羅 宏,段翠翠,趙玉娟,高 磊,李盛鈺
(1.長(zhǎng)春大學(xué)教育學(xué)院,長(zhǎng)春130022;2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院產(chǎn)品加工研究所,長(zhǎng)春130124)
植物乳桿菌C88聯(lián)合香菇多糖對(duì)腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用
羅 宏1,段翠翠2,趙玉娟2,高 磊2,李盛鈺2
(1.長(zhǎng)春大學(xué)教育學(xué)院,長(zhǎng)春130022;2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院產(chǎn)品加工研究所,長(zhǎng)春130124)
研究了植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)C88和香菇多糖合生元組合物對(duì)正常小鼠腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,植物乳桿菌C88聯(lián)合香菇多糖能降低糞便中水分、氨及pH值,降低血清中DAO、D-LA、ET和TNF-α的水平,促進(jìn)腸道中乳桿菌(Lactobacilli)、雙歧桿菌(Bifidobacteria)等有益菌的生長(zhǎng),降低腸桿菌(Enterobacteria)、腸球菌(Enterococci)等有害菌的數(shù)量,提高短鏈脂肪酸的產(chǎn)量,且植物乳桿菌C88與香菇多糖聯(lián)合使用效果優(yōu)于二者單獨(dú)使用。上述結(jié)果揭示植物乳桿菌C88與香菇多糖形成的合生元組合物具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡和改善腸道功能的作用。
植物乳桿菌;香菇多糖;短鏈脂肪酸;合生元
益生菌(probiotic)是指對(duì)宿主健康有促進(jìn)作用的活的微生態(tài)制劑,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、緩解不耐乳糖癥狀、促進(jìn)腸道消化系統(tǒng)健康等功能[1]。一些不被人體消化或難被消化的碳水化合物可選擇性促進(jìn)腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳桿菌等有益微生物的生長(zhǎng)和增殖,促進(jìn)宿主向健康方向發(fā)展的有益物質(zhì)統(tǒng)稱為益生元(prebiotic)[2]。益生元和益生菌聯(lián)合使用的制劑稱為合生元(synbiotic),同時(shí)兼具益生元和益生菌的功能特點(diǎn)[3]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)于合生元微生態(tài)制劑的研究和的開(kāi)發(fā)都十分活躍,合生元微生態(tài)制劑在改善特異性免疫、高脂血癥、腸道微生態(tài)環(huán)境等發(fā)面發(fā)揮重要的生理作用[4-6]。本實(shí)驗(yàn)研究植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)C88、香菇多糖及二者合生元組合物對(duì)正常小鼠腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用,為開(kāi)發(fā)具有改善腸道平衡狀態(tài)的微生態(tài)制劑提供理論基礎(chǔ)。
1.1 材料與方法
1.1.1 菌株及培養(yǎng)方法
植物乳桿菌(L.plantarum)C88分離自內(nèi)蒙古傳統(tǒng)發(fā)酵奶豆腐,是一株具有優(yōu)良功能特性和發(fā)酵特性的益生菌株。該菌株在含20%(體積分?jǐn)?shù))甘油的MRS培養(yǎng)基中,-80℃凍存[8]。使用前連續(xù)活化傳代后,按1%量接種于MRS液體培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)16 h,離心(6 000 r/min,10 min,4℃),菌泥用滅菌生理鹽水洗滌2次,離心(6 000 r/min,10 min,4℃),用滅菌生理鹽水調(diào)整菌數(shù)1010mL-1備用。
香菇原料由吉林省琿春市神怡菌業(yè)提供。
1.1.2 試劑
乙酸,丙酸,丁酸標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純),小鼠血清二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)ELISA檢測(cè)試劑盒,D-乳酸(D-lactate,D-LA)ELISA檢測(cè)試劑盒,內(nèi)毒素(endotoxin,ET)ELISA檢測(cè)試劑盒,抗腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELISA檢測(cè)試劑盒;本實(shí)驗(yàn)所用的其余試劑均為分析純。
LBS瓊脂培養(yǎng)基(檢測(cè)乳桿菌)、胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂(TSC)培養(yǎng)基(檢測(cè)產(chǎn)氣莢膜梭菌)、雙歧桿菌瓊脂(NNLP)培養(yǎng)基、腸桿菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBDA)培養(yǎng)基、膽鹽-七葉苷-疊氮鈉瓊脂(BEA)培養(yǎng)基(檢測(cè)腸球菌)。
1.1.3 主要儀器
ELx800型全自動(dòng)酶標(biāo)儀,Sorvall Evolotion RC型高速冷凍離心機(jī),HZQ-Q型電熱恒溫培養(yǎng)箱,GC 7890A型氣相色譜儀,Cary 300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),PB-10數(shù)顯pH計(jì)。
1.2 方法
1.2.1 香菇多糖的制備
將香菇原料干燥、粉碎(20目)后,加入10倍量經(jīng)熱水(100℃)提取2次,每次2 h,過(guò)濾,濾液減壓濃縮,2倍體積無(wú)水乙醇沉淀,室溫放置過(guò)夜,離心(6 000 r/min,10 min,4℃),濾液減壓回收乙醇,離心(6 000 r/min,10 min,4℃),凍干得香菇多糖粗品。粗多糖經(jīng)DEAE-纖維素純化,以蒸餾水洗脫,收集含香菇多糖洗脫液,透析(截留分子量為3 500 ku),凍干后得到香菇多糖(lentinan)[9]。
1.2.2 動(dòng)物分組及處理
4周齡雄性昆明種小鼠,體重18~22 g,購(gòu)自長(zhǎng)春市高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心。飼喂常規(guī)飼料,飲用蒸餾水。動(dòng)物室溫度22℃±2℃,濕度55%±5%,每天更換墊料,12 h晝/夜循環(huán)。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為4組,每組25只:空白對(duì)照組(灌胃生理鹽水12 mL/(kg·d)),香菇多糖組(香菇多糖200 mg/(kg·d)),植物乳桿菌C88組(C88菌液1.0×1010mL-1,12 mL/(kg·d)),合生元組(香菇多糖200 mg/kg+C88菌株1.0×1010mL-1,12 mL/(kg·d)),連續(xù)灌胃28 d。
1.2.3 小鼠糞便中水分、氨和pH值含量測(cè)定
小鼠糞便中水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束灌胃前5 d(第24 d~第28 d),各組每天隨機(jī)撿取10粒的小鼠新鮮糞便,105℃干燥至恒重。干燥前后小鼠糞便質(zhì)量差值占干燥前糞便質(zhì)量的百分比即為小鼠糞便水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
小鼠糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定。采用納氏試劑分光光度法檢測(cè)糞便氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)。按照GB/ T18204.25-2000《公共場(chǎng)所空氣中氨測(cè)定方法》中給出氨的化學(xué)檢測(cè)方法制作氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定方法:在實(shí)驗(yàn)第28d取小鼠腸道成型內(nèi)容物0.1 g置于試管中,加入吸收液[C(H2SO4=0.005 moL/L)]5 mL,充分混勻,定容至10 mL,離心(6 000 r/min,10 min,4℃),取上清液1.0 mL,加入9.0 mL吸收液,混勻。依次加入0.1 mL酒石酸鉀鈉溶液和0.5 mL納氏試劑,混勻,室溫下放置10 min。在波長(zhǎng)425 nm下檢測(cè)其吸光度,每組3個(gè)重復(fù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
小鼠糞便中的pH值的測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)第28 d取小鼠新鮮糞便0.1 g,加入1.0 mL蒸餾水充分混勻,離心(8 000 r/min,10 min,4℃)檢測(cè)pH值,每組3個(gè)重復(fù)。
1.2.4 血清指標(biāo)分析
末次灌胃后,小鼠禁食不禁水14 h,摘取小鼠眼球取血,血液在37℃靜置60 min,4℃放置60 min,3 000 r/min離心10 min制備血清,-80℃冰箱保存。按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定小鼠血清中DAO、D-LA、ET、TNF-α的含量。
1.2.5 腸道菌群計(jì)數(shù)
分別于小鼠灌胃第0,7,14,21,28 d每組取小鼠3只;拉椎處死,無(wú)菌條件下取小鼠腸道成形內(nèi)容物于試管內(nèi),滅菌生理鹽水梯度稀釋,分別吸取50 μL涂布于LBS,MRS+NNLP,VRBDA,BEA瓊脂平板上;按照各自的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng),通過(guò)菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色鏡檢等方法鑒定菌群種類并計(jì)數(shù)[10]。
腸道內(nèi)主要菌群鑒定方法:
①乳桿菌(LBS瓊脂)在37℃培養(yǎng)48 h,白色或乳白色G+無(wú)芽孢桿菌。
②雙歧桿菌(MRS+NNLP瓊脂)在37℃厭氧培養(yǎng)48 h,微白色、表面光滑、凸起、G+的叉狀或棒狀菌落。
③腸桿菌(VRBDA瓊脂)在37℃培養(yǎng)24 h,發(fā)酵乳糖、G-的菌落。
④腸球菌(BEA瓊脂)在37℃培養(yǎng)4 h,明顯褐色圈、G+的菌落。
1.2.6 短鏈脂肪酸含量分析
處死小鼠后,取結(jié)腸內(nèi)容物0.1 g,加蒸餾水5 mL溶解并震蕩2 h,離心(10 000 r/min,10 min,4℃),0.45 μm濾膜過(guò)濾。取上清液2 mL依次加入加入50% H2SO4和2.0 mL乙醚,充分混勻,離心(10 000 r/min,10 min,4℃),吸取上層乙醚溶液用于氣相色譜分析[11]。氣相色譜分析采用外標(biāo)法,用乙酸、丙酸和丁酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。氣相色譜測(cè)定條件:DB-FFAP色譜柱(30 m× 0.25 mm,0.25 μm)。升溫程序:初溫120℃,維持5 min,以15℃/min速度升到250℃,保持1 min。FID檢測(cè)器溫度為280℃;載氣為氮?dú)猓至鞅葹?0∶1,流速為2.0 mL/min;待測(cè)樣品進(jìn)樣體積為2 μL[12]。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析,結(jié)果以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)”表示,不同劑量組間與對(duì)照組的比較采用方差分析比較,以P<0.05判斷為具有顯著性差異,P<0.01為具有極顯著性差異。
2.1 對(duì)小鼠糞便理化指標(biāo)的影響
表1為植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物對(duì)小鼠糞便氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)、水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)和pH值的影響。
腸道中不被消化分解的食物蛋白質(zhì)、胰腺及上皮組織等分泌脫落的蛋白質(zhì)作為腸道細(xì)菌生長(zhǎng)的主要氮源[13]。大腸中的細(xì)菌將血液中的尿素分解成微生物蛋白,經(jīng)糞便排出體外[14-16]。由表1可以看出,小鼠連續(xù)灌胃28 d后,與空白對(duì)照組相比,各組小鼠糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所下降。香菇多糖和植物乳桿菌C88單獨(dú)使用均能降低小鼠糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)。而香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元組合物降低小鼠糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù),明顯低于香菇多糖組,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)小鼠糞便中氨質(zhì)量分?jǐn)?shù)降到52.45 μg/g,與空白對(duì)照組比差異顯著(P<0.01)。分析原因可能是香菇多糖作為一種非消化性多糖,有助于降低機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的攝入量,減少糞便中氨的質(zhì)量分?jǐn)?shù),同時(shí)植物乳桿菌C88能促進(jìn)尿素的轉(zhuǎn)運(yùn)及利用,減少了腎臟中氨的排泄量[17]。
在給小鼠灌胃28 d后,與空白對(duì)照組相比,各組小鼠糞便中水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所下降。C88組和香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元組小鼠糞便中水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的明顯降低,小鼠腸道成型糞便呈長(zhǎng)條形,且植物乳桿菌C88降低糞便中水分的作用強(qiáng)于香菇多糖。說(shuō)明植物乳桿菌C88及香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元可能通過(guò)降低小鼠糞便中水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
益生菌在腸道內(nèi)發(fā)酵可產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸、乳酸等有機(jī)酸,為腸黏膜細(xì)胞提供能量,同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)代謝,降低并調(diào)節(jié)腸道內(nèi)pH值,抑制致病菌的生長(zhǎng)和繁殖,調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡[18-19]。在給小鼠灌胃28 d后,與空白對(duì)照組相比,各組小鼠糞便的pH值有所下降。表明香菇多糖和植物乳桿菌C88可能通過(guò)促進(jìn)益生菌的增殖和增加短鏈脂肪酸的產(chǎn)量,降低腸道內(nèi)環(huán)境的pH值,調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡。
2.2 對(duì)小鼠血清指標(biāo)的影響
表2為植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物對(duì)小鼠血清中DAO,D-LA,ET,TNF-α質(zhì)量濃度的影響。
表1 植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物的影響
當(dāng)腸道黏膜受損時(shí),釋放DAO進(jìn)入血液、淋巴及腸腔,從而降低腸黏膜中DAO的活性。因此,在機(jī)體無(wú)創(chuàng)情況下血清中DAO活性能更直接地反映腸上皮細(xì)胞及腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)的損傷程度,是監(jiān)測(cè)腸道屏障功能的標(biāo)志物[20-21]。如表2可知,灌胃28 d后,各組小鼠血清中DAO的含量有不同程度降低,與空白對(duì)照組相比,C88組和香菇多糖+C88組小鼠血清中DAO的含量有顯著性降低(P<0.05);香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元組小鼠血清中DAO含量降低到1.06 U/L,與模型組相比有極顯著差異(P<0.01)。表明香菇多糖、植物乳桿菌C88及香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元均能降低小鼠血清中DAO活性,有預(yù)防腸道屏障功能受損的作用,合生元作用效果優(yōu)于單獨(dú)使用香菇多糖或植物乳桿菌C88。
生理狀態(tài)下,血清中D-乳酸是多種腸道細(xì)菌發(fā)酵的主要代謝產(chǎn)物[22]。當(dāng)腸道發(fā)生急性損傷時(shí),腸道中大部分D-乳酸可通過(guò)受損的腸黏膜進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng),提高血清D-乳酸含量。因此,血清中D-乳酸水平可以及時(shí)地反映出腸黏膜損害程度和通透性的變化[23]。如表2所示,香菇多糖、植物乳桿菌C88以及香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元均能降低血清中D-乳酸含量,與空白對(duì)照組相比有極顯著性差異(P<0.01)。且合生元對(duì)血清中乳酸的降低效果優(yōu)于二者單獨(dú)使用。
內(nèi)毒素在機(jī)體內(nèi)直接作用于生物膜并產(chǎn)生毒性,同時(shí)間接損傷靶器官,刺激細(xì)胞吞噬系統(tǒng)分泌TNF-α、IL-1等多種炎癥遞質(zhì),促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生,進(jìn)而影響機(jī)體細(xì)胞代謝功能以及腸道屏障功能的完整性[24-25]。如表2可知,小鼠灌胃28 d后各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中的ET和TNF-α含量均有不同程度的降低。香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元對(duì)血清中內(nèi)毒素和TNF-α的降低效果最好。單獨(dú)使用植物乳桿菌C88或香菇多糖均能降低小鼠腸道中降低血清中DAO、D-LA、ET和TNF-α的水平,兩者聯(lián)合使用作用效果優(yōu)于單獨(dú)使用,兩者可能存在協(xié)同作用或疊加作用。試驗(yàn)結(jié)果表明,香菇多糖和植物乳桿菌C88聯(lián)合作用可能通過(guò)促進(jìn)小鼠腸道中有益菌的數(shù)量,降低內(nèi)毒素水平,進(jìn)而降低炎癥因子TNF-α的水平,維持小鼠細(xì)胞代謝功能以及屏障功能的完整性。
2.3 對(duì)小鼠腸道短鏈脂肪酸的影響
表3為植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物對(duì)小鼠腸道中短鏈脂肪酸質(zhì)量濃度的影響。
表3 植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物對(duì)小鼠的影響mg/mL
由表3可以看出,28 d實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)小鼠腸道中乙酸、丙酸、正丁酸的質(zhì)量濃度均有不同程度的增加。飲食中寡糖、不消化的淀粉、纖維多糖等物質(zhì)在結(jié)腸腔內(nèi)經(jīng)細(xì)菌酵解生成短鏈脂肪酸,其中乙酸、丙酸和丁酸所占比例高達(dá)85%。大部分的短鏈脂肪酸被黏膜上皮細(xì)胞吸收,轉(zhuǎn)運(yùn)至血液為機(jī)體肝臟、肌肉、心臟等的代謝提供能源。由于碳水化合物底物不同,發(fā)酵產(chǎn)生的短鏈脂肪酸的比例和生理作用也有所不同[26-27]。我們的研究結(jié)果表明,灌胃植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物均能不同程度提高小鼠腸道短鏈脂肪酸的質(zhì)量濃度。香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元組合物能顯著提高小鼠腸道中乙酸、丙酸和丁酸的質(zhì)量濃度。表明香菇多糖通過(guò)促進(jìn)植物乳桿菌C88的增殖,增加小鼠結(jié)腸內(nèi)短鏈脂肪酸的產(chǎn)量,香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元組合物的作用優(yōu)于二者單獨(dú)使用。
2.4 對(duì)小鼠腸道菌群的影響
不同實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道中乳酸菌與雙歧桿菌數(shù)量的變化情況如圖1所示。
圖1 植物乳桿菌C88、香菇多糖及其合生元組合物對(duì)小鼠腸道菌群的影響
由圖1可以看出,灌胃7 d乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量均有不同程度的增加,香菇多糖組小鼠腸道中雙歧桿菌數(shù)量達(dá)到9.10 g-1(對(duì)數(shù)值),C88組小鼠腸道中乳桿菌數(shù)量達(dá)到9.49 g-1(對(duì)數(shù)值)。灌胃14 d時(shí),小鼠腸道中乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量有所下降。灌胃21 d和28 d乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量基本保持平穩(wěn),與灌胃前相比,乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量略有增加。灌胃結(jié)束時(shí),香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元對(duì)乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量增加最明顯,效果優(yōu)于單獨(dú)使用香菇多糖和植物乳桿菌C88。除空白對(duì)照組外,小鼠腸道中腸桿菌和腸球菌隨著灌胃時(shí)間的增加,數(shù)量逐漸下降。到第14天時(shí),C88組和香菇多糖+C88組小鼠腸道中的腸桿菌數(shù)量有明顯下降趨勢(shì),C88組腸球菌數(shù)量明顯降低。灌胃結(jié)束時(shí),香菇多糖-植物乳桿菌C88合生元對(duì)小鼠腸道中腸桿菌和腸球菌數(shù)量降低最明顯,效果優(yōu)于單獨(dú)使用香菇多糖或植物乳桿菌C88。香菇多糖和植物乳桿菌C88對(duì)小鼠腸道菌群有調(diào)節(jié)作用,促進(jìn)腸道有益菌乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量,抑制并降低腸道有害菌腸桿菌、腸球菌數(shù)量,植物乳桿菌C88-香菇多糖合生元合效果優(yōu)于單獨(dú)使用香菇多糖或植物乳桿菌C88。
植物乳桿菌C88和香菇多糖聯(lián)合使用對(duì)小鼠腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用,一方面是由于C88與香菇多糖利于腸道有益菌的繁殖,促進(jìn)短鏈脂肪酸的產(chǎn)生,抑制致病菌的生長(zhǎng),另一方面兩者降低血清中DAO、D-LA、ET和TNF-α的質(zhì)量濃度,改善腸道屏障功能,調(diào)節(jié)小鼠腸道微生態(tài)平衡。植物乳桿菌C88與香菇多糖聯(lián)合使用效果優(yōu)于二者單獨(dú)使用,二者形成的合生元組合物有望開(kāi)發(fā)成具有保健功能的微生態(tài)制劑,具有廣泛的應(yīng)用前景。
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Regulation function of lentinan combined with Lactobacillus plantarum C88 on the gut microflora in mice
LUO Hong1,DUAN Cui-cui2,ZHAO Yu-juan2,GAO Lei2,LI Sheng-yu2
(1.College of special education,Changchun University,Changchun 130022,China;2.Institute of Agro-food Technology,Jilin Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130124,China)
The article studied the regulation function of lentinan combined with Lactobacillus plantarum C88 on the gut microflora in mice. The results showed that L.plantarum C88 combined lentinan could reduce the moisture,ammonia and pH of feces,decrease diamine oxidase,D-lactic acid,endotoxin and TNF-α levels,promote the growth of intestinal lactobacilli,bifidobacteria,etc.,decline the number of enterobacteria,enterococci and other harmful bacteria and raise the production of short chain fatty acids.Moreover,L.plantarum C88 combined with lentinan indicated better effects than that of single use of L.plantarum C88 or lentinan.the synbiotics made by L.plantarum C88 and lentinan play a role in regulating intestinal microecology balance and improving intestinal function.
Lactobacillus plantarum;lentinan;short-chain fatty acid;synbiotics
Q93-33
A
1001-2230(2016)08-0004-05
2016-03-31
國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(CARS-37);吉林省科技廳成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目(20115026);吉林省世行貸款農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全項(xiàng)目(2011-Y35)。
羅宏(1962-),女,副教授,主要從事中醫(yī)臨床教學(xué)與研究。
李盛鈺