賈正友（云南省楚雄彝族自治州人民醫(yī)院檢驗科，云南 楚雄 675000）

重癥患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群免疫分型的檢測與臨床意義

賈正友*
（云南省楚雄彝族自治州人民醫(yī)院檢驗科，云南 楚雄 675000）

目的 探討外周血T淋巴細(xì)胞亞群免疫分型在重癥患者中的變化及臨床意義。方法 收集2014年1月至2015年5月我院重癥加強(qiáng)醫(yī)療病房（ICU）的住院患者100例為觀察組，并選擇同期健康體檢人員50例為健康對照組，采用流式細(xì)胞儀分別檢測兩組人員的外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量（絕對計數(shù)）和百分?jǐn)?shù)。另將觀察組按序貫器官衰竭評估（SOFA）標(biāo)準(zhǔn)，分為重癥組（SOFA＜3分）和危重癥組（SOFA≥3分）進(jìn)行比較，并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 觀察組外周血CD3+T淋巴細(xì)胞（簡稱CD3+）、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量（簡稱CD4+）、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量（簡稱CD8+）、CD4+%、CD4+/CD8+比值明顯低于健康對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；而外周血CD+%明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。重癥組和危重癥組比較，危重癥組CD+、CD+細(xì)胞數(shù)量、CD+%、CD+/83444CD8+比值明顯低于重癥組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；而CD4+%明顯高于重癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CD8+變化不明顯（P＞0.05）。結(jié)論 重癥加強(qiáng)醫(yī)療病房（ICU）患者存在外周血T淋巴細(xì)胞水平異常，表明患者機(jī)體免疫功能存在障礙，且免疫功能狀態(tài)與病情危重程度有關(guān)。盡早檢測ICU患者外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)量，對于ICU患者病情的早期診斷、評估及指導(dǎo)臨床治療具有較好的臨床意義。

T淋巴細(xì)胞亞群；絕對計數(shù)；重癥患者；免疫功能

［Abstract］Objective To investigate the changes of T lymphocyte subsets in the peripheral blood and its clinical significance in the patients with severe. Methods Collected in January 2014 to May 2015 in our hospital intensive care unit （ICU）， 100 cases of hospitalized patients as the observation group and select healthy persons 50 cases as healthy control group by flow cytometry were detected two groups of researchers in peripheral blood T lymphocyte subsets （absolute count） and percentage. The observation group according to the standard of the sequential organ failure assessment （SOFA）， for the severe group （SOFA score ＜ 3 of 65 cases） and the critically ill patients group （SOFA score≥ 3 of 35 cases） were compared and statistical analysis. Results The observation group peripheral blood CD3+T lymphocytes （CD3+）， CD3+CD4+T lymphocyte number （CD4+）， CD3+CD8+T lymphocyte number （CD8+）， CD4+，CD4+/CD8+ratio was significantly lower than that in healthy control group， the difference is statistically significant （P＜0.01）； peripheral blood CD8+% was significantly higher than that in the normal control group， the difference is statistically significant （P＜0.01）. Severe group and critically ill group， critical group of disorders of CD3+， CD4+cell number， CD4+， CD4+/CD8+ratio was significantly lower than that of the severe group， there were significant differences，with statistical significance （P＜0.05）； and CD4+were significantly higher than those in the severe group， the difference is statistically significant （P＜0.01）；CD8+change is not obvious （P＞0.05）. Conclusions The abnormal levels of peripheral blood T lymphocytes in the patients with severe enhanced medical wards （ICU） indicated that the immune function of the patients was impaired， and the immune function state was related to the severity of the disease. Early detection of T lymphocyte number in patients with ICU， the early diagnosis， assessment and clinical treatment of ICU patients with disease has good clinical significance.

［Key words］T lymphocyte subsets； Absolute count； Severe patients； Immunity

重癥加強(qiáng)醫(yī)療病房（ICU）患者極大部分都是病因復(fù)雜，病情變化較快，大多存在由一開始的單一器官、系統(tǒng)功能異常和障礙轉(zhuǎn)向多器官、多系統(tǒng)的功能異常和障礙。多器官功能障礙綜合征（MODS）和多器官功能衰竭（MOF）以及膿毒血癥是ICU患者的常見而且危重的并發(fā)癥，MOF病死率可高達(dá)60%～94%［1］。近年來的許多研究表明免疫系統(tǒng)功能的狀態(tài)在ICU患者整個疾病的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸中起到了重要的作用［2］。本文通過研究檢測ICU患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量水平，旨在探討ICU患者的免疫功能變化和疾病的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系，為臨床提供診斷和治療的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2014年1月至2015年5月本院ICU的住院患者100例，其中男62例，女38例；年齡21～88歲，平均年齡（62.5±10.5）歲。所有病例均排除自身免疫性疾病和免疫缺陷性疾病，并且近期也未使用過影響免疫系統(tǒng)功能的藥物。選擇同期本院健康體檢者50例為健康對照組，其中男29例，女21例；年齡23～79歲，平均年齡（60.3±11.6）歲。兩組在年齡及性別構(gòu)成比差異上無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑：流式細(xì)胞儀為美國BD公司的FACSCalibur三色單平臺儀器，檢測試劑

CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP抗體、TrucountTM計數(shù)管、FACS （10X）溶血素、四色熒光標(biāo)準(zhǔn)微球也來自于BD公司，并嚴(yán)格按照使用說明書使用。所有檢測項目均嚴(yán)格執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)量控制，質(zhì)控品來自于BECKMAN COULTER（貝克曼）公司。

1.3 方法：兩組均采用相同的樣本處理及檢測方法，采集清晨空腹肘靜脈血2.0 mL，加入含有EDTA-K2抗凝的專用真空采集管中，充分混勻抗凝。分別在TrucountTM計數(shù)管中加入CD3-FITC/CD4-APC/CD8-PE抗體20 μL，用反向加樣法準(zhǔn)確加入抗凝全血50 μL，充分混勻，室溫避光放置15～20 min后再加入450 μL專用FACS（10X）溶血劑，混勻，室溫放置15 min后上機(jī)運行Multiset程序檢測獲取數(shù)據(jù)，處理好的樣本在2 h內(nèi)檢測完畢。

表1 觀察組與健康對照組CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比較（±s）

表1 觀察組與健康對照組CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比較（±s）

注：*與健康對照組比較，差異具有極顯著意義（P＜0.01）

CD8+（cell/μL）　?。╟ell/μL）　?。╟ell/μL）　?。?）　?。?）觀察組　100　662±381*　321±169*　330±205*　1.25±0.67*　48.39±9.54*　47.63±12.70*對照組　50　1523±385　868±242　594±170　1.53±0.39　56.67±5.84　38.75±5.55 F值　0.000　2.351　2.816　14.463　23.023　30.657 P值　0.000　0.000　0.000　0.007　0.001　0.000組別　例數(shù)　CD3+CD4+CD8++CD4+/CD8+CD4

表2 重癥組與危重癥組CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比較（±s）

表2 重癥組與危重癥組CD3+（cell/μL）、CD4+（cell/μL）、CD8+（cell/μL）、CD4+/CD8+、CD4+%、CD8+%水平比較（±s）

注：*與重癥組比較，差異具有極顯著意義P＜0.01

（cell/μL）　?。╟ell/μL）　　（cell/μL）　?。?）　?。?）重癥組　65　739±388　381±169　344±256　1.42±0.69　54.00±12.13　43.84±12.28危重癥組　35　525±329*　213±105*　304±236　0.95±0.51*　45.20±12.35*　53.20±11.71* F值　0.559　7.028　0.095　4.921　0.451　0.025 P值　0.007　0.000　0.429　0.001　0.001　0.000組別　例數(shù)　CD3+CD4+CD8+++CD4+/CD8CD4+ CD8

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間統(tǒng)計比較采用方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組與健康對照組比較，觀察組外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD4+%、CD4+/CD8+明顯低于健康對照組，差異均具有極顯著意義（P＜0.01）；而外周血CD8+%明顯高于健康對照組，差異具有極顯著意義（P＜0.01）。見表1。

2.2 將觀察組按序貫器官衰竭評估（SOFA）標(biāo)準(zhǔn)，分為重癥組（SOFA＜3分）和危重癥組（SOFA評分≥3分）。兩組比較，危重癥組外周血CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD4+%、CD4+/CD8+明顯低于重癥組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CD8+T淋巴細(xì)胞變化不明顯（P＞0.05）；而CD8+%明顯高于重癥組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

3 討 論

重癥加強(qiáng)醫(yī)療病房（ICU）的住院患者，常常由于重大的創(chuàng)（燒）傷、手術(shù)操作、惡性腫瘤、出血、缺血缺氧、休克、急性中毒等非感染因素和多種病原微生物感染引發(fā)的膿毒血癥所引起?；颊卟∫蝈e綜復(fù)雜，病情危重且變化較快，患者機(jī)體往往處于一個急性應(yīng)激狀態(tài)，主要表現(xiàn)為藍(lán)斑-交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)興奮，腎上腺糖皮質(zhì)激素分泌旺盛。如果這種應(yīng)激狀態(tài)過于強(qiáng)烈而且持續(xù)時間較長，就會引起機(jī)體代謝和器官功能的變化以及組織器官的損傷。甚至?xí)l(fā)多器官功能障礙綜合征（MODS）和多器官功能衰竭（MOF）。此時，患者機(jī)體就會發(fā)生一系列的病理生理變化，包括心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等方面的變化，而免疫系統(tǒng)功能的狀況和ICU患者疾病的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)［3］。MODS/MOF是重癥患者死亡的主要原因之一，因此，研究ICU患者的免疫功能狀況，對于患者的病情判斷以及指導(dǎo)治療就顯得尤為重要。

外周血中T淋巴細(xì)胞來源于骨髓，在胸腺中發(fā)育成熟。T細(xì)胞（抗原）受體與CD3分子復(fù)合物（TCR-CD3）是T淋巴細(xì)胞的特有標(biāo)志。T淋巴細(xì)胞具有高度的異質(zhì)性，根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特性，可以分為CD3+CD4+的輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+Th）和CD3+CD8+的抑制性T淋巴細(xì)胞（CTL）。CD4+T淋巴細(xì)胞在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中對免疫反應(yīng)的啟動、最終表現(xiàn)形式和強(qiáng)弱起著關(guān)鍵作用。CD4+Th細(xì)胞在初始階段接受抗原刺激后，繼續(xù)分化為分泌型的Th細(xì)胞亞群：Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th3細(xì)胞和Th17細(xì)胞。Th1細(xì)胞能分泌γ-干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-2（IF-2）。Th1細(xì)胞的主要功能是增強(qiáng)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)的抗感染、抗腫瘤免疫，在細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，在病理情況下，Th1細(xì)胞還參與遲發(fā)型的超敏反應(yīng)和器官特異性自身免疫性疾病。Th2細(xì)胞分泌一些細(xì)胞因子（IF-4、IF-5、IF-6、IF-10及IF-13），Th2細(xì)胞的主要功能是輔助體液免疫應(yīng)答，并在過敏性疾病和感染性疾病中發(fā)揮重要作用。CTL細(xì)胞通過分泌穿孔素、顆粒酶、淋巴毒素以及通過FasL途徑導(dǎo)致靶細(xì)胞的裂解和凋亡。T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫中最主要的免疫細(xì)胞，幾乎參與了所有的特異性免疫反應(yīng)。既是直接抵御抗原和腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞，又是體液免疫與細(xì)胞免疫反應(yīng)之間的調(diào)節(jié)者［4］。其各亞群之間的動態(tài)平衡，對于維持與調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)尤為重要。

正常情況下，CD3+細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的數(shù)量處于一個動態(tài)平衡并且相互調(diào)節(jié)的狀態(tài)。CD4+/CD8+的值反映了機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)，CD4+/CD8+明顯降低、說明機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)［5-6］。本文研究顯示，ICU患者外周血CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD4+%、CD4+/CD8+明顯低于健康對照組，CD8+%明顯高于健康對照組，說明患者的免疫功能明顯低下，細(xì)胞免疫功能處于明顯抑制狀態(tài)。其機(jī)制可能為：當(dāng)機(jī)體遭受嚴(yán)重創(chuàng)（燒）傷、惡性腫瘤、急性中毒、休克、感染后所致膿毒癥等，T淋巴細(xì)胞對特異性抗原刺激無增殖性反應(yīng)，大量的T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡。凋亡清除了大量活化的T淋巴細(xì)胞，使誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞克隆無反應(yīng)，患者淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，患者機(jī)體的特異性免疫功能處于抑制狀態(tài)，而非特異性免疫功能則呈高度活躍狀態(tài)；另一方面，一些嚴(yán)重的病因使得CD4+T淋巴細(xì)胞分化異常，CD4+/CD8+比值失衡，Th1細(xì)胞/Th2細(xì)胞平衡狀態(tài)發(fā)生漂移，其分泌的細(xì)胞因子也隨即發(fā)生改變，結(jié)果導(dǎo)致了機(jī)體免疫功能的障礙［7］。這樣一來，ICU的患者就很容易喪失對遲發(fā)型過敏反應(yīng)的能力、清除病原體無力、容易引起醫(yī)源性感染和罹患惡性腫瘤以及病情遷延不愈，甚至惡化。本研究中，觀察組CD8+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)量較對照組明顯降低，而CD8+的百分比明顯升高，是因為觀察組中總T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)量明顯降低所致，并無矛盾之處。另外，本研究還顯示，危重癥組較重癥組患者外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量、CD4+百分比、CD4+/CD8+明顯降低，CD8+的百分比明顯升高，說明危重癥組比重癥組免疫功能障礙更嚴(yán)重，從而說明患者病情越嚴(yán)重，機(jī)體的免疫功能抑制越嚴(yán)重［8］，患者的預(yù)后更差。當(dāng)然，由于條件所限，未能同時進(jìn)行如淋巴細(xì)胞亞群中B細(xì)胞、NK細(xì)胞以及免疫球蛋白，補(bǔ)體等的檢測是本研究的不足之處，如能進(jìn)行，將會對ICU患者的免疫功能監(jiān)測更客觀和全面。

綜上所述，ICU患者存在免疫功能障礙，盡早和動態(tài)對其外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，對于ICU患者病情的判斷、指導(dǎo)綜合治療具有重要的臨床意義。

［1]邱海波，周韶霞.多器官功能障礙綜合征現(xiàn)代治療［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2001:8-11.

［2]陳永斌，張敏珍，楊國輝.細(xì)胞免疫功能測定在危重癥患者中的臨床意義［J/CD］.中國危重癥醫(yī)學(xué)雜志:電子版，2010，3（6）:384-388.

［3]曹相原.重癥醫(yī)學(xué)教程［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2014:55-83.

［4]金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)［M］.5版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:101-107.

［5]陳紅芳，王香梅，羅建勤，等.腦出血體液免疫變化及其臨床意義［J］.中國危重病急救醫(yī)學(xué)，2005，17（3）:177-179.

［6]路靜.外周血T細(xì)胞亞群檢測在惡性腫瘤中的價值［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2014，8（20）:35-36.

［7]張慶紅，姚詠明.進(jìn)一步重視創(chuàng)（燒）傷膿毒癥的免疫監(jiān)控［J］.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2014，23（2）:125-128.

［8]戴凌燕，章義利，程碧環(huán).T淋巴細(xì)胞亞群變化與膿毒癥發(fā)病的關(guān)系［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2014，12（5）:715-716.

Detection and Clinical Significance of T Lymphocyte Subsets in Peripheral Blood in Severe Patients

JIA Zheng-you
（Department of Laboratory， Chuxiong People's Hospital， Chuxiong 675000， China）

R446

B

1671-8194（2016）18-0008-03

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