液對(duì)精子形態(tài)的影響試驗(yàn)結(jié)果

由表3可見，使用不同稀釋液保存精液24 h后，自配液Ⅱ畸形率顯著高于其他各組(P<0.05)，彎尾率則顯著低于其他各組(P<0.05)。BTS液、Modena液和自配液Ⅰ各組間畸形率和彎尾率差異不顯著(P>0.05)。自配液Ⅰ頂體完整率明顯優(yōu)于其他各組(P<0.05)。

2.3不同稀釋液對(duì)母豬受胎率及產(chǎn)仔數(shù)的影響試驗(yàn)結(jié)果詳見表4。

表4　不同稀釋液對(duì)母豬受胎率及產(chǎn)仔數(shù)的影響試驗(yàn)結(jié)果

由表4可見，采用不同稀釋液稀釋精液，受胎率以自配液Ⅱ效果最差(P<0.05)，自配液Ⅰ效果優(yōu)于BTS和Modena；比較活仔數(shù)和產(chǎn)仔數(shù)，各組差異不顯著(P>0.05)。

3小結(jié)與討論

3.1不同稀釋液的精液稀釋效果稀釋液的主要作用在于擴(kuò)大精液的利用率，增強(qiáng)精子的體外存活時(shí)間[3]。優(yōu)質(zhì)稀釋液不在于稀釋液所含營(yíng)養(yǎng)成分的高低及配方的復(fù)雜性，主要在于稀釋液是否能給精子提供體外存活的條件[4]。影響精子體外生存的條件主要與滲透壓、pH及離子平衡等因素有關(guān)[5]。本次試驗(yàn)表明，雖然自配液Ⅰ配方簡(jiǎn)單，但效果優(yōu)于其他稀釋液，Modena液雖配方復(fù)雜，但稀釋效果并不十分理想。自配液Ⅱ的稀釋效果不夠理想則可能與K、Ca離子失衡等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步研究討論。

3.2安鈉咖在稀釋液中的作用本次試驗(yàn)比較了四種稀釋液的稀釋效果，結(jié)果自配液Ⅰ效果最好。自配液Ⅰ中主要含有安鈉咖，安鈉咖是安息香酸鈉與咖啡因合成的一種藥物,咖啡因能作用于細(xì)胞上的特異受體,抑制磷酸二酯酶活性,增強(qiáng)cAMP，加速細(xì)胞新陳代謝[6-8]。本試驗(yàn)表明,稀釋液中添加安鈉咖,當(dāng)添加量為5 mL時(shí)，其稀釋效果顯著優(yōu)于其他稀釋液。

3.3從精子存活率及配種后受胎率、產(chǎn)仔數(shù)等指標(biāo)看，采用自配液Ⅰ效果最好，且配方簡(jiǎn)單，適于實(shí)際生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

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收稿日期：2014-12-01

中圖分類號(hào)：S828.3+4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1005-7307(2016)04-0003-003