譚　霖，楊　鑫，龍　瀅，徐秋萍

(黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州　凱里　556000)

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黔東南州產(chǎn)絞股藍(lán)蘆丁含量的研究

譚霖，楊鑫，龍瀅，徐秋萍

(黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州凱里556000)

摘要：采用高效液相色譜法測(cè)定黔東南州不同產(chǎn)地絞股藍(lán)中蘆丁的含量。色譜柱(Diamonsil C18，5 μl，150×4.6 mm迪馬公司生產(chǎn))，流動(dòng)相：甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)，檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 ml / min；以蘆丁為含測(cè)指標(biāo)測(cè)定絞股藍(lán)中蘆丁含量。絞股藍(lán)中蘆丁在0.204 892 μg～1.229 352 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程y=2 205.5x+25.711，R2=0.999 5 ，平均加樣回收率為103.07 %，RSD %為1.7 %。不同產(chǎn)地絞股藍(lán)中蘆丁含量在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。黔東南州不同產(chǎn)地絞股藍(lán)中蘆丁含量的差異不大。

關(guān)鍵詞：黔東南州產(chǎn)絞股藍(lán)，蘆丁，高效液相色譜法

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絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum(Thumb.)Makino 為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物，又名七葉膽、五葉參、七葉參等。多年生草質(zhì)藤本，蔓生，莖細(xì)弱、分枝，具縱棱及溝，被短柔毛；葉互生，膜質(zhì)，鳥足狀，具3-9枚小葉，通常5-7葉；卷須纖細(xì)，2岐，稀單一；根系分布淺，一般集中于表土150 mm以內(nèi)；花雌雄異株，圓錐花序，雌花圓錐花序遠(yuǎn)較雄花短??；子房球形，2-3室，花柱3枚；漿果，種子卵狀心形，深褐色，2-3粒[1]。全草入藥味苦、寒、歸肺、肝、脾經(jīng)。絞股藍(lán)性寒，味甘苦，無毒，入肺、脾、心、腎經(jīng)，長(zhǎng)于補(bǔ)氣養(yǎng)陰，清肺化痰，養(yǎng)心安神。絞股藍(lán)含有多種藥用成分：皂苷、黃酮、多糖、氨基酸、植物蛋白、甾體、色素、有機(jī)酸、纖維素、葉綠素、木質(zhì)素、微量元素等[2]。研究表明，絞股藍(lán)活性成分具有降血脂、降血糖、調(diào)血壓、延緩衰老、預(yù)防冠心病、抑制癌細(xì)胞、調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能，被譽(yù)為“人間仙草”[3]。絞股藍(lán)對(duì)生長(zhǎng)條件要求低，周期短，易于人工栽培，產(chǎn)量大。目前，以絞股藍(lán)為主要原料開發(fā)出的各種保健飲料、醫(yī)用制劑等不斷增多，品種繁多，深受人們喜愛。本實(shí)驗(yàn)通過建立HPLC法測(cè)定黔東南州不同產(chǎn)地絞股藍(lán)蘆丁的含量，研究得出黔東南州地區(qū)產(chǎn)地絞股藍(lán)蘆丁的含量范圍，為絞股藍(lán)的進(jìn)一步研究提供了一定的參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

儀器：安捷倫1260高效液相色譜儀、G1311C輸液泵、G1316A柱溫箱、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、DAD檢測(cè)器(G1315D)、工作站(Chem Station foy LC systems)；色譜柱Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)；KQ-500DA型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵(常州普天儀器制造有限公司)； 二兩裝高速中藥粉碎機(jī)(瑞安市永歷制造有限公司)；電子天平(梅特勒AE240)。

試劑：甲醇(色譜純)；醋酸(色譜純)；水為超純水；甲醇(分析純)。

供試品：絞股藍(lán)6各批次分別產(chǎn)于貴州省施秉縣、雷山縣、臺(tái)江縣為各兩批。

對(duì)照品：蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為：100080-200707、含量90.5 %)

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1溶劑考察

精密稱取絞股藍(lán)粉末(過4號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入25 ml甲醇、乙醇、50 %甲醇、50 %乙醇，稱定重量，密塞，再分別超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min、20 min、15 min，放冷，再稱定重量，分別補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中分析20 min，結(jié)果甲醇超聲提取30 min的溶液成分較多效果好。

1.2.2流動(dòng)相的考察

本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過對(duì)不同甲醇-1 %冰醋酸比例流動(dòng)相進(jìn)行考查，流動(dòng)相甲醇-1 %冰醋酸(30∶70)進(jìn)行測(cè)定時(shí)，其保留時(shí)間為26 min左右，對(duì)流動(dòng)相甲醇-1 %冰醋酸(50∶50)進(jìn)行測(cè)定時(shí)，其保留時(shí)間為4 min左右，對(duì)流動(dòng)相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)進(jìn)行測(cè)定時(shí)，其保留時(shí)間為12 min左右，峰型較好，樣品圖譜的分離也較好，結(jié)果流動(dòng)相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)時(shí)效果最好見圖1。

圖1　流動(dòng)相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)

1.2.3檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

取蘆丁對(duì)照品和供試液于紫外光區(qū)掃描，結(jié)果得在檢測(cè)波長(zhǎng)為257 nm試對(duì)照品有最大吸收，供試液在257 nm波長(zhǎng)處也有最大吸收且效果好，故選擇257 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.4色譜柱的考查

本實(shí)驗(yàn)對(duì)Dikma C-18(5 μm 4.6×250 mm)，Dikma C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Thermo C-18(5 μm 4.6×250 mm)色譜柱進(jìn)行了考查，結(jié)果Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)效果較好，出峰時(shí)間理想。

2方法建立

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)為流動(dòng)相；流速1.0 ml / min；進(jìn)樣量為10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為257 nm；柱溫為30 ℃；理論塔板數(shù)按蘆丁峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

2.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品0.011 32 g于100 ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，得0.102 446 mg / ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2絞股藍(lán)供試品溶液的制備

精密稱取絞股藍(lán)粉末(過4號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

測(cè)定法分別精密吸取上述供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算蘆丁的含量。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性范圍的考察

精密吸取2.1.3蘆丁對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，按上述2.1.1色譜條件項(xiàng)測(cè)定峰面積，以蘆丁進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=2 205.5x+25.711，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，線性考察見圖2。

圖2　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4穩(wěn)定性考察

精密稱取絞股藍(lán)粉末(過4號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項(xiàng)下條件，按2.2供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h對(duì)蘆丁進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表1。

表1　穩(wěn)定性考察表

由上述測(cè)定結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.5精密度考察

精密稱取絞股藍(lán)粉末(過4號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項(xiàng)下條件，按2.2供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，連續(xù)進(jìn)樣6次對(duì)供試品進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表2。

表2　精密度考察表

由上述測(cè)定結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.6重現(xiàn)性考察

精密稱取絞股藍(lán)粉末(過4號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項(xiàng)下條件，按2.2供試品溶液的制備項(xiàng)下方法，制備6個(gè)樣品，每個(gè)樣品進(jìn)3針，對(duì)蘆丁進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表3。

表3　重現(xiàn)性考察表

由上述結(jié)果表明，此測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

3黔東南州不同產(chǎn)地樣品的測(cè)定

不同批次絞股藍(lán)供試樣品的含量測(cè)定精密稱取絞股藍(lán)藥材粉末(過4號(hào)篩)2份，按照色譜條件及2.2供試品溶液制備方法對(duì)蘆丁進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見圖3、表4。

圖3　黔東南州不同產(chǎn)地樣品的測(cè)定圖譜

樣品名稱平均峰面積蘆丁含量/mg/gRSD/%施秉11064.71.18140.29施秉21038.81.15280.21雷山11165.51.29290.32雷山21178.71.30770.16臺(tái)江11285.21.42620.02臺(tái)江21291.91.43320.08

由上述測(cè)定結(jié)果表明，黔東南州3個(gè)不同產(chǎn)地6個(gè)不同批次絞股藍(lán)藥材中蘆丁的含量有一定差異，但相差不大范圍在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。

4結(jié)果與討論

通過研究建立了一可靠穩(wěn)定的高效液相色譜含量檢測(cè)方法，對(duì)黔東南州3個(gè)不同產(chǎn)地6個(gè)不同批次絞股藍(lán)藥材中的蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定，得出各產(chǎn)地各批次藥材中蘆丁含量不同，其中臺(tái)江產(chǎn)絞股藍(lán)中蘆丁含量最高，雷山產(chǎn)絞股藍(lán)其次，施秉產(chǎn)絞股藍(lán)蘆丁含量最少。結(jié)果表明黔東南州地區(qū)產(chǎn)絞股藍(lán)藥材中蘆丁的含量有一定差異，但相差不大范圍在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。其中同一產(chǎn)地不同批次絞股藍(lán)藥材中蘆丁的含量差異較小。采收時(shí)間與加工處理對(duì)藥材的含量都有一定的影響，總的來說本次實(shí)驗(yàn)為黔東南州產(chǎn)絞股藍(lán)的含量與絞股藍(lán)中蘆丁成分的檢測(cè)方法提供一定的依據(jù)。

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收稿日期：2016-04-13；修回日期：2016-04-16

作者簡(jiǎn)介：譚霖，男，苗族，貴州省天柱縣人，本科，就職于黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心。研究領(lǐng)域：中藥學(xué)。研究方向：中藥材質(zhì)量。

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1003-6563(2016)03-0066-04

Research of rutin content from gynostemma in Qiandongnan

TAN Lin，YANG Xin，LONG Ying，XU Qiuping

(Qiandongnanfoodanddruginspectiontestingcenter，Carey556000，China)

Abstract：By using high performance liquid chromatography(HPLC)method，the content of rutin from different origin gynostemma is determined in qiandongnan，chromatographic column(Diamonsil C18，5 mu l，150×4.6 mm made in di company)，mobile phase：methanol -1 % glacial acetic acid(40∶60)，detection wavelength：257 nm，column temperature：30 ℃，the flow rate：1.0 ml / min.As the rutin index，the content of rutin in gynostemm is determined.The rutin in gynostemma in the range of 0.204 892 μg ～ 1.229 352 μg has a good linear relationship，and the regression equation is y= 2 205.5+25.711x，R2 = 0.999 5.The average sample recovery rate is 103.07 %，and the RSD % is 1.7 %.The Rutin content in gynostemma in different regions is 1.1530 mg / g ～ 1.433 7 mg / g.The difference of the rutin content in different origin gynostemma of Qiandongnan prefecture is not big.

Keywords：Qiandongnan gynostemma production，Rutin，high performance liquid chromatography