肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業(yè)站）

灰樹花的培養(yǎng)特性與液體菌種栽培技術思考

肖建華

（福建省三明市清流縣嵩口林業(yè)站）

隨著經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們對生活質(zhì)量和生活環(huán)境也有了更高的要求，為了滿足社會發(fā)展和人們生活的需求，對生物植被的研究逐漸深入?；覙浠ㄗ鳛榇硇缘纳锞N不僅起著生態(tài)研究的作用，還可以滿足食用和醫(yī)用的需要，為了保證灰樹花的可持續(xù)生長繁殖和人們生活的需求，需要對其進行良好的培養(yǎng)和栽培。本文通過多種實驗的方法簡單的介紹了灰樹花的培養(yǎng)特性，對灰樹花液體菌種栽培技術進行分析，以供參考。

灰樹花；培養(yǎng)特性；液體菌種栽培技術

灰樹花也是貝葉多孔菌、蓮花菇、舞茸等別稱，可以直接食用，也可以形成藥物成分，但是由于其生長環(huán)境特殊，在海拔較高的地區(qū)生長較好，所以我國很多地方不存在灰樹花這一物種；其次灰樹花主要在中溫型的環(huán)境中生長，具有一定的局限性，為了更好的發(fā)揮其經(jīng)濟效益和生態(tài)效益，就需要利用先進的科學技術對其進行培養(yǎng)和栽培。目前我國對灰樹花的研究還處于初步發(fā)展階段，對液體菌種的栽培還不夠成熟，需要進一步的完善和發(fā)展，在自我實驗探索的同時借鑒國外的先進技術和豐富經(jīng)驗，然后結(jié)合我國的環(huán)境和灰樹花的培養(yǎng)特性進一步的改進和完善，使其對灰樹花的培養(yǎng)能夠達到預期的效果，促進其繁殖生長。

1 灰樹花的培養(yǎng)特性

1.1 實驗材料

①PDAA培養(yǎng)基：選擇去皮的馬鈴薯201g，瓊脂21g、葡萄糖21g，然后加入一定量的水，一般來說需要1000mL的水。②馬鈴薯半組合培養(yǎng)基：馬鈴薯半組和培養(yǎng)基所需的馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖以及水的含量沒有的差異，在選擇上可以采用同樣的量，但是需要增加適當?shù)牡鞍纂撕土姿岫溻?，一般來說需要增加5g的蛋白胨和5g的磷酸二氫鉀即可。③MEA培養(yǎng)基：選取12.6g的麥芽糖、20g瓊脂、然后加入1000mL左右的水。④馬鈴薯綜合培養(yǎng)基：采用綜合的方法時需要的馬鈴薯和瓊脂都相對較多，同時也需要增加適量的硫酸鎂和維生素B1等相應物質(zhì)[1]。

進行二級液體菌種培養(yǎng)基的選擇：①選取5%左右的玉米粉、2%左右的葡萄糖以及0.2%的蛋白胨，增加適量的磷酸二氫鉀和硫酸鎂，形成一個玉米粉、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基，并且保證pH值在6～7之間，保證其酸堿性適中。②將玉米粉調(diào)整為馬鈴薯，其他成分含量相同，形成一個馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基。③將玉米粉改為麥麩，增加米糠，其他成分極其相應含量不變，形成的麥麩、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基其酸堿性不變，pH值在6～7之間，呈現(xiàn)穩(wěn)定的狀態(tài)。④將葡萄糖換為蔗糖，仍然使用玉米粉，但是玉米粉的含量需要適當減少，調(diào)整到1%即可，增加2%的蔗糖和3%的酵母膏，將磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分適當降低[2]。⑤直接采用酵母膏，形成一個酵母膏、葡萄糖、蛋白胨培養(yǎng)基時葡萄糖含量降低，增加酵母膏成分，磷酸二氫鉀和硫酸鎂的成分也隨之降低。

1.2 研究方法

在無菌條件下采用實驗的方法對灰樹花的培養(yǎng)特性進行分析。①用一定直徑大小的打孔器竊取質(zhì)地相同、數(shù)量相等的灰樹花菌塊，然后將這些在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的灰樹花菌塊在上述中的PDA、馬鈴薯半組和以及MEA培養(yǎng)基上進行接種工作，為了保證實驗的準確性，一般會進行三次接種；②將培養(yǎng)箱放置于中溫型的環(huán)境中進行培養(yǎng)，定期對灰樹花菌塊的特性進行觀察分析，包括灰樹花的生長速度、菌落的顏色形態(tài)以及周圍區(qū)域的結(jié)構變化等宏觀特性和新生菌絲體、氣生菌絲體的類型和分割情況，擔子和無性孢子的的生長結(jié)構和特點等微觀特性，通過宏觀和微觀的結(jié)合更好的了解灰樹花的特性，為液體菌種的栽培提供一定的參考[3]。

通常對三方面進行檢測，包括酚氧化酶檢測、不同環(huán)境的檢測以及不同pH值對菌絲生長的影響。酚氧化酶檢測研究方法主要是將一定量的愈創(chuàng)木酚的乙醇溶液滴在菌落的邊緣，如果檢測區(qū)域出現(xiàn)變化，呈現(xiàn)紅色狀態(tài)，就說明菌落中有酚氧化酶的存在，如果檢測區(qū)域無明顯變化，酚氧化酶存在的可能性較?。徊煌瑴囟鹊臋z測，通過將接種后的灰樹花菌塊放置于不同的溫度下進行培養(yǎng)，觀察菌絲的生長顏色、形態(tài)等生長情況，然后觀察不同溫度對菌絲生長的影響；不同pH值對菌絲生長的影響，pH值的研究需要采用馬鈴薯綜合培養(yǎng)基，將pH值進行不同酸堿度的設置，然后將接種后的菌落放置中溫的環(huán)境下，用不同的pH值進行調(diào)試，對菌落的生長半徑進行觀察分析。

2 灰樹花液體菌種的栽培技術

2.1 一級種培養(yǎng)基的篩選

根據(jù)材料PDA、馬鈴薯半組合、馬鈴薯綜合培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)試管斜面的一級種，觀察不同培養(yǎng)基對菌落生長速度和生長趨勢的影響；然后將性質(zhì)相同數(shù)量相等的灰樹花菌塊在試管斜面的中心分別進行接種工作，放置中溫型的環(huán)境下重復試驗后，在一定的時間內(nèi)對菌落的生長情況進行觀察分析，從而選擇適合一級種生長的培養(yǎng)基[4～5]。

2.2 二級液體菌落培養(yǎng)基的選擇

上文中提到五種二級液體菌落培養(yǎng)基，將這些培養(yǎng)基注入100mL的三角瓶中，培養(yǎng)基的注入量一般低于三角瓶的容量；然后將PDA培養(yǎng)基上的菌落放入液體培養(yǎng)基中，將其封好后放置在中溫型的環(huán)境中對菌絲的生長情況進行檢測，根據(jù)菌絲的生長情況選擇合適的液體菌落培養(yǎng)基，從而促進菌落的生長。

2.3 三級種栽培袋的制作與培養(yǎng)

栽培袋為菌落的生長提供了良好的環(huán)境和條件，一般分為拌料、裝袋、高壓滅菌、接種和培養(yǎng)這六個步驟。首先要對栽培袋進行高壓滅菌工作，然后將液體菌種導入已經(jīng)滅菌的栽培袋中，將栽培袋封好，放入避光適溫的環(huán)境中，在保證培養(yǎng)箱濕度、溫度適合的前提下進行培養(yǎng)，對菌絲的生長情況進行觀察[6]。

3 實驗結(jié)果

3.1 在PDA培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性

分別對菌落和菌絲在PDA培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性進行觀察。菌落特性表現(xiàn)為生長速度沒有達到快速的標準，呈中速平穩(wěn)的狀態(tài)；生長新區(qū)均勻，沒有出現(xiàn)散落稀疏的狀況，有些氣體菌絲升高的濃密性較好能夠延伸到生長區(qū)的邊緣；菌落的顏色呈現(xiàn)白色狀態(tài)，初期為毛絨狀，經(jīng)過長時間的培養(yǎng)后逐漸轉(zhuǎn)變呈現(xiàn)氈狀，而且愈創(chuàng)木酚在檢測后呈現(xiàn)紅色，說明菌落中含有酚氧化酶。菌絲的特征表現(xiàn)為菌絲的形態(tài)、間隔情況等，通過實驗發(fā)現(xiàn)生長新區(qū)的菌絲呈現(xiàn)透明狀態(tài)，而且大部分為簡單分隔狀；后壁的纖維菌絲與新生區(qū)相比，菌絲寬、分支少，氣生菌絲和新生區(qū)菌絲狀態(tài)差異性很小，這些不同的菌絲和不同的環(huán)境呈現(xiàn)的狀態(tài)也不相同[7]。

3.2 不同溫度對灰樹花菌絲生長的影響

通過在不同溫度下進行培養(yǎng)實驗，發(fā)現(xiàn)在5℃以下菌絲不生長，在中溫環(huán)境下生長速度較快，生長半徑較大，如果溫度過高菌絲的生長又會呈現(xiàn)下滑趨勢，詳情見圖1。

圖1 不同溫度對灰樹花菌絲生長情況的影響

3.3 不同pH值對灰樹花菌絲生長的影響

將 pH 分為不同的等級，為 4、5、6、7、8、9 這六個等級，然后進行不同等級菌落的培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)pH值在4～5之間時菌絲的生長呈上升趨勢，在5～6之間生長情況最好，菌絲生長半徑最大，超過5后呈現(xiàn)下滑趨勢，詳情見圖2。

圖2

4 結(jié)束語

綜上所述，灰樹花的培養(yǎng)特性具有一定的特殊性，傳統(tǒng)的栽培技術已經(jīng)不能滿足灰樹花成活和生長的需要，為了提高灰樹花的成活率好生長繁殖速度，需要完善栽培技術，液體菌種栽培技術能夠生產(chǎn)大量的菌絲，在栽培過程中能夠不僅能夠縮短生長周期，還在一定程度上保證了灰樹花的生長質(zhì)量，所以液體菌種栽培技術的應用也就成為了必然選擇。筆者提出，灰樹花的培養(yǎng)在不同的情況下會呈現(xiàn)不同的特性，本文通過多種培養(yǎng)基的實驗體現(xiàn)了灰樹花的宏觀和微觀特性，從而根據(jù)這些數(shù)據(jù)分析出適合灰樹花生長的培養(yǎng)基；液體菌種栽培技術對于灰樹花的培養(yǎng)和栽培起著至關重要的作用。希望通過本文的簡單分析能夠幫助相關工作人員更好的開展研究工作。

[1]王玉，李政，郝利民，等.培養(yǎng)基優(yōu)化提高灰樹花菌絲體的研究[J].北方園藝，2011，19（4）：190～191.

[2]汪維云，吳梧桐.灰樹花深層培養(yǎng)的生長動力學與計算機模擬[J].生物數(shù)學學報，2002，17（4）：494～498.

[3]杜巍，華澤釗.灰樹花的深層培養(yǎng)工藝及其影響因素的研究[J].農(nóng)業(yè)工程學報，2004，20（2）：231～234.

[4]劉偉民，徐立平，郭春梅，等.灰樹花在米糠培養(yǎng)基上固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)多糖研究[J].食品科學，2010，31（23）：238～242.

[5]李磊，王衛(wèi)國，郭家瑞，等.幾株灰樹花菌株液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)多糖性能的比較[J].河南工業(yè)大學學報（自然科學版），2010，31（2）：71～75.

[6]灰樹花的醫(yī)療保健作用和人工栽培[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2009，27（5）：175～177.

[7]律鳳霞.灰樹花一級菌及栽培菌種培養(yǎng)基的篩選優(yōu)化[J].北方園藝，2010，18（7）：167～168.

S567.3

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1005-7897（2016）08-0091-02

2016-4-9

肖建華（1964-），男，漢族，江蘇人，助理工程師，中專，從事營林生產(chǎn)林改管理護林防火等工作。