張明澤，姚玉仙，陳世軍

(黔南民族師范學(xué)院 生物科學(xué)與農(nóng)學(xué)院，貴州都勻 558000)

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黔南60份茶樹種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR分析

張明澤，姚玉仙，陳世軍*

(黔南民族師范學(xué)院 生物科學(xué)與農(nóng)學(xué)院，貴州都勻 558000)

摘要:為探索黔南野生茶樹種質(zhì)資源的遺傳多樣性，利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)，對黔南60份茶樹資源進(jìn)行了DNA遺傳多樣性分析。結(jié)果表明：15對引物均顯示多態(tài)性，基因多態(tài)性百分率為98.64%。15對SSR引物共擴增出147個觀測等位基因和73.778 6個有效等位基因，平均每個引物擴增9.8個觀測等位基因，4.918 6個有效等位基因。15個通用位點共產(chǎn)生280種基因型，平均每個位點18.7種基因型。遺傳多態(tài)信息量變異范圍為0.123 9～0.926 8，平均0.572 5，平均觀測雜合度、平均期望雜合度和平均Shannon’s信息指數(shù)分別為0.470 0、0.602 3、1.464 4。經(jīng)聚類分析后，60份材料間遺傳相似系數(shù)在0.205 1～0.863 6之間，以平均遺傳相似系數(shù)0.477 5為閾值，可將60份種質(zhì)資源聚為8個類群，其在分子遺傳水平上的分類結(jié)果與其材料來源分類的結(jié)果并不完全一致，而且材料來源地間遺傳距離與地理距離不存在顯著的相關(guān)性，有少部分同一來源的材料分散在各個類群中。研究認(rèn)為，黔南茶樹資源間的遺傳差異較大，遺傳基礎(chǔ)較寬，具有豐富的遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞:茶；種質(zhì)資源；SSR；遺傳多樣性；黔南

貴州地方茶樹資源分布范圍廣，遺傳多樣性豐富，特異型茶樹資源較多[1]。貴州黔南地理環(huán)境獨特，為茶樹[Camelliasinensis(L.) O. Kuntze]生長創(chuàng)造了多變的環(huán)境條件，經(jīng)過長期演化和選擇形成了豐富多樣的野生、半野生茶樹種質(zhì)資源，這些資源是茶樹品種創(chuàng)新、茶葉品質(zhì)提升的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]，研究及評價其遺傳多樣性對于茶樹高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)和高抗育種具有重要的參考價值。

評價茶樹遺傳多樣性的方法很多，劉聲傳等[3]對貴州野生茶樹種質(zhì)資源研究，張小琴等[4]對黔南貴定鳥王群體種研究，陳正武等[5]對貴州野生、半野生、地方品種變異體及雜交的茶樹種質(zhì)資源研究，結(jié)果都表明茶樹種質(zhì)資源的生化成分或品質(zhì)性狀存在豐富的多樣性和遺傳變異。由于茶樹是異花授粉多年生植物，在長期演化中又是高度雜合體，所以傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定周期長、易受生產(chǎn)習(xí)慣和環(huán)境的影響。DNA分子標(biāo)記具有多態(tài)性豐富、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好等特點，且無器官發(fā)育時期的特異性，不受環(huán)境影響，易于分析，因此在種質(zhì)鑒定和遺傳基礎(chǔ)分析中顯示出了較大潛力[6]，如云南、貴州、廣西、浙江等茶樹種質(zhì)資源DNA分子標(biāo)記研究均有報道[7-9]，鄢東海[10]采用RAPD分子標(biāo)記對貴州部分地方茶樹品種資源遺傳多樣性進(jìn)行過研究。但目前，應(yīng)用DNA分子標(biāo)記對黔南野生茶樹資源的研究尚少見報道。

SSR與其他分子標(biāo)記相比，具有多態(tài)性高、多等位性、共顯性、可重復(fù)性高、數(shù)量豐富和對基因組有很好的覆蓋性等特點，并且該技術(shù)簡便、快速、穩(wěn)定性高和等位基因多樣性高，因此在基因組研究中作為一種主要的分子標(biāo)記技術(shù)，已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于遺傳圖譜的構(gòu)建、遺傳多樣性分析和系統(tǒng)學(xué)研究[11]，被認(rèn)為是目前遺傳多樣性分析或種質(zhì)資源鑒定和評價最為有效的工具之一[12 ]。本研究利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)對貴州黔南茶樹資源進(jìn)行遺傳多樣性研究，旨在明確黔南茶樹種質(zhì)資源的親緣關(guān)系，為茶樹育種、雜交親本選擇提供依據(jù)。

表1　供試材料編號及來源

1材料與方法

1.1供試材料

茶產(chǎn)業(yè)是黔南傳統(tǒng)優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，從事茶產(chǎn)業(yè)的相關(guān)企業(yè)和技術(shù)人員較多，各縣市設(shè)置有茶辦等相關(guān)管理職能部門。當(dāng)?shù)貜臉I(yè)人員及茶辦對典型品系有較全面的了解，因此本試驗材料的采集，由各縣市茶辦及當(dāng)?shù)貜臉I(yè)人員提供線索，課題組及當(dāng)?shù)貜臉I(yè)人員協(xié)同采集，共采集黔南地區(qū)典型野生型茶樹種質(zhì)資源60個品系(表1)。樣品夏秋季摘取一芽二葉新梢，保存條件-80 ℃。

1.2方法

1.2.1SSR擴增基因組DNA提取采用改進(jìn)的CTAB[13]法，DNA質(zhì)量和濃度用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測。本試驗引物為SSR熒光引物，由北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成。引物序列參照Kaundun等[14]、金基強等[15]、劉本英[13]、姚明哲[16]的文獻(xiàn)，從中選擇多態(tài)性較高的40對引物，以材料Y1、Y7、Y14、W36、W54基因組DNA作模板，進(jìn)行多態(tài)性篩選，最終選擇了15對引物(表2)。

1.2.2PCR擴增PCR擴增反應(yīng)體系(25 μL)為：40 ng/μL 模板DNA(2.0 μL)、引物(各0.5 μL)、10 mmol·L-1dNTPs (0.5 μL)、10×PCR反應(yīng)緩沖液(2.5 μL)、2UTaqDNA聚合酶(0.5 μL)、ddH2O 18.5(μL)。擴增程序為：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，51 ℃至60 ℃不等退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后在72 ℃延伸10 min。產(chǎn)物4 ℃保存。儀器為：GeneAmp PCR System 9600(Perkin Elmer，USA)。擴增產(chǎn)物采用毛細(xì)管電泳、自動熒光檢測：在96孔上樣板的每個孔中分別加1 μL純化的PCR產(chǎn)物，8.5 μL甲酰胺和0.03 μL ROX500分子量內(nèi)標(biāo)，離心，95 ℃變性5 min，利用DNA測序儀ABI3730(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，USA)進(jìn)行自動熒光檢測。

1.3數(shù)據(jù)處理與分析

利用GeneMapper v 4.0軟件收集電泳結(jié)果數(shù)據(jù)，確定擴增片段長度?；蛐蛿?shù)、觀測等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)、Shannon信息多樣性指數(shù)(I)估計值、材料不同來源地間遺傳一致度(genetic identity)和遺傳距離(genetic distance)，以及F-統(tǒng)計量中的Fit、Fis、Fst用PopGene Ver.1.32軟件分析，根據(jù)軟件處理需要，將統(tǒng)計的DNA片段長度轉(zhuǎn)換為A、B等共顯性分子標(biāo)記基因型數(shù)據(jù)，其中，F(xiàn)it指計算出的基因型的實際頻率與理論期望頻率在所有群體中的偏離程度，F(xiàn)is指基因型的實際頻率與理論期望頻率在亞群體(居群間或物種間)中的偏離程度，F(xiàn)st表示亞群體之間的遺傳分化程度。根據(jù)公式Nm =0.25×(1-Fst)/Fst計算反映基因流強度(Nm)。多態(tài)信息含量(PIC, polymorphism information content)用Powermarker 3.25軟件分析。多態(tài)性條帶數(shù)及多態(tài)性條帶百分率(PPB, percentage of polymorphic bands)利用Excel統(tǒng)計。材料個體間遺傳相似系數(shù)、遺傳距離用軟件NTSYS 2.10e分析，根據(jù)軟件需要，參照夏寒冰等[17]的方法，將不同長度的DNA片段視為一個等位基因，出現(xiàn)該等位基因時賦值“1”，不存在時賦值“0”，建立原始數(shù)據(jù)矩陣。分子系統(tǒng)樹狀圖采用非加權(quán)配對算術(shù)平均法(UPGMA)聚類分析方法構(gòu)建，在軟件中的Matrix comp.plot對聚類結(jié)果和相似系數(shù)矩陣之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。采用TFPGA進(jìn)行Mantel檢測，測定材料來源地地理距離與材料來源地遺傳距離的相關(guān)關(guān)系。

表2　引物信息

2結(jié)果與分析

2.1SSR引物標(biāo)記及材料遺傳多樣性分析

利用篩選出的15對SSR引物，擴增黔南不同地理環(huán)境的60份野生茶樹種質(zhì)資源DNA，結(jié)果顯示，全部樣本中均擴增出譜帶(85～287 bp)，并且具有較好的重復(fù)性和多態(tài)性。遺傳多樣性分析結(jié)果(表3)表明，15對SSR引物共檢測到147個觀測等位基因，等位基因數(shù)量(Na)變化為2～23個，平均等位基因數(shù)為9.8個，其中多態(tài)性基因145個，占總擴增等位基因數(shù)的98.64%。每對 SSR 引物平均有效等位基因數(shù)為4.918 6。共檢測到280個基因型，基因型數(shù)變化為2～45個，平均基因型數(shù)18.7個。觀測雜合度(Ho)變幅在0.000 0～0.850 0之間，期望雜合度(He)變幅在0.128 2～0.938 8之間，平均觀察雜合度(0.470 0)小于平均期望雜合度(0.602 3)。多態(tài)信息含量(PIC)變化范圍較大，最小值為0.123 9，最大值為0.926 8，平均0.572 5；Shannon信息指數(shù)(I)變幅在0.309 9～2.862 2之間，平均1.464 4。不同的數(shù)據(jù)指標(biāo)表明15對茶樹SSR引物能有效揭示黔南60份野生茶樹資源遺傳多樣性，其中5個SSR引物(QNSSR02、QNSSR04、QNSSR06、QNSSR18、QNSSR23)的I≥1.5、PIC≥0.8及Na≥10，為最有效的引物。

數(shù)據(jù)表明，黔南60份野生茶樹資源具有豐富的遺傳多樣性。有效等位基因數(shù)與等位基因變異頻率相關(guān)聯(lián)。有效等位基因數(shù)與Shannon’s信息指數(shù)的變化趨勢大體一致，有效等位基因數(shù)較大的SSR位點其Shannon’s信息指數(shù)也較大，Shannon’s信息指數(shù)比有效等位基因數(shù)更能反映群體的遺傳多樣性程度，可作為更好的評判指標(biāo)。

表3　SSR引物擴增結(jié)果及多態(tài)性信息

2.2不同來源材料遺傳分化分析

對材料的不同來源地(都勻、貴定、獨山、惠水、三都、龍里、羅甸、甕安、平塘、福泉)間遺傳分化進(jìn)行分析，結(jié)果(表4)表明，同一來源地內(nèi)基因多樣性(Fis)平均值為-0.040 8，多數(shù)位點表現(xiàn)雜合體偏高；不同來源地間基因多樣性(Fit)平均值為0.193 6，表明黔南野生茶樹資源總體雜合子不足。不同來源地間遺傳分化系數(shù)(Fst)為0.225 2，表明22.55%的遺傳分化系數(shù)存在于材料不同來源地間。材料不同來源地間基因流(Nm)平均值為0.860 1，基因流較小，說明不同來源地間基因交流程度較低。

2.3不同來源材料遺傳一致度和遺傳距離分析

對材料的不同來源地(都勻、貴定、獨山、惠水、三都、龍里、羅甸、甕安、平塘、福泉)間遺傳一致度和遺傳距離進(jìn)行分析結(jié)果(表5)表明，各來源地間遺傳一致度范圍為0.643 0～0.943 9，遺傳距離范圍為0.057 7～0.441 6。都勻與貴定的遺傳一致度最大(0.943 9)，遺傳距離最小(0.057 7)，說明都勻與貴定間材料的遺傳背景較相似，親緣關(guān)系較近。而三都與羅甸的遺傳一致度最小(0.643 0)，遺傳距離最大(0.441 6)，說明三都與羅甸間材料的遺傳背景有較大差異，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。總體來說，10個來源地的遺傳一致度都在0.64以上，說明所有來源地之間的遺傳分化整體比較低，這也印證了本研究2.2中‘遺傳變異主要存在于同一來源地內(nèi)而非來源地之間’結(jié)論。利用Mantel檢測分析了茶樹資源10個來源地遺傳距離與地理距離的相關(guān)性，結(jié)果表明來源地間遺傳距離與地理距離不存在顯著的相關(guān)性(r=0.209 7，P>0.05)。

表4　材料來源地間的遺傳分化

表5　材料來源地間遺傳一致度(對角線以上)和遺傳距離(對角線以下)

2.4不同供試材料間的親緣關(guān)系

根據(jù)SSR標(biāo)記計算60份供試材料間的遺傳相似系數(shù)介于0.205 1～0.863 6之間，平均為0.477 5，其中來自惠水的種質(zhì)材料W40與來自三都的W41之間的相似系數(shù)最大，為0.863 6，遺傳距離小，親緣關(guān)系最近；相反來自都勻的種質(zhì)材料Y32與來自平塘的W57之間的相似系數(shù)最小，為0.205 1，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。各材料間UPGMA聚類(圖1)結(jié)果進(jìn)行cophenetic correlation分析，相關(guān)系數(shù)為0.691 9，說明聚類效果較好。在遺傳相似系數(shù)為0.477 5處，60份茶樹資源被聚為8個類群，第Ⅰ類群共33份種質(zhì)材料(都勻18份、貴定8份、獨山2份、龍里2份、羅甸1份、甕安1份、福泉1份)；第Ⅱ類群共17份種質(zhì)材料(平塘5份、都勻4份、惠水3份、貴定2份、獨山1份、龍里1份、羅甸1份)；第Ⅲ類群只有來自都勻的1份種質(zhì)材料；第Ⅳ類群共有3份種質(zhì)材料，全部來自獨山；第Ⅴ類群只有來自都勻的1份種質(zhì)材料；第Ⅵ類群共3份種質(zhì)材料(三都2份、惠水1份)；第Ⅶ類群只有來自平塘的1份種質(zhì)材料；第Ⅷ類群只有來自獨山的1份種質(zhì)材料。以遺傳相似系數(shù)0.520 0為閾值，第Ⅰ類群和第Ⅱ類群可細(xì)分為3個亞群，第Ⅵ類群可細(xì)分為2個亞群。材料Y20、Y32、W51、W55分別單獨聚類，說明它們與其他地方茶樹種質(zhì)資源間的遺傳差異較大，其余種質(zhì)資源基本按照地域優(yōu)先聚類。在育種過程中盡量選擇第Ⅰ和第Ⅱ這兩個核心類群的材料作為親本，以增加優(yōu)良性狀的基因交流頻率。

材料編號同表1圖1　基于SSR標(biāo)記的60個供試材料的UPGMA聚類圖Materials codes are same as Table 1.Fig. 1　Dendrogram obtained using UPGMA based on SSR marker for 60 tea germplasms

3討論

茶樹種質(zhì)資源及遺傳育種研究以遺傳多樣性為基礎(chǔ)，從而選育新的優(yōu)良品種。SSR分子標(biāo)記技術(shù)在茶樹遺傳多樣性及種質(zhì)鑒定研究方面應(yīng)用廣泛，本研究利用該技術(shù)揭示了黔南地區(qū)60份野生茶樹種質(zhì)資源的遺傳多樣性水平，篩選出15對SSR核心引物。多態(tài)性信息量PIC為評價引物多態(tài)性的重要指標(biāo)，當(dāng)PIC>0.5時，該位點為高度多態(tài)位點；當(dāng)0.250.5的有8對，占總量的53.3%；0.25

相似系數(shù)平均值是用來比較不同群體遺傳多樣性大小的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示茶樹種質(zhì)資源間遺傳相似系數(shù)變化范圍為0.205 1～0.863 6，平均為0.477 5，相似系數(shù)范圍較大，表明資源間遺傳基礎(chǔ)較寬。牛素貞等[19]研究貴州黔南地區(qū)茶樹地方品種的EST-SSR遺傳多樣性發(fā)現(xiàn)Na、Ne、Ho、He和PIC的平均值分別為3.970 0、3.120 0、0.620 0、0.690 0和0.610 0，這與本研究結(jié)果有所區(qū)別，可能是由于使用的引物種類不同、供試材料不同以及采用分辨率更高的毛細(xì)管電泳所致[20]。本研究60份野生茶樹種質(zhì)資源在遺傳相似系數(shù)0.477 5處分為8個類群，其在遺傳水平上的分類結(jié)果與其材料來源分類的結(jié)果并不完全一致，材料來源地間遺傳距離與地理距離不存在顯著的相關(guān)性，有少部分同一來源地的材料分散在各個類群中，這與Yao等[21]研究西南地區(qū)茶樹資源的結(jié)果有些類似，可能是因為引種交流導(dǎo)致少部分基因在不同地區(qū)間滲入[22-23]。

黔南州是中國十大名茶之一“都勻毛尖”的原產(chǎn)地，茶葉是該地區(qū)主要經(jīng)濟作物之一，目前黔南州茶樹主栽品種的選育主要通過資源引進(jìn)與篩選，自育品種很少。本研究中供試材料所表現(xiàn)出較高的多態(tài)性和較大的遺傳距離，說明該地區(qū)茶樹種質(zhì)資源豐富，遺傳背景復(fù)雜，今后研究的重點在于從這些茶樹種質(zhì)資源中發(fā)掘優(yōu)異的基因資源，進(jìn)行遺傳定位和分子標(biāo)記，為優(yōu)異基因聚合新種質(zhì)的創(chuàng)造奠定基礎(chǔ)，從而促進(jìn)茶樹種質(zhì)資源的創(chuàng)新與利用、新品種選育等研究的進(jìn)一步開展。

參考文獻(xiàn):

[1]鄢東海. 貴州茶樹種質(zhì)資源研究進(jìn)展及野生茶樹資源調(diào)查[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(7):184-187.

YAN D H. Research progress on tea germplasm resources and investigation of wild tea resource in Guizhou[J].JournalofGuizhouAgriculturalSciences, 2009, 37(7): 184-187.

[2]陳亮,楊亞軍,虞富蓮. 中國茶樹種質(zhì)資源研究的主要進(jìn)展和展望[J]. 植物遺傳資源學(xué)報,2004,5(4):389-392.

CHEN L, YANG Y J, YU F L. Tea germplasm research in China: recent progresses and prospects[J].JournalofPlantGeneticResources, 2004, 5(4): 389-392.

[3]劉聲傳,段學(xué)藝,趙華富,等. 貴州野生茶樹種質(zhì)資源生化多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報,2014,15(6):1 255-1 261.

LIU S C, DUAN X Y, ZHAO H F,etal. Biochemical diversity analysis of wild tea germplasms in Guizhou[J].JournalofPlantGeneticResources, 2014, 15(6): 1 255-1 261.

[4]張小琴,周富裕,楊春,等. 貴定鳥王種茶樹資源農(nóng)藝性狀和品質(zhì)性狀多樣性分析[J]. 分子植物育種,2015,13(2):415-423.

ZHANG X Q, ZHOU F Y, YANG C,etal. Diversity of tea germplasm resource (Camelliasinensis‘Guiding-niaowangzhong’) revealed based on agronomic and quality traits[J].JournalofMolecularPlantBreeding, 2015, 13(2): 415-423.

[5]陳正武,陳娟,龔雪,等. 28份貴州茶樹種質(zhì)資源的生化成分多樣性分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2015,28(4):1 517-1 523.

CHEN Z W, CHEN J, GONG X,etal. Diversity analysis for biochemical components of 28 tea germplasm resources in Guizhou[J].SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences, 2015, 28(4): 1 517-1 523.

[6]劉本英,王麗鴛,周健,等. 云南大葉種茶樹種質(zhì)資源ISSR指紋圖譜構(gòu)建及遺傳多樣性分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報,2008,9(4):458-464.

LIU B Y, WANG L Y, ZHOU J,etal. Fingerprinting construction and genetic diversity analysis of Yunnan Dayezhong tea germplasm resources by ISSR markers[J].JournalofPlantGeneticResources, 2008, 9(4): 458-464.

[7]劉本英,李友勇,孫雪梅,等. EST-SSR分析云南茶樹資源的遺傳多樣性和親緣關(guān)系[J]. 核農(nóng)學(xué)報,2010,24(5):956-967.

LIU B Y, LI Y Y, SUN X M,etal. Genetic diversity and relationship of tea germplasm in Yunnan by EST-SSR markers analysis[J].ActaAgriculturaeNucleataeSinica, 2010, 24(5): 956-967.

[8]喬小燕,喬婷婷,周炎花,等. 基于EST-SSR的廣東與廣西茶樹資源遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳分化比較分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(16):3 297-3 311.

QIAO X Y, QIAO T T, ZHOU Y H,etal. Comparative analysis of genetic structure and differentiation of Guangdong and Guangxi tea germplasms based on EST-SSR markers[J].ScientiaAgriculturaSinica, 2011, 44(16): 3 297-3 311.

[9]王麗鴛,姜燕華,段云裳,等. 基于SSR分子標(biāo)記的龍井群體種的遺傳多樣性及遺傳分化研究[J]. 茶葉科學(xué),2011,31(1):40-44.

WANG L Y, JIANG Y H, DUAN Y S,etal. Genetic diversity and differentiation of Longjing tea population based on SSR markers[J].JournalofTeaScience, 2011, 31(1): 40-44.

[10]鄢東海,劉聲傳,羅顯揚,等. 貴州地方茶樹品種資源遺傳多樣性RAPD分析[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報,2015,31(19):30-34.

YAN D H, LIU C S, LUO X Y,etal. Analysis of genetic diversity with RAPD markers for local tea populations in Guizhou[J].ChineseAgriculturalScienceBulletin, 2015, 31(19): 30-34.

[11]王麗鴛,姜燕華,段云裳,等. 利用SSR分子標(biāo)記分析茶樹地方品種的遺傳多樣性[J]. 作物學(xué)報,2010,36(12):2 191-2 195.

WANG L Y, JIANG Y H, DUAN Y S,etal. Genetic diversity of tea landraces using SSR markers[J].ActaAgronomicaSinica, 2010, 36(12): 2 191-2 195.

[12]許蘭杰,侯起嶺,侯春雨,等. 不同抗蚜性小麥品種(系)的遺傳多樣性SSR標(biāo)記分析[J]. 華北農(nóng)學(xué)報,2014,29(5): 119-124.

XU L J, HOU Q L, HOU C Y,etal. Genetic diversity analysis of wheat varieties with different aphids-resistant by simple sequence repeat (SSR) markers[J].ActaAgriculturaeBoreali-Sinica, 2014, 29(5): 119-124.

[13]劉本英. EST-SSR和ISSR分子標(biāo)記在云南茶樹資源中的應(yīng)用研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,2009.

[14] KAUNDUN S S, MATSUMOTO S. Heterologous nuclear and chloroplast microsatellite amplification and variation in tea,Camelliasinensis[J].Genome, 2002, 45(6): 1 041-1 048.

[15]金基強,崔海瑞,龔曉春,等.用EST-SSR標(biāo)記對茶樹種質(zhì)資源的研究[J].遺傳,2007,29(1):103-108.

JIN J Q, CUI H R, GONG X C,etal. Studies on tea plants (Camelliasinensis) germplasms using EST-SSR marker[J].Hereditas(Beijing), 2007, 29(1): 103-108.

[16]姚明哲.利用ISSR和EST-SSR標(biāo)記研究中國茶樹資源的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)[D].杭州:浙江大學(xué),2009.

[17]夏寒冰,盧寶榮.共顯性分子標(biāo)記基因型數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為二元型數(shù)據(jù)的處理軟件及其在研究種質(zhì)資源遺傳多樣性中的意義[J].植物遺傳資源學(xué)報, 2009, 10(1): 97-102.

XIA H B, LU B R. Software for transforming co-dominant genotype scores into binary data matrix: its application to genetic diversity research[J].JournalofPlantGeneticResources, 2009, 10(1): 97-102.

[18]李賽君,雷雨,段繼華,等. 基于EST-SSR的祁門種群體遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析[J]. 茶葉科學(xué),2015,35(4):329-335.

LI S J, LEI Y, DUAN J H,etal. Analysis of genetic diversity and relationship of Qimen population of tea plants based on EST-SSR markers[J].JournalofTeaScience, 2015, 35(4): 329-335.

[19]牛素貞,劉玉倩,楊錦標(biāo),等. 貴州茶樹地方品種的EST-SSR遺傳多樣性分析[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2012,24(5):836-841.

NIU S Z, LIU Y Q, YANG J B,etal. Analysis of genetic diversity of tea landrace resources in Guizhou by EST-SSR markers[J].ActaAgriculturaeZhejiangensis, 2012, 24(5): 836-841.

[20]劉振,王新超,趙麗萍,等. 基于EST-SSR的西南茶區(qū)茶樹資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析[J]. 分子植物育種,2008,6(1):100-110.

LIU Z, WANG X C, ZHAO L P,etal. Genetic diversity and relationship analysis of tea germplasms originated from south western China based on EST-SSR[J].JournalofMolecularPlantBreeding, 2008, 6(1): 100-110.

[21]YAO M Z, MA C L, QIAO T T,etal. Diversity distribution and population structure of tea germplasms in China revealed by EST-SSR markers[J].TreeGenetics&Genomes, 2012, 8(1): 205-220.

[22]張淑青,劉冬成,劉威生,等. 普通杏品種SSR遺傳多樣性分析[J]. 園藝學(xué)報,2010,37(1):23-30.

ZHANG S Q, LIU D C, LIU W S,etal. Analysis of genetic diversities in apricot cultivars (PrunusarmeniacaL.) with simple sequence repeat (SSR) markers[J].ActaHorticulturaeSinica, 2010, 37(1): 23-30.

[23]宋常美,文曉鵬,楊爾泰. 貴州櫻桃種質(zhì)資源的ISSR分析[J]. 園藝學(xué)報,2011,38(8):1 531-1 538.

SONG C M, WEN X P, YANG E T. Cherry germplasm from Guizhou Province analyzed by ISSR markers[J].ActaHorticulturaeSinica, 2011, 38(8): 1 531-1 538.

(編輯:宋亞珍)

文章編號:1000-4025(2016)06-1117-08

doi:10.7606/j.issn.1000-4025.2016.06.1117

收稿日期:2016-03-25;修改稿收到日期:2016-05-06

基金項目:貴州省普通高校教育質(zhì)量提升重點科研項目(2011017)；黔南民族師范學(xué)院項目(QNSY2010014)

作者簡介:張明澤(1986-)，男，碩士，講師，主要從事茶樹生理生態(tài)和種質(zhì)創(chuàng)新研究。E-mail：710645368@qq.com *通信作者:陳世軍，教授，主要從事植物種質(zhì)資源研究與利用。E-mail：280241879@qq.com

中圖分類號:Q346+.5;Q789;S571.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

Genetic Diversity Analysis of Tea Germplasm in Qiannan Prefecture by SSR Markers

ZHANG Mingze, YAO Yuxian, CHEN Shijun*

(College of Bioscience and Agronomy, Qiannan Normal University for Nationalities, Duyun, Guizhou 558000, China)

Abstract:In this study, fifteen SSR primer pairs with polymorphism were used to assess genetic diversity and relationship of 60 wild tea germplasms from Qiannan prefecture. The results showed that the percentage of polymorphic bands (PPB) was 98.64%. A total of 147 observed alleles and 73.778 6 effective alleles were generated, with a mean of 9.8 and 4.918 6 per locus. Totally 280 genotypes were detected in all materials, with a mean of 18.7 for each polymorphism primer pairs. The polymorphism information content varied from 0.123 9 to 0.926 8, with an average of 0.572 5. The average observed and expected heterozygosities were 0.470 0 and 0.602 3, respectively. The average Shannon’s information index was 1.464 4. The similarity coefficient among 60 tea germplasms was 0.205 1 to 0.863 6. When the similarity coefficient was 0.477 5, eight major groups were generated from all the accessions tested by UPGMA clustering analysis. The results showed that there were no significant correlation between genetic and geographic distance among the tea germplasms, and some individuals in the same population distributed in different groups of the cluster. These results suggested that the materials used in the experiment possessed a broad genetic variation, showing a high level of genetic polymorphism among tea germplasms revealed by SSR markers.

Key words:tea; germplasm resources; SSR molecular mark; genetic diversity; Qiannan prefecture